ALV-J、REV和MDV多重荧光定量PCR检测方法的建立

发布时间：2021-08-30 07:20

　　为建立可同时检测J亚群禽白血病病毒（ALV）、网状内皮增生症病毒（REV）和马立克病病毒（MDV）的方法,本研究以ALV-J的ENV基因、REV的LTR区以及MDV的MEQ基因为检测对象,建立了可同时检测ALV-J、REV、MDV的多重荧光定量PCR方法并对其特异性、灵敏性、稳定性进行了研究。结果显示,该方法仅可特异扩增3种肿瘤病病毒的基因,对禽流感病毒、新城疫病毒、腺病毒等核酸扩增均呈阴性;ALV-J、REV和MDV的最低核酸检测限分别为35 copies/μL、5.1 copies/μL和62 copies/μL;此外,批内与批间重复试验Ct值的变异系数均小于2%。利用此方法对166份送检样品进行检测,其中ALV-J、REV和MDV检出率分别为25.3%、7.2%和5.4%,混合感染检出率为3.6%。以上结果表明,本方法特异性好、灵敏度高、稳定性强,能够同时检测ALV-J、REV和MDV,可用于禽肿瘤病的鉴别诊断、流行病学调查以及疫病防控。 

【文章来源】：中国动物传染病学报. 2020,28(06)北大核心

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

多重荧光定量PCR的标准曲线

多重荧光定量PCR特异性试验结果

分别使用OIE推荐的常规PCR和本文建立的多重荧光定量PCR方法对来自湖北不同地区的51份肿瘤性病变组织和115份其他病变组织进行检测,结果见表3。多重荧光PCR共检出ALV-J单一感染36例,REV单一感染7份,MDV单一感染5例,ALV-J、REV双重感染2例,ALV-J、MDV双重感染1例以及ALV-J、REV、MD三重感染3例。而普通PCR除了对ALV-J单一感染检出率比多重荧光PCR稍低,其他检测结果保持一致。表明本文建立的多重荧光定量PCR方法适用于禽肿瘤病的临床样品的鉴别检测。表2 多重荧光定量PCR重复性试验Table 2 Intra-assay and inter-assay reproducibility test of real-time PCR assay 病毒Virus 稀释倍数Dilution ratio 批内重复Intra-assay reproducibility 批间重复Inter-assay reproducibility 平均值 SD CV(%) 平均值 SD CV(%) ALV-J 103 17.23 0.15 0.87 17.53 0.12 0.68 104 20.45 0.10 0.48 20.54 0.23 1.11 105 23.51 0.14 0.59 23.60 0.15 0.63 REV 103 18.74 0.13 0.69 18.78 0.16 0.85 104 21.03 0.03 0.14 22.12 0.20 0.54 105 25.32 0.23 0.91 25.43 0.35 1.37 MDV 103 16.13 0.10 0.62 16.54 0.14 0.84 104 19.18 0.12 0.62 19.02 0.07 0.36 105 22.54 0.19 0.84 22.74 0.23 1.01

【参考文献】：
期刊论文
[1]2017年广西及周边地区地方品种鸡三种肿瘤病的流行病学调查[J]. 石梦雅,李海娟,王威威,谷战明,王培坤,林璐璐,梁竞臻,韦平.  中国家禽. 2019(03)
[2]禽网状内皮组织增生病流行现状及防控[J]. 邓小芸,祁小乐,李凯,胡峰,高玉龙,高宏雷,王笑梅.  中国家禽. 2015(01)
[3]网状内皮组织增殖病研究进展[J]. 贺帅.  上海畜牧兽医通讯. 2010(04)
[4]J亚群禽白血病研究进展[J]. 李建亮,崔言顺.  动物医学进展. 2010(S1)

硕士论文
[1]ALV引起的免疫抑制对马立克氏病疫苗免疫保护效果的影响[D]. 林璐璐.广西大学 2018



本文编号：3372337