猪圆环病毒2型抗原的GEM纯化技术研究

发布时间：2021-08-25 10:04

　　猪圆环病毒相关疾病（porcine circovirus-associated disease,PCVAD）的免疫预防具有重要的经济价值。我国国产PCV2疫苗均系PK15细胞增殖PCV2病毒、配用油佐剂制备而成,临床免疫副反应大。一般认为,免疫副反应多是因抗原不纯引起的,另外,游离状态的PCV2病毒DNA可能引发免疫抑制。因此,研究PCV2抗原的浓缩纯化技术,提升国产疫苗质量,具有重要意义与实际应用价值。GEM表面展示系统是国外近年发展起来的一种抗原制备新技术。该技术包括GEM 颗粒（Gram-positive bacterial enhancer matrix particles）和蛋白锚钩（Protein anchor,PA）两个构件。GEM颗粒是乳酸乳球菌MG1363经热酸煮沸处理,去除其全部蛋白和核酸等物质后获得的球形细胞壁肽聚糖骨架。蛋白锚钩PA是N-乙酰氨基葡萄糖苷酶的一个结构域,可以非共价方式与GEM颗粒结合。大量研究表明,与PA融合表达的目标蛋白可以展示在GEM颗粒表面。因此,设计并表达PA与病毒特异性纳米抗体的融合蛋白,GEM技术便可拓展应用于病毒抗原的浓缩纯化。本研... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：99 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
英文缩略词表
上篇 文献综述
    第一章 GEM表面展示系统的研究进展
        1 乳酸乳球菌表面展示系统
        2 GEM表面展示系统
            2.1 GEM颗粒
            2.2 PA蛋白
        3 GEM表面展示系统在疫苗研发中的应用
        4 展望
        参考文献
    第二章 纳米抗体的研究进展
        1 纳米抗体的结构
        2 纳米抗体的特性
            2.1 溶解性好、稳定性高
            2.2 可识别独特的构造表位
            2.3 表达量高
            2.4 其他特性
        3 纳米抗体的应用
            3.1 构建纳米抗体库与特异性纳米抗体的筛选
            3.2 动物疾病的应用
        参考文献
    第三章 猪圆环病毒2型疫苗研究进展
        1 PCV2病原学及分子生物学研究
        2 PCV2疫苗研究
            2.1 灭活疫苗
            2.2 减毒活疫苗
            2.3 重组亚单位疫苗
            2.4 载体疫苗
            2.5 核酸疫苗
        3 PCV2疫苗存在的问题
        4 展望
        参考文献
下篇 试验研究
    第四章 GEM-PCV2纯化系统基础构件的制备
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 结果
            2.1 GEM颗粒电镜观察鉴定
            2.2 重组质粒pZQ-PA-Nb的鉴定
            2.3 接头融合蛋白的SDS-PAGE鉴定与可溶性鉴定
            2.4 包涵体复性与活性SDS-PAGE鉴定
            2.5 GEM-Pb电镜观察鉴定
        3 讨论
        参考文献
    第五章 PCV2病毒-GEM纯化方法的建立
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 结果
            2.1 GEM-Pb与PCV2病毒的结合后SDS-PAGE分析
            2.2 GEM-Pb与PCV2病毒结合的鉴定
        3 讨论
        参考文献
    第六章 GEM-PCV2疫苗免疫保护效力研究
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 结果
            2.1 PCV2特异性抗体水平检测结果
            2.2 攻毒保护试验结果
        3 讨论
        参考文献
    第七章 PCV2-VLP-GEM纯化方法的建立
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 结果
            2.1 重组Cap蛋白的SDS-PAGE鉴定与可溶性鉴定
            2.2 重组Cap蛋白体外形成VLP的电镜观察
            2.3 GEM-Pb与PCV2-VLP结合的鉴定
        3 讨论
        参考文献
全文总结
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]1种高效纳米抗体生产方法的建立[J]. 贺生芳,付向晶,刘阳坤,慕国辉,刘海金,王兴龙,杜恩岐,杨增岐.  畜牧兽医学报. 2013(09)
[2]瑞普生物猪PCV2灭活疫苗上市新闻发布会侧记[J]. 赵建乐,徐兆强,尤永君.  中国动物保健. 2013(06)
[3]羊驼非免疫重链单域抗体库的构建和鉴定[J]. 吴标,王树军,夏立亮,季萍,葛海良,赵国屏,王颖.  现代免疫学. 2011(05)
[4]驼源天然单域重链抗体库的构建与鉴定[J]. 涂追,许杨,刘夏,何庆华,陶勇.  中国生物工程杂志. 2011(04)
[5]骆驼来源单域抗体在免疫治疗中的研究进展[J]. 苏幼红,李江伟.  生物技术通报. 2010(06)
[6]猪圆环病毒核酸疫苗pcDNA-PCV-ORF2-ISS的构建及分子佐剂联合免疫研究[J]. 张建远,王红宁,陈锦锐,高荣,黄勇,罗昊,陈建林,郑敏.  中国兽医学报. 2009(12)
[7]嵌合型猪圆环病毒（PCV1-2）及PCV2 ORF2真核表达质粒对商品猪的免疫保护[J]. 程旭,宋益,盛瑜,高崧,刘秀梵.  中国兽医学报. 2009(09)
[8]利用乳酸乳球菌AcmA表面展示β-1,3-1,4-葡聚糖酶[J]. 李小华,黄新凤,邵小虎,李林.  生物工程学报. 2009(01)
[9]含CpG基序系列猪圆环病毒核酸疫苗的构建[J]. 程凯慧,李俊,于周,周顺,王金宝.  中国兽医科学. 2008(12)
[10]猪圆环病毒2型检测与免疫技术研究进展[J]. 蔡宝祥.  畜牧与兽医. 2008(09)

博士论文
[1]猪圆环病毒2型Cap蛋白的家蚕表达及亚单位疫苗在小鼠和仔猪的免疫效力试验[D]. 郎洪武.中国农业大学 2013
[2]猪圆环病毒2型衣壳蛋白病毒样颗粒的制备及其免疫原性的研究[D]. 尹双辉.中国农业科学院 2011

硕士论文
[1]猪圆环病毒2型GEM颗粒疫苗的初步研究[D]. 乔绪稳.扬州大学 2013
[2]猪圆环病毒2型Cap蛋白的表达及其免疫原性研究[D]. 王霞.南京农业大学 2012
[3]猪圆环病毒2结构蛋白Cap的高效可溶性表达及应用[D]. 葛猛.湖南农业大学 2009
[4]利用AcmA蛋白在乳酸乳球菌表面展示锰超氧化物歧化酶[D]. 黄新凤.华中农业大学 2009



本文编号：3361908