T-2/HT-2毒素对肉鸡毒性机理及其减控作用研究
发布时间：2021-08-27 13:22
T-2毒素（T-2）与HT-2毒素（HT-2）均属于A类单端孢霉烯族毒素,为梨孢镰刀菌次级代谢产物。T-2/HT-2在自然界中广泛分布,摄入体内可对人畜健康造成损伤,在各组织器官中残留,并导致动物发生氧化应激与细胞凋亡。肉鸡对T-2较敏感,低剂量毒素便可产生毒性作用,引起其采食量下降、口腔损伤、消化道溃疡及体重减轻等。在肉鸡饲喂过程中向饲料中添加物理性吸附剂可有效防止毒素对肉鸡的损害。T-2可导致细胞活性降低、死亡率增高,发生氧化应激和细胞凋亡。目前,研究T-2/HT-2对动物的毒性作用报道较少,而且尚无相关文献报道两种毒素对肉鸡体内、体外的毒性作用。因此,本文主要从体内、体外两方面研究T-2/HT-2对肉鸡的毒性机理及减控作用。首先建立了一种可检测肉鸡体内T-2/HT-2的液相色谱串联质谱（HPLC-MS/MS）方法,随后采用梨孢镰刀菌接种玉米获得发霉玉米作为毒素来源,研究肉鸡自由采食发霉玉米后毒性作用及在体内的残留情况。由于肝是T-2产生毒性作用的靶器官,因此,体外试验选择肝细胞作为研究对象。通过灌流法分离获得原代鸡肝细胞,研究T-2/HT-2对肝细胞的毒性与细胞凋亡相关机理。然后...
【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：197 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图２－１氧化应激造成细胞损伤的机制ＰＳ１??Ｆｉｇ．?２－１?Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ?ｏｆ?ｏｘｉｄａｔｉｖｅ?ｃｅｌｌ?ｄａｍａｇｅ??２．３信号通路??
粒体膜中（Ｂａｋ），当发生刺激时，可从线粒体膜中释放出来ｔｗ’Ｗ。ＢＨ族的加入，增加了细胞调亡调控的复杂程度，送是因该蛋白在每个生化同，均可产生独特的细胞器信号化；这些蛋白在刺激素作用下释放激包括Ｂｉｄ蛋白、Ｂｉｍ蛋白及Ｂａｄ蛋白等ｆ７８’７９ｌ细胞中ＢＨ３－ｏｎｌｙ蛋白，从而促进促调亡蛋白表达，而送一类特殊形式的细胞调亡常是由细［６＂。???Ｐ５３蛋白??Ｐ５３蛋白是一种肿瘤抑制因子，其首要功能是参与细胞周期调控与细胞细胞生长、分化与扩增１８２，８３１。Ｐ５３在细胞调亡过程中扭任口控职能ｔＭ’时刻可根据细胞受到的应激而诱导细胞调亡（園２－２）。目前，人们尚蛋白介导细胞调亡的生化机制，但己知Ｐ５３蛋白介导的细胞调亡存在是通过线粒体去极化诱导产生细胞调亡，另一个途径是调亡诱导物刺生细胞调亡１８６１。Ｐ５３蛋白可促进胞内死亡受体表达，并通过增加促淵亡因，诱导产生澗亡基本结构，其中促淵亡因子ＡＰＡＦ－１是调亡体的重要组
??２丄２流动相优化选择不同的流动相Ａ检测Ｔ－２与ＨＴ－２的色谱峰面积见图３－３。图??中思示，在Ｔ－２的检测结果中，Ｂｕｆｆｅｒ?Ａ色谱峰面积显著大于其他３中缓冲液色谱峰??面积（／＊＜０．０５）。而在ＨＴ－２检测结果中，Ｂｕｆｆｅｒ?Ａ和Ｂｕｆｆｅｒ?Ｄ峰面积显著大于Ｂｕｆｆｅｒ?Ｂ??和Ｂｕｆｆｅｒ?Ｃ的峰面积（ｉＭ）．０５），而Ｂｕｆｆｅｒ?Ａ和Ｂｕｆｆｅｒ?Ｄ之间差异不显著（Ｐ＞０．０５）。??因化选择Ｂｕｆｆｅｒ?Ａ最为本试验的流动相，即５?ｍＭ醋酸按及化０５％甲酸溶液。??Ｉ?Ｉ?Ｂｕｆｆｅｒ?Ａ??福漏?４?Ｂ。瓶ｒ?Ｂ??．ｅ?１?ｍｍｍａ?Ｂｕｆｆｅｒ?Ｃ??ａ?Ｋｓｓｇｇ＆ｉａ?Ｂｕｆｆｅｒ?Ｄ??２．０ｅ＋５?－?丄?ｂ??ｄ?ｃ??ｇ?１．５ｅ＋５?－?Ｔ??益ＬＯｅ＋５?－?主国圍??注?ｈ?３??５．〇ｅ＋４?■?１＾９?巧广義??０．０?，，品?Ｃ????Ｔ－２?ｔｏｘｉｎ?ＨＴ－２?ｔｏｘｉｎ??图３－３不同流动相缓冲液下１０?Ｔ－２与ＨＴ－２的标准品检测结果比较??注：同一基因的不同字母（ａ－ｄ）之间表示差异显著（戶＜０．０５）??Ｆｉｇ．?３－３?Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｄｅ化ｒｍｉｎａｔｉｏｎ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｆｒｏｍ?