环磷酸腺苷在绵羊卵丘—卵母细胞复合体体外成熟过程中对间隙连接蛋白43表达的调控研究
发布时间：2021-08-31 01:37
间隙连接蛋白43（connexin43,Cx43）是哺乳动物颗粒细胞特异表达的关键蛋白,在卵泡发育与卵母细胞成熟过程中起着不可或缺的作用。卵母细胞内高水平环磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate,cAMP）对维持减数分裂停滞至关重要,虽然卵母细胞自身能合成cAMP,但研究表明,Cx43蛋白磷酸化引起的间隙连接通道关闭所造成的卵丘细胞向卵母细胞转运的cAMP下降是维持卵母细胞减数分裂的重要原因。另有研究报道,人为提升牛卵丘-卵母复合体（cumulus-oocyte complexes,COCs）内cAMP水平反过来能够显著增强复合体间隙连接功能,但是绵羊卵泡内cAMP水平与间隙连接蛋白Cx43蛋白表达或者功能变化的相关性,尚未见研究报道。本研究采用免疫组织化学染色技术检测绵羊未成熟COCs中Cx43蛋白表达,然后分别采用竞争性酶联免疫吸附技术和免疫印迹法检测了体外成熟过程中cAMP水平变化和Cx43磷酸化蛋白和总蛋白表达的情况。在不含促性腺激素的作用下,探究了 cAMP非特异性调节剂对绵羊COCs内cAMP的时间效应,以及cAMP对Cx43蛋白表达情况。结...
【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区
【文章页数】：48 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１连接蛋白结构??Ｆｉｇ．?１?Ｃｏｎｎｅｘｉｎ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ??
８环磷酸腺苷在绵羊卵丘－卵母细胞复合体体外成熟过程中对间隙连接蛋白４３表达的调控研究??■■隱??图２?Ｃｘ４３蛋白在绵羊卵丘一卵母细胞复合体（ＣＯＣ）中的表达??Ｆｉｇ．２?Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?Ｃｘ４３?ｉｎ?ｏｖｉｎｅ?ｃｕｍｕｌｕｓ－ｏｏｃｙｔｅ?ｃｏｍｐｌｅｘ?（ＣＯＣ）??注：Ｃｘ４３蛋白染色使用Ａｌｘ４８８偶联二抗（绿色）；试验组：Ａ：合并图，ａ】：Ｃｘ４３，?ａ２：?ＤＡＰＩ，?ａ：?ＣＯＣｓ形态图；??对照组：Ｂ：合并图，ｂ１：?Ｃｘ４３，?ｂ２：?ＤＡＰＩ，?ｂ：?ＣＯＣｓ形态图??２．４讨论与小结??２．４．１讨论??基于本实验室前期建立新型ＣＯＣｓ石蜡切片技术，本试验检测了?Ｃｘ４３蛋白在未??成熟绵羊ＣＯＣｓ中的表达情况。结果显示，Ｃｘ４３只存在于绵羊卵丘细胞中，卵母细??胞内未发现Ｃｘ４３蛋白的表达。在小鼠［７６］和牛［７７］的研宄中，所有卵泡发育阶段的ＧＣｓ??中均有Ｃｘ４３表达，未在卵母细胞内发现Ｃｘ４３基因与蛋白。在人的研宄中？，?Ｃｘ４３??蛋白主要定位于卵丘细胞。最新的一项研宄表明，在山羊原始卵泡到有腔卵泡的形成??过程中，其颗粒细胞、膜细胞和透明带中均表达Ｃｘ４３ｗ］。本研究结果并未显示Ｃｘ４３??蛋白在绵羊透明带上的定位特征，这可能源于本试验所采用ＣＯＣ切片技术的差异性，??但上述研宄结果与本研宄发现是一致的，即Ｃｘ４３蛋白仅存在于卵丘细胞。有关猪的??相关研宄显示，Ｃｘ４３蛋白在未成熟卵母细胞中有表达，在减数分裂过程中其表达呈??动态变化特征，推测其原因可能在于卵丘细胞内合成的Ｃｘ４３，随后被运输至卵母细??胞中，以供形成卵母与卵丘细胞间的间隙连接通道［８°］，表明Ｃｘ４
