牛病毒性腹泻粘膜病病毒E2基因的克
发布时间：2021-08-25 17:01
牛病毒性腹泻/粘膜病（Bovine Viral Diarrhea/Mucosal Disease，BVD/MD）是由牛病毒性腹泻病毒（Bovine Viral Diarrh Virus，BVDV）引起牛的以发热、消化道粘膜糜烂、溃疡、脱落、出血性炎症、腹泻、白细胞下降、繁殖障碍为主要特征的一种传染病。该病在养牛国家广泛流行，形成持续性感染，引起免疫抑制，易导致继发感染，给畜牧业生产造成巨大的经济损失。目前，世界各国对于该病的防控主要通过采取动物检疫、淘汰和免疫接种相结合的策略。在欧美发达国家釆取检疫和淘汰为主，免疫接种为辅的方法来防控该病，使得该病得到有效控制。然而，我国由于缺乏理想的商品化疫苗和检测产品，导致该病在我国很多地区广泛流行。因此，研发用于BVD防控的疫苗和检测试剂，制定并完善BVD的防控体系对于保障我国养牛业的持续健康发展具有重要的意义。本研究以BVDV-2SW分离株为研究对象，对该病毒E2基因进行了克隆，运用大肠杆菌和酵母表达体系表达E2基因，通过SDS-PAGE和Western blot分析表达的重组E2蛋白的反应原性，选择表达量高且反应原性强的重组E2蛋白作为ELI...
【文章来源】：石河子大学新疆维吾尔自治区 211工程院校
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
导师评阅表
中文摘要
Abstract
中英文缩略词表
第一章 文献综述
第二章 实验研究
实验一 BVDV E2蛋白基因的克隆及原核表达研究
摘要
1 材料与方法
1.1 材料
1.2 方法
2 结果
2.1 目的基因的 RT-PCR 扩增
2.2 目的基因 DNA 测序结果及推导的氨基酸序列分析
2.3 重组质粒的 PCR 鉴定
2.4 重组表达载体pET-28a-E2和pET-32a-E2的鉴定
2.5 重组蛋白的诱导表达及鉴定
2.6 E2表达产物Western blot鉴定
3 讨论
实验二 BVDV E2 基因在毕赤酵母中的表达
摘要
1 材料与方法
1.1 材料
1.2 方法
2 结果
2.1 重组质粒的酶切鉴定
2.2 重组质粒的 PCR 鉴定
2.3 阳性转化子的鉴定
2.4 目的蛋白的 SDS-PAGE 分析
2.5 目的蛋白的 Western blot 分析
3 讨论
实验三 BVDV E2 重组蛋白的纯化及间接 ELISA 方法的初步建立
摘要
1 材料与方法
1.1 材料
1.2 方法
2 结果
2.1 重组蛋白的纯化
2.2 抗原最适包被浓度与血清最佳稀释度的确定
2.3 最佳封闭液和封闭时间的选择
2.4 酶标抗体最佳稀释浓度和最佳工作时间的选择
2.5 阴阳性临界值的确定
2.6 间接ELISA特异性试验结果
2.7 间接ELISA敏感性试验结果
3 讨论
全文总结
参考文献
致谢
作者简介
在学校期间参与的研究课题
发表论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]牛病毒性腹泻病毒基因1型全基因组的测序分析[J]. 何延华,黄新,钟发刚,韩猛立,康立超,王新华,薄新文. 中国兽医科学. 2012(03)
[2]牛病毒性腹泻病活疫苗BVDV2/JZ05-1株毒力返强试验[J]. 李海涛,苗利光,刘艳环,王松,王文昊,安亚雄,冯卓. 特产研究. 2012(01)
[3]牛病毒性腹泻病毒血清抗体检测[J]. 王文,张娟,员丽娟,季新成. 动物医学进展. 2011(09)
[4]猪源牛病毒性腹泻病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 邓宇,张荣,丛雁方,张建武,袁世山,文心田,郑浩. 畜牧兽医学报. 2011(07)
[5]牛病毒性腹泻-黏膜病病毒斑点酶联免疫吸附检测法的建立[J]. 张宁,赵月兰,赵博伟,胡晓悦,吕炳起,刘军峰. 湖北畜牧兽医. 2011(05)
[6]猪源牛病毒性腹泻病毒的分离鉴定[J]. 杨小燕,魏春华,刘建奎,戴爱玲,李晓华. 中国兽医科学. 2011(01)
[7]牛病毒性腹泻病毒套式RT-PCR检测方法的建立及初步应用[J]. 祖立闯,王金良,李娇,魏凤,沈志强. 中国兽医学报. 2010(12)
[8]北京地区规模化奶牛场牛病毒性腹泻病血清学调查[J]. 张俊杰,凌宗帅,黄凯,齐长明,马翀,刘英霞,曹杰. 中国奶牛. 2010(10)