ｓｔａｎｄａｒｄ?ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ?ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ?１０?ｎｇ＾ｍＬ．ｉ??ｏｆ?ｔｈｅ?ｔａｒｇｅｔ?ａｎａｌｙｔｅｓ?ｗｉｔｈ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｂｕｆｆｅｒｓ?ｉｎ?ｔｈｅ?ｍｏｂｉｌｅ?ｐｈａｓｅ??Ｎｏ化：Ｉｎ?ｅａｃｈ?ｐａｎｅｌ
【参考文献】：
期刊论文
[1]T-2毒素的毒性效应及致毒机制研究进展[J]. 邹广迅,张红霞,花日茂. 生态毒理学报. 2011(02)
[2]T-2毒素研究进展[J]. 王敏辉,李吕木,丁小玲. 动物营养学报. 2011(01)
[3]T-2 toxin-induced apoptosis involving Fas,p53,Bcl-xL,Bcl-2,Bax and caspase-3 signaling pathways in human chondrocytes[J]. Jing-hong CHEN Jun-ling CAO,Yong-lie CHU,Zhi-lun WANG,Zhan-tian YANG,Hong-lin WANG (Ministry of Education Key Laboratory of Environment and Genes related to Diseases,Institute of Endemic Diseases,School of Medicine,Xi’an Jiaotong University,Xi’an 710061,China). Journal of Zhejiang University（Science B:An International Biomedicine & Biotechnology Journal）. 2008(06)
[4]Berbamine induces apoptosis in human hepatoma cell line SMMC7721 by loss in mitochondrial transmembrane potential and caspase activation[J]. WANG Guan-yu 1,ZHANG Jia-wei2,Lü Qing-hua2,XU Rong-zhen2,DONG Qing-hua2(1Department of Surgery,Sir Run Run Shaw Hospital,School of Medicine,Zhejiang University,Hangzhou 310016,China)(2Cancer Institute,the Second Affiliated Hospital,School of Medicine,Zhejiang University,Hangzhou 310009,China). Journal of Zhejiang University（Science B:An International Biomedicine & Biotechnology Journal）. 2007(04)
[5]T-2毒素代谢研究近况[J]. 李群伟. 中国地方病学杂志. 1997(03)
[6]变温培养和培养基对三线镰刀菌M-20产毒性的影响[J]. 匡开源,陆仕华,史士英,张树荣,黄敬坚. 上海农业学报. 1986(01)
本文编号：3366431
【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：197 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图２－１氧化应激造成细胞损伤的机制ＰＳ１??Ｆｉｇ．?２－１?Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ?ｏｆ?ｏｘｉｄａｔｉｖｅ?ｃｅｌｌ?ｄａｍａｇｅ??２．３信号通路??
