牛PAI-1基因真核表达载体构建、生物信息学分析及功能初探
发布时间：2021-08-30 14:06
本研究旨在构建牛纤溶酶原激活物抑制剂1（Plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1）基因真核表达载体、生物信息学分析并对其功能进行初探。实验参照GenBank数据库公布的牛PAI-1基因的CDS序列信息设计引物,通过RT-PCR获得PAI-1基因片段,将基因片段与pMD-19-T载体连接转化DH5α感受态细胞,构建pMD-19-T-PAI-1克隆载体,双酶切回收基因片段,构建pcDNA3.1-PAI-1真核表达载体,经双酶切、测序鉴定构建成功。将表达载体转染至293T细胞,48 h后进行荧光定量PCR（RT-qPCR）和Western Blot检测PAI-1以及凋亡相关基因Bcl2、Bax和Caspase-3的表达。结果显示:pcDNA3.1-PAI-1真核表达载体测序结果与GenBank数据库公布的牛PAI-1基因CDS序列完全匹配,生物信息学分析发现PAI-1基因编码区全长1 209 bp,编码402个氨基酸,存在35个潜在磷酸化位点,主要分布在细胞外。过表达PAI-1可显著提高293T细胞中PAI-1 mRNA和蛋白表达,抗凋亡基因Bcl2 m...
【文章来源】：中国畜牧杂志. 2020,56(08)北大核心
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
颗粒细胞cDNA PCR产物鉴定
生物信息学分析结果显示，PAI-1蛋白属于分泌型蛋白，亚细胞定位显示主要分布在细胞外，这与其参与凝血功能相一致。总计预测到35个磷酸化位点，而蛋白磷酸化对于细胞信号传导具有重要作用，说明PAI-1可能参与细胞信号传导。图5 PAI-1和凋亡相关基因mRNA相对表达量
牛PAI-1基因编码氨基酸序列与绵羊、马、猪、人、狗、大鼠、小鼠PAI-1基因编码氨基酸序列的同源性分别为95.52%、86.43%、89.55%、85.32%、88.06%、78.86%、76.87%，提示PAI-1基因在不同物种间相对保守。牛PAI-1基因共编码402个氨基酸，分子式为C2042H3189N539O590S20，分子量为45.37 ku，理论等电点为5.96。如表3所示，PAI-1蛋白共包含20种氨基酸，亮氨酸含量最高，为10.4%，半胱氨酸含量最低，为0.2%，包含44个负电荷氨基酸（天冬氨酸+谷氨酸）和39个正电荷氨基酸（精氨酸+赖氨酸）。2.3.2 磷酸化位点、亚细胞定位分析
本文编号：3372919
【文章来源】：中国畜牧杂志. 2020,56(08)北大核心
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
颗粒细胞cDNA PCR产物鉴定
生物信息学分析结果显示，PAI-1蛋白属于分泌型蛋白，亚细胞定位显示主要分布在细胞外，这与其参与凝血功能相一致。总计预测到35个磷酸化位点，而蛋白磷酸化对于细胞信号传导具有重要作用，说明PAI-1可能参与细胞信号传导。图5 PAI-1和凋亡相关基因mRNA相对表达量
牛PAI-1基因编码氨基酸序列与绵羊、马、猪、人、狗、大鼠、小鼠PAI-1基因编码氨基酸序列的同源性分别为95.52%、86.43%、89.55%、85.32%、88.06%、78.86%、76.87%，提示PAI-1基因在不同物种间相对保守。牛PAI-1基因共编码402个氨基酸，分子式为C2042H3189N539O590S20，分子量为45.37 ku，理论等电点为5.96。如表3所示，PAI-1蛋白共包含20种氨基酸，亮氨酸含量最高，为10.4%，半胱氨酸含量最低，为0.2%，包含44个负电荷氨基酸（天冬氨酸+谷氨酸）和39个正电荷氨基酸（精氨酸+赖氨酸）。2.3.2 磷酸化位点、亚细胞定位分析
本文编号：3372919
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