布鲁氏菌Omp19抗原性研究及内蒙古人间布鲁氏菌病横断面调查
发布时间：2021-08-24 10:05
布鲁氏菌病（Brucellosis,简称布病）是一种由布鲁氏菌（Brucella.spp,简称布氏菌）引起的人畜共患传染病,主要传染源是牛、羊、猪等家畜,其中羊种菌最易感染人。诊断和预防是目前控制该病的有效手段,但可以独立用于布病的诊断方法不足以完善,间接酶联免疫吸附试验（iELISA）操作简单、实验条件要求低、适合广泛推广。随着布病的广泛流行,全国绝大部分省市地区均相继分离到了布氏菌,而按照布病手册进行鉴定时需要有标准菌株做对照,但又存在致病性高、购买和运输难度大等问题,这对工作人员存在很大的风险。布病主要集中爆发在农区和牧区这些地区,对其进行现场调查将会对布病的流行及发展趋势有进一步的了解。为此本研究从诊断方法、生物安全和现场调查三个方面对布病展开了系统的研究。研究—为了完善布病诊断方法,构建了重组质粒pET-30a-omp19,原核表达并纯化了布氏菌Omp19,通过Western-blot验证其抗原性,以该蛋白作为包被抗原,建立检测羊种布氏菌的iELISA,对其重复性和敏感性进行了评价,通过对180份临床羊血清样本进行了检测,并与我国布病诊断标准试管凝集试验（SAT）进行了比较,...
【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
质粒PCRt广増产物电泳图
图1 ornp19基因PCR扩增产物电ectrophoretic profile of PCR productans 2K DNA marker ; 1，2:onipl9 CR鉴定结果荡培养后，提取质粒，初步证明该表达质粒是M 1 2 3 4 5
且得到的片段大小与质粒和目的片段大小一致，推断为pET-30a载体和基因，证明连接成功，见图3。M 1隊图3重组表达质粒pET-30a-onip19的双酶切鉴定Fig3 Identification of recombinant plasmid pET-30a-ompl9 by restriction analysis注：M:Trans 2K plus DNA marker ; 1:軍：組质粒双fiS切恭定2. 3. 1.2.4序列分析将重组质粒送去测序，测序结果显示，插入的基因片段全长534bp，与GenBank中登陆的0/KP79基因序列同源性达100%，证明重组质粒构建成功，见图4。将测序结果通过BLAST分析发现布氏菌不同种属及部分疫苗株间基因相似性在99%-100%，而在小肠结肠耶尔森菌0:9中并不存在，相似性比对结果见表3。说明0mpl9蛋白可作为布病诊断的候选抗原之一。
【参考文献】：
期刊论文
[1]布鲁氏菌种及种内部分生物型快速PCR鉴定方法的建立及应用研究[J]. 李振军,侯雪新,孙渭歌,贾雪,田国忠. 中华微生物学和免疫学杂志. 2013 (02)
[2]关注中国布鲁杆菌病疫情发展和疫苗研究[J]. 崔步云. 中国地方病学杂志. 2012 (04)
[3]布鲁氏菌蛋白免疫原性研究进展[J]. 杨星雅,崔步云. 中国人兽共患病学报. 2012(02)
[4]内蒙古四子王旗家畜流产与人布鲁杆菌病感染的调查分析[J]. 朴东日,殷文武,范蒙光,王建忠,李金平,赵鸿雁,孙辉,鲁艳英,崔步云. 中国地方病防治杂志. 2012(01)
[5]我国羊种3型布鲁氏菌的多位点序列分型研究[J]. 周晓艳,陈燕芬,崔步云,陈泽良,姜海,赵鸿雁,朴东日,李兰玉,王金桃. 中国人兽共患病学报. 2011(05)
[6]2009年全国布鲁氏菌病监测数据分析[J]. 满腾飞,王大力,崔步云,王赢,丁凡,李铁锋,孙辉,魏荣杰,李群,冯子健,殷文武. 疾病监测. 2010(12)
[7]布鲁氏菌强毒株16M和疫苗株M5差异探索[J]. 赵振祥,赵鸿雁,崔步云,李兰玉,朴冬日,郝素珍. 中国人兽共患病学报. 2009(10)
[8]猪种布鲁氏菌生物1型野毒株和2号菌苗的鉴别诊断[J]. 姜海,崔步云,赵鸿雁,朴东日,李兰玉. 中国媒介生物学及控制杂志. 2009(03)
[9]AMOS-PCR对布鲁氏菌种型鉴定的应用[J]. 姜海,崔步云,赵鸿雁,朴东日,李兰玉. 中国人兽共患病学报. 2009(02)
[10]布鲁氏菌多重聚合酶链反应鉴定研究[J]. 刘国栋,崔步云,刘荣臻,李元凯. 疾病监测. 2008(05)
硕士论文
[1]布鲁氏菌蛋白质文库的建立及感染与免疫鉴别诊断标识抗原的研究[D]. 侯慧玉.中国疾病预防控制中心 2013
