醉马草DNA提取方法的对比与优化
发布时间：2021-08-24 05:58
醉马草是一种多年生牧草,为禾本科芨芨草属,常用于机场草坪建植和草原生态恢复,因其重要的经济与生态价值近年来被广泛研究关注。醉马草幼苗含有的酚类、蛋白质等杂质严重影响DNA的提取质量,常规技术不能很好地满足高质量的实验要求。本实验以醉马草幼苗为材料,分别采用SDS、CTAB、高盐法提取醉马草幼苗全基因组DNA。研究发现使用SDS法提取的DNA浓度为176ng·μL-1,提取率为30%,A值为1.7。使用CTAB法提取的DNA浓度为140ng·μL-1,提取率为23%,A值为1.68。使用高盐法提取的DNA浓度为37.7ng·μL-1,提取率为6%,A值为1.1。利用CTAB对提取出的DNA进一步纯化,用琼脂糖凝胶电泳和超微量分光光度计检测DNA的浓度和纯度,通过PCR分析验证优化后CTAB法提取DNA的效果。结果表明各方法纯化后的DNA浓度为:SDS法（223ng·μL-1）﹥CTAB法（219ng·μL-1）﹥高盐法（77ng·μL-1）; A值为:SDS法（1.8）>CTAB法（1.77）﹥高盐法（1.4）,其中DNA浓度较纯化前分别提高27.1%（SDS法）、57.1%（高盐...
【文章来源】：草学. 2020,(05)
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
三种方法提取全基因组PCR扩增产物的琼脂凝胶分析
从表2可以看出，以醉马草鲜样为原料进行DNA提取，取同样多的材料，加入同样多的缓冲液，使用CTAB法提取的DNA浓度均为140ng·μL-1，使用高盐法提取的DNA浓度为37.7ng·μL-1，而使用SDS法提取的DNA浓度为176ng·μL-1，因此可以看出SDS法和CTAB法的提取量远远大于高盐法。并且使用SDS法和CTAB法提取的DNA较少含有蛋白质等小分子杂质，A值一般集中于1.7，其A值远远大于实用高盐法提取的DNA (A值多为1)，由此表明使用SDS法和CTAB法提取DNA的纯度较高。从图1可以看出，由SDS法和CTAB法提取的DNA点样孔清晰，条带亮度相差不多，且无明显拖尾，由此可以看出DNA提取的质量较好;使用高盐低p H法提取的DNA点样孔有弥散现象，且条带亮度较低，故使用此法提取的DNA质量不理想。
从表3可以看出，以三种方法提取的DNA为材料，利用CTAB试剂进行纯化，纯化后使用SDS法提取的DNA浓度提高为223ng·μL-1，使用CTAB法提取的DNA浓度提升为220ng·μL-1，而使用高盐法提取的DNA浓度也升高为77ng·μL-1，与之前相比分别提高了27.1%(SDS法)、57.1%(CTAB法)、51.0%(高盐法)，因此可以看出使用CTAB试剂进行DNA的纯化效果较为明显;而且，纯化后的SDS法和CTAB法提取的DNA的A值集中于1.8，其A值远远大于实用高盐法提取的DNA (A值多为1.35)，由此可以说明纯化后的DNA浓度和纯度较没纯化之前都有了相对的提升。通过图2可以看出，纯化过的SDS和CTAB提取的DNA从条带的亮度和宽度有明显的变化;而使用高盐法提取的DNA经过纯化后质量明显提高，条带亮度较之前亦有明显提高。这说明利用CTAB试剂对DNA的纯化是有效果的，且效果较为明显。
【参考文献】：
期刊论文
[1]甜瓜半粒干种子DNA提取方法的优化[J]. 夏玲,梁昕景,王学林,杨小锋. 南方农业学报. 2019(07)
[2]槜李叶片DNA提取方法探讨[J]. 李白,李军,王蕾,种高军. 浙江农业科学. 2019(01)
[3]决明DNA提取、SRAP-PCR优化及引物筛选[J]. 王静,张跃进,梁宗锁,郭宏波. 西北农业学报. 2014(02)
[4]从干种子中快速获取高质量DNA的高盐提取方法[J]. 张富丽,陶李,佟洪金,刘勇,宋君,尹全,李忆,代晓航,雷绍荣,游米沙. 中国农学通报. 2011(24)
[5]不同方法从大豆不同组织中提取基因组DNA效果的比较[J]. 王振东,孙仓,王惠. 大豆科学. 2008(01)
[6]芨芨草基因组DNA提取与RAPD反应体系优化[J]. 徐海霞,张霞,阎平,杜金洲. 安徽农学通报. 2007(09)