粒体膜中（Ｂａｋ），当发生刺激时，可从线粒体膜中释放出来ｔｗ’Ｗ。ＢＨ族的加入，增加了细胞调亡调控的复杂程度，送是因该蛋白在每个生化同，均可产生独特的细胞器信号化；这些蛋白在刺激素作用下释放激包括Ｂｉｄ蛋白、Ｂｉｍ蛋白及Ｂａｄ蛋白等ｆ７８’７９ｌ细胞中ＢＨ３－ｏｎｌｙ蛋白，从而促进促调亡蛋白表达，而送一类特殊形式的细胞调亡常是由细［６＂。???Ｐ５３蛋白??Ｐ５３蛋白是一种肿瘤抑制因子，其首要功能是参与细胞周期调控与细胞细胞生长、分化与扩增１８２，８３１。Ｐ５３在细胞调亡过程中扭任口控职能ｔＭ’时刻可根据细胞受到的应激而诱导细胞调亡（園２－２）。目前，人们尚蛋白介导细胞调亡的生化机制，但己知Ｐ５３蛋白介导的细胞调亡存在是通过线粒体去极化诱导产生细胞调亡，另一个途径是调亡诱导物刺生细胞调亡１８６１。Ｐ５３蛋白可促进胞内死亡受体表达，并通过增加促淵亡因，诱导产生澗亡基本结构，其中促淵亡因子ＡＰＡＦ－１是调亡体的重要组
??２丄２流动相优化选择不同的流动相Ａ检测Ｔ－２与ＨＴ－２的色谱峰面积见图３－３。图??中思示，在Ｔ－２的检测结果中，Ｂｕｆｆｅｒ?Ａ色谱峰面积显著大于其他３中缓冲液色谱峰??面积（／＊＜０．０５）。而在ＨＴ－２检测结果中，Ｂｕｆｆｅｒ?Ａ和Ｂｕｆｆｅｒ?Ｄ峰面积显著大于Ｂｕｆｆｅｒ?Ｂ??和Ｂｕｆｆｅｒ?Ｃ的峰面积（ｉＭ）．０５），而Ｂｕｆｆｅｒ?Ａ和Ｂｕｆｆｅｒ?Ｄ之间差异不显著（Ｐ＞０．０５）。??因化选择Ｂｕｆｆｅｒ?Ａ最为本试验的流动相，即５?ｍＭ醋酸按及化０５％甲酸溶液。??Ｉ?Ｉ?Ｂｕｆｆｅｒ?Ａ??福漏?４?Ｂ。瓶ｒ?Ｂ??．ｅ?１?ｍｍｍａ?Ｂｕｆｆｅｒ?Ｃ??ａ?Ｋｓｓｇｇ＆ｉａ?Ｂｕｆｆｅｒ?Ｄ??２．０ｅ＋５?－?丄?ｂ??ｄ?ｃ??ｇ?１．５ｅ＋５?－?Ｔ??益ＬＯｅ＋５?－?主国圍??注?ｈ?３??５．〇ｅ＋４?■?１＾９?巧广義??０．０?，，品?Ｃ????Ｔ－２?ｔｏｘｉｎ?ＨＴ－２?ｔｏｘｉｎ??图３－３不同流动相缓冲液下１０?Ｔ－２与ＨＴ－２的标准品检测结果比较??注：同一基因的不同字母（ａ－ｄ）之间表示差异显著（戶＜０．０５）??Ｆｉｇ．?３－３?Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｄｅ化ｒｍｉｎａｔｉｏｎ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｆｒｏｍ?ｓｔａｎｄａｒｄ?ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ?ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ?１０?ｎｇ＾ｍＬ．ｉ??ｏｆ?ｔｈｅ?ｔａｒｇｅｔ?ａｎａｌｙｔｅｓ?ｗｉｔｈ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｂｕｆｆｅｒｓ?ｉｎ?ｔｈｅ?ｍｏｂｉｌｅ?ｐｈａｓｅ??Ｎｏ化：Ｉｎ?ｅａｃｈ?ｐａｎｅｌ
【参考文献】：
期刊论文
[1]T-2毒素的毒性效应及致毒机制研究进展[J]. 邹广迅,张红霞,花日茂. 生态毒理学报. 2011(02)
[2]T-2毒素研究进展[J]. 王敏辉,李吕木,丁小玲. 动物营养学报. 2011(01)
[3]T-2 toxin-induced apoptosis involving Fas,p53,Bcl-xL,Bcl-2,Bax and caspase-3 signaling pathways in human chondrocytes[J]. Jing-hong CHEN Jun-ling CAO,Yong-lie CHU,Zhi-lun WANG,Zhan-tian YANG,Hong-lin WANG (Ministry of Education Key Laboratory of Environment and Genes related to Diseases,Institute of Endemic Diseases,School of Medicine,Xi’an Jiaotong University,Xi’an 710061,China). Journal of Zhejiang University（Science B:An International Biomedicine & Biotechnology Journal）. 2008(06)
[4]Berbamine induces apoptosis in human hepatoma cell line SMMC7721 by loss in mitochondrial transmembrane potential and caspase activation[J]. WANG Guan-yu 1,ZHANG Jia-wei2,Lü Qing-hua2,XU Rong-zhen2,DONG Qing-hua2(1Department of Surgery,Sir Run Run Shaw Hospital,School of Medicine,Zhejiang University,Hangzhou 310016,China)(2Cancer Institute,the Second Affiliated Hospital,School of Medicine,Zhejiang University,Hangzhou 310009,China). Journal of Zhejiang University（Science B:An International Biomedicine & Biotechnology Journal）. 2007(04)
[5]T-2毒素代谢研究近况[J]. 李群伟. 中国地方病学杂志. 1997(03)
[6]变温培养和培养基对三线镰刀菌M-20产毒性的影响[J]. 匡开源,陆仕华,史士英,张树荣,黄敬坚. 上海农业学报. 1986(01)
本文编号：3366431
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