吉林白鹅α/γIFN原核表达、抗病毒活性及其核酸疫苗免疫佐剂作用的研究

发布时间：2021-08-28 13:06

　　由于干扰素具有良好的广谱抗病毒活性和有效的免疫调节功能,对于研发有效的抗病毒生物制剂及增强疫苗效果的佐剂具有重要的意义。本研究利用基因工程技术,以吉林白鹅α/γ干扰素基因（JGIFN-α/γ）为研究对象,对其进行了克隆、表达及抗病毒活性研究。同时为了进一步研究JGIFN-γ作为佐剂的免疫增强作用,成功构建了带有分子免疫佐剂JGIFN-γ的GPV-VP3基因疫苗并对雏鹅进行了免疫,为研发高效的鹅细小病毒基因疫苗奠定了基础,本研究具体进行了以下几方面的工作：1、吉林白鹅α干扰素成熟肽原核表达及抗病毒活性的研究参照已克隆得到的JGIFN-α完整的ORF基因序列设计了一对特异性引物,克隆得到了编码α干扰素的成熟肽基因（mJGIFN-a）。利用pET28a （+）作为原核表达载体,成功构建了吉林白鹅α干扰素基因的原核表达质粒pET-mJGIFN-a。将该重组表达质粒转化入E.coli Rossetta菌中进行了表达,经IPTG诱导、SDS-PAGE和western-blot分析表明获得了分子量为22ku的包涵体蛋白。将包涵体蛋白经Ni-IMAC亲和层析法纯化及稀释透析复性后,得到了与预期结果一致... 

【文章来源】：吉林农业大学吉林省

【文章页数】：119 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
前言
第一篇 文献综述
    第一章 干扰素的研究进展
        1.1 干扰素分类及结构
        1.2 干扰素作用机制
        1.3 干扰素的生物学活性
        1.4 禽类IFN的研究进展
    第二章 鹅细小病毒研究进展
        2.1 鹅细小病毒分子生物学研究进展
        2.2 小鹅瘟免疫防治的研究进展
第二篇 研究内容
    第一章 吉林白鹅α干扰素成熟肽基因的克隆表达及抗病毒活性的研究
        1.1 材料与方法
        1.2 结果
        1.3 讨论
        1.4 小结
    第二章 吉林白鹅γ干扰素基因序列分析、原核表达及抗病毒活性测定
        2.1 材料与方法
        2.2 结果
        2.3 讨论
        2.4 小结
    第三章 吉林白鹅IFN-γ及其与VP3融合基因的真核表达
        3.1 材料与方法
        3.2 结果
        3.3 讨论
        3.4 小结
    第四章 JGIFN-VP3真核表达质粒对雏鹅的免疫研究
        4.1 材料与方法
        4.2 结果
        4.3 讨论
        4.4 小结
结论
参考文献
中英文缩略语
作者简介
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]吉林白鹅α干扰素在大肠杆菌中的表达及抗病毒活性检测[J]. 李公美,李玉梅,胡静涛,刘可越,钱爱东.  中国兽医杂志. 2012(02)
[2]鹅γ-干扰素的原核表达及抗病毒活性研究[J]. 胡晓静,刘棋,付薇,徐贤坤,熊毅.  畜牧与兽医. 2012(02)
[3]Ⅲ型干扰素——新型抗病毒细胞因子[J]. 杨祎,侯炜.  生命科学. 2011(08)
[4]鹅α干扰素基因在COS-7细胞中的瞬时表达及抗病毒功能初探[J]. 刘菲,唐卫杰,程安春,汪铭书,赵婷婷,高丽芹.  浙江大学学报(农业与生命科学版). 2011(04)
[5]天府肉鹅IFN-α成熟肽基因的原核表达及抗病毒活性[J]. 刘菲,高丽芹,程安春,汪铭书,韩清林,赵婷婷,唐卫杰,严晓玲.  四川农业大学学报. 2011(02)
[6]小鹅瘟病毒VP3真核表达质粒与弱毒疫苗诱导鹅体免疫应答的比较[J]. 朱德康,黎敏,车茜,程安春,汪铭书,陈孝跃.  中国农业科学. 2011(03)
[7]天府肉鹅IFN-α基因的克隆及生物信息学分析[J]. 刘菲,赵婷婷,程安春,汪铭书,韩清林,高丽芹,唐卫杰.  中国兽医科学. 2010(12)
[8]重组狮头鹅α干扰素的制备及其抗病毒活性[J]. 郑晓灵,刘艳芬,陈绍红,刘铀.  中国兽医科学. 2010(07)
[9]鹅细小病毒野毒的分离及VP3基因的克隆及序列分析[J]. 李公美,邵洪泽,刘海军,钱爱东.  湖北农业科学. 2010(04)
[10]鹅细小病毒VP3基因真核表达载体的构建及其在Vero细胞中表达[J]. 高光,张鑫,徐佳,王淳玉,许洪洁,胡桂学.  中国兽医学报. 2010(03)

博士论文
[1]天府肉鹅α干扰素基因克隆、表达及其生物学活性研究[D]. 刘菲.四川农业大学 2011
[2]猪α干扰素、猪β干扰素与猪γ干扰素的抗病毒活性及其免疫佐剂的研究[D]. 姚清侠.华中农业大学 2007
[3]鸡干扰素与干扰素受体重组蛋白的生物学特性及其相互作用[D]. 韩春来.中国农业大学 2005

硕士论文
[1]猪干扰素α、β、γ基因克隆、原核表达及其单克隆抗体制备的研究[D]. 王晓杜.华中农业大学 2007
[2]鸡γ干扰素基因的克隆和表达及其多克隆抗体的制备[D]. 丁忠庆.东北农业大学 2003



本文编号：3368568