?内蒙古农业大学硕士学位论文?１３??７〇１?；?．?．?；?；?；?，?１?；???５〇??＼?ｉ?［■?｜?－Ｉ?；?［?■＊???＼?ｉ?Ｉ?！?ｉ?Ｉ?ｉ?！?Ｉ?：??翅?４Ｕ??ｉ?［?－「?「?１??：?１???｜３〇?？…．－…．］……－１？…ｊ．…．］一…．??２０?ｌ－．??１??ｔ?－！?！?１＊—￣￣ｉ——??！?！?Ｉ?Ｉ?Ｉ?！??１０?卜…，：?卜…＾－???■：？???；；；；？；；?丨?ｉ?１?Ｈ?ｌ??°０?１２３４５６７８９?１０??ｃＡＭＰ＾Ｒ度?／?（?ｐｍｏｌ／ｍＬ〉??图３?ｃＡＭＰ标准曲线图??Ｆｉｇ．３?Ｔｈｅ?ｓｔａｎｄａｒｄ?ｃｕｒｖｅ?ｇｒａｐｈ?ｏｆ?ｃＡＭＰ??３．３．２体外成熟过程中卵母细胞内ｃＡＭＰ水平变化??本试验检测了体外成熟培养不同时间点卵母细胞中ｃＡＭＰ水平。实验结果如图４??所示，在体外成熟培养３０ｍｉｎ内卵母细胞ｃＡＭＰ含量缓慢升高，随后持续下降。其??中胞内ｃＡＭＰ在成熟培养３０ｍｉｎ时达到顶峰值，在培养６ｈ时显示最低水平，两者与??Ｏｈ相比，均差异显著（尸＜０．０５）。??
本文编号：3373913
【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区
【文章页数】：48 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１连接蛋白结构??Ｆｉｇ．?１?Ｃｏｎｎｅｘｉｎ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ??
８环磷酸腺苷在绵羊卵丘－卵母细胞复合体体外成熟过程中对间隙连接蛋白４３表达的调控研究??■■隱??图２?Ｃｘ４３蛋白在绵羊卵丘一卵母细胞复合体（ＣＯＣ）中的表达??Ｆｉｇ．２?Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?Ｃｘ４３?ｉｎ?ｏｖｉｎｅ?ｃｕｍｕｌｕｓ－ｏｏｃｙｔｅ?ｃｏｍｐｌｅｘ?（ＣＯＣ）??注：Ｃｘ４３蛋白染色使用Ａｌｘ４８８偶联二抗（绿色）；试验组：Ａ：合并图，ａ】：Ｃｘ４３，?ａ２：?ＤＡＰＩ，?ａ：?ＣＯＣｓ形态图；??对照组：Ｂ：合并图，ｂ１：?Ｃｘ４３，?ｂ２：?ＤＡＰＩ，?ｂ：?ＣＯＣｓ形态图??２．４讨论与小结??２．４．１讨论??基于本实验室前期建立新型ＣＯＣｓ石蜡切片技术，本试验检测了?Ｃｘ４３蛋白在未??成熟绵羊ＣＯＣｓ中的表达情况。结果显示，Ｃｘ４３只存在于绵羊卵丘细胞中，卵母细??胞内未发现Ｃｘ４３蛋白的表达。在小鼠［７６］和牛［７７］的研宄中，所有卵泡发育阶段的ＧＣｓ??中均有Ｃｘ４３表达，未在卵母细胞内发现Ｃｘ４３基因与蛋白。在人的研宄中？，?Ｃｘ４３??蛋白主要定位于卵丘细胞。最新的一项研宄表明，在山羊原始卵泡到有腔卵泡的形成??过程中，其颗粒细