[7]高质量植物基因组DNA的提取[J]. 黄晓丹,张云贵,应铁进. 植物生理学通讯. 2006(02)
[8]现代生物技术在牧草生产中的应用研究[J]. 李琼,周汉林. 草业科学. 2005(10)
[9]三叶木通总DNA提取方法的比较[J]. 张铮,王强. 西北农业学报. 2005(03)
[10]SDS-CTAB结合法提取棉花总DNA[J]. 孙鑫,崔洪志,胡宝忠,郭三堆. 生物技术通报. 2004(05)
本文编号：3359418
【文章来源】：草学. 2020,(05)
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
三种方法提取全基因组PCR扩增产物的琼脂凝胶分析
从表2可以看出，以醉马草鲜样为原料进行DNA提取，取同样多的材料，加入同样多的缓冲液，使用CTAB法提取的DNA浓度均为140ng·μL-1，使用高盐法提取的DNA浓度为37.7ng·μL-1，而使用SDS法提取的DNA浓度为176ng·μL-1，因此可以看出SDS法和CTAB法的提取量远远大于高盐法。并且使用SDS法和CTAB法提取的DNA较少含有蛋白质等小分子杂质，A值一般集中于1.7，其A值远远大于实用高盐法提取的DNA (A值多为1)，由此表明使用SDS法和CTAB法提取DNA的纯度较高。从图1可以看出，由SDS法和CTAB法提取的DNA点样孔清晰，条带亮度相差不多，且无明显拖尾，由此可以看出DNA提取的质量较好;使用高盐低p H法提取的DNA点样孔有弥散现象，且条带亮度较低，故使用此法提取的DNA质量不理想。
从表3可以看出，以三种方法提取的DNA为材料，利用CTAB试剂进行纯化，纯化后使用SDS法提取的DNA浓度提高为223ng·μL-1，使用CTAB法提取的DNA浓度提升为220ng·μL-1，而使用高盐法提取的DNA浓度也升高为77ng·μL-1，与之前相比分别提高了27.1%(SDS法)、57.1%(CTAB法)、51.0%(高盐法)，因此可以看出使用CTAB试剂进行DNA的纯化效果较为明显;而且，纯化后的SDS法和CTAB法提取的DNA的A值集中于1.8，其A值远远大于实用高盐法提取的DNA (A值多为1.35)，由此可以说明纯化后的DNA浓度和纯度较没纯化之前都有了相对的提升。通过图2可以看出，纯化过的SDS和CTAB提取的DNA从条带的亮度和宽度有明显的变化;而使用高盐法提取的DNA经过纯化后质量明显提高，条带亮度较之前亦有明显提高。这说明利用CTAB试剂对DNA的纯化是有效果的，且效果较为明显。
【参考文献】：
期刊论文
[1]甜瓜半粒干种子DNA提取方法的优化[J]. 夏玲,梁昕景,王学林,杨小锋. 南方农业学报. 2019(07)
[2]槜李叶片DNA提取方法探讨[J]. 李白,李军,王蕾,种高军. 浙江农业科学. 2019(01)
[3]决明DNA提取、SRAP-PCR优化及引物筛选[J]. 王静,张跃进,梁宗锁,郭宏波. 西北农业学报. 2014(02)
[4]从干种子中快速获取高质量DNA的高盐提取方法[J]. 张富丽,陶李,佟洪金,刘勇,宋君,尹全,李忆,代晓航,雷绍荣,游米沙. 中国农学通报. 2011(24)
[5]不同方法从大豆不同组织中提取基因组DNA效果的比较[J]. 王振东,孙仓,王惠. 大豆科学. 2008(01)
[6]芨芨草基因组DNA提取与RAPD反应体系优化[J]. 徐海霞,张霞,阎平,杜金洲. 安徽农学通报. 2007(09)
[7]高质量植物基因组DNA的提取[J]. 黄晓丹,张云贵,应铁进. 植物生理学通讯. 2006(02)
[8]现代生物技术在牧草生产中的应用研究[J]. 李琼,周汉林. 草业科学. 2005(10)
[9]三叶木通总DNA提取方法的比较[J]. 张铮,王强. 西北农业学报. 2005(03)
[10]SDS-CTAB结合法提取棉花总DNA[J]. 孙鑫,崔洪志,胡宝忠,郭三堆. 生物技术通报. 2004(05)
本文编号：3359418
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