[2]羊布鲁氏菌病iELISA抗体检测方法的建立及布鲁氏菌omp28基因的克隆与表达[D]. 王秀丽.中国兽医药品监察所 2012
[3]布鲁氏菌种间差异标识蛋白研究[D]. 杨星雅.中国疾病预防控制中心 2012
[4]布鲁氏菌蛋白芯片的研制及抗体谱分析[D]. 徐杰.兰州大学 2010
[5]羊种布鲁氏菌强毒株16M与疫苗株M5差异蛋白质组学分析[D]. 张洪丽.南京农业大学 2008
[6]布鲁氏菌VirB8-PCR诊断方法的建立与应用及Ery基因的克隆与序列分析[D]. 吴冬玲.新疆农业大学 2008
本文编号：3359784
【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
质粒PCRt广増产物电泳图
图1 ornp19基因PCR扩增产物电ectrophoretic profile of PCR productans 2K DNA marker ; 1，2:onipl9 CR鉴定结果荡培养后，提取质粒，初步证明该表达质粒是M 1 2 3 4 5
且得到的片段大小与质粒和目的片段大小一致，推断为pET-30a载体和基因，证明连接成功，见图3。M 1隊图3重组表达质粒pET-30a-onip19的双酶切鉴定Fig3 Identification of recombinant plasmid pET-30a-ompl9 by restriction analysis注：M:Trans 2K plus DNA marker ; 1:軍：組质粒双fiS切恭定2. 3. 1.2.4序列分析将重组质粒送去测序，测序结果显示，插入的基因片段全长534bp，与GenBank中登陆的0/KP79基因序列同源性达100%，证明重组质粒构建成功，见图4。将测序结果通过BLAST分析发现布氏菌不同种属及部分疫苗株间基因相似性在99%-100%，而在小肠结肠耶尔森菌0:9中并不存在，相似性比对结果见表3。说明0mpl9蛋白可作为布病诊断的候选抗原之一。
【参考文献】：
期刊论文
[1]布鲁氏菌种及种内部分生物型快速PCR鉴定方法的建立及应用研究[J]. 李振军,侯雪新,孙渭歌,贾雪,田国忠. 中华微生物学和免疫学杂志. 2013 (02)
[2]关注中国布鲁杆菌病疫情发展和疫苗研究[J]. 崔步云. 中国地方病学杂志. 2012 (04)
[3]布鲁氏菌蛋白免疫原性研究进展[J]. 杨星雅,崔步云. 中国人兽共患病学报. 2012(02)
[4]内蒙古四子王旗家畜流产与人布鲁杆菌病感染的调查分析[J]. 朴东日,殷文武,范蒙光,王建忠,李金平,赵鸿雁,孙辉,鲁艳英,崔步云. 中国地方病防治杂志. 2012(01)
[5]我国羊种3型布鲁氏菌的多位点序列分型研究[J]. 周晓艳,陈燕芬,崔步云,陈泽良,姜海,赵鸿雁,朴东日,李兰玉,王金桃. 中国人兽共患病学报. 2011(05)
[6]2009年全国布鲁氏菌病监测数据分析[J]. 满腾飞,王大力,崔步云,王赢,丁凡,李铁锋,孙辉,魏荣杰,李群,冯子健,殷文武. 疾病监测. 2010(12)
[7]布鲁氏菌强毒株16M和疫苗株M5差异探索[J]. 赵振祥,赵鸿雁,崔步云,李兰玉,朴冬日,郝素珍. 中国人兽共患病学报. 2009(10)
[8]猪种布鲁氏菌生物1型野毒株和2号菌苗的鉴别诊断[J]. 姜海,崔步云,赵鸿雁,朴东日,李兰玉. 中国媒介生物学及控制杂志. 2009(03)
[9]AMOS-PCR对布鲁氏菌种型鉴定的应用[J]. 姜海,崔步云,赵鸿雁,朴东日,李兰玉. 中国人兽共患病学报. 2009(02)
[10]布鲁氏菌多重聚合酶链反应鉴定研究[J]. 刘国栋,崔步云,刘荣臻,李元凯. 疾病监测. 2008(05)
硕士论文
[1]布鲁氏菌蛋白质文库的建立及感染与免疫鉴别诊断标识抗原的研究[D]. 侯慧玉.中国疾病预防控制中心 2013
[2]羊布鲁氏菌病iELISA抗体检测方法的建立及布鲁氏菌omp28基因的克隆与表达[D]. 王秀丽.中国兽医药品监察所 2012
[3]布鲁氏菌种间差异标识蛋白研究[D]. 杨星雅.中国疾病预防控制中心 2012
[4]布鲁氏菌蛋白芯片的研制及抗体谱分析[D]. 徐杰.兰州大学 2010
[5]羊种布鲁氏菌强毒株16M与疫苗株M5差异蛋白质组学分析[D]. 张洪丽.南京农业大学 2008
[6]布鲁氏菌VirB8-PCR诊断方法的建立与应用及Ery基因的克隆与序列分析[D]. 吴冬玲.新疆农业大学 2008
本文编号：3359784
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