[9]中国牛病毒性腹泻病毒JZ05-1分离株全基因测序及分析[J]. 李庆超,苗利光,李海涛,刘艳环,张广雷,肖佳美. 病毒学报. 2010(03)
[10]重庆市部分地区牛病毒性腹泻/粘膜病血清流行病学调查[J]. 杨泽林,冉智光,曾政,黄诚,熊仲良,苏承忠,郭利敏,米自由. 畜牧市场. 2009(10)
硕士论文
[1]基因2型牛病毒性腹泻病毒的分离、鉴定[D]. 任敏.新疆农业大学 2007
本文编号：3362510
【文章来源】：石河子大学新疆维吾尔自治区 211工程院校
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
导师评阅表
中文摘要
Abstract
中英文缩略词表
第一章 文献综述
第二章 实验研究
实验一 BVDV E2蛋白基因的克隆及原核表达研究
摘要
1 材料与方法
1.1 材料
1.2 方法
2 结果
2.1 目的基因的 RT-PCR 扩增
2.2 目的基因 DNA 测序结果及推导的氨基酸序列分析
2.3 重组质粒的 PCR 鉴定
2.4 重组表达载体pET-28a-E2和pET-32a-E2的鉴定
2.5 重组蛋白的诱导表达及鉴定
2.6 E2表达产物Western blot鉴定
3 讨论
实验二 BVDV E2 基因在毕赤酵母中的表达
摘要
1 材料与方法
1.1 材料
1.2 方法
2 结果
2.1 重组质粒的酶切鉴定
2.2 重组质粒的 PCR 鉴定
2.3 阳性转化子的鉴定
2.4 目的蛋白的 SDS-PAGE 分析
2.5 目的蛋白的 Western blot 分析
3 讨论
实验三 BVDV E2 重组蛋白的纯化及间接 ELISA 方法的初步建立
摘要
1 材料与方法
1.1 材料
1.2 方法
2 结果
2.1 重组蛋白的纯化
2.2 抗原最适包被浓度与血清最佳稀释度的确定
2.3 最佳封闭液和封闭时间的选择
2.4 酶标抗体最佳稀释浓度和最佳工作时间的选择
2.5 阴阳性临界值的确定
2.6 间接ELISA特异性试验结果
2.7 间接ELISA敏感性试验结果
3 讨论
全文总结
参考文献
致谢
作者简介
在学校期间参与的研究课题
发表论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]牛病毒性腹泻病毒基因1型全基因组的测序分析[J]. 何延华,黄新,钟发刚,韩猛立,康立超,王新华,薄新文. 中国兽医科学. 2012(03)
[2]牛病毒性腹泻病活疫苗BVDV2/JZ05-1株毒力返强试验[J]. 李海涛,苗利光,刘艳环,王松,王文昊,安亚雄,冯卓. 特产研究. 2012(01)
[3]牛病毒性腹泻病毒血清抗体检测[J]. 王文,张娟,员丽娟,季新成. 动物医学进展. 2011(09)
[4]猪源牛病毒性腹泻病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 邓宇,张荣,丛雁方,张建武,袁世山,文心田,郑浩. 畜牧兽医学报. 2011(07)
[5]牛病毒性腹泻-黏膜病病毒斑点酶联免疫吸附检测法的建立[J]. 张宁,赵月兰,赵博伟,胡晓悦,吕炳起,刘军峰. 湖北畜牧兽医. 2011(05)
[6]猪源牛病毒性腹泻病毒的分离鉴定[J]. 杨小燕,魏春华,刘建奎,戴爱玲,李晓华. 中国兽医科学. 2011(01)
[7]牛病毒性腹泻病毒套式RT-PCR检测方法的建立及初步应用[J]. 祖立闯,王金良,李娇,魏凤,沈志强. 中国兽医学报. 2010(12)
[8]北京地区规模化奶牛场牛病毒性腹泻病血清学调查[J]. 张俊杰,凌宗帅,黄凯,齐长明,马翀,刘英霞,曹杰. 中国奶牛. 2010(10)
[9]中国牛病毒性腹泻病毒JZ05-1分离株全基因测序及分析[J]. 李庆超,苗利光,李海涛,刘艳环,张广雷,肖佳美. 病毒学报. 2010(03)
[10]重庆市部分地区牛病毒性腹泻/粘膜病血清流行病学调查[J]. 杨泽林,冉智光,曾政,黄诚,熊仲良,苏承忠,郭利敏,米自由. 畜牧市场. 2009(10)
硕士论文
[1]基因2型牛病毒性腹泻病毒的分离、鉴定[D]. 任敏.新疆农业大学 2007
本文编号：3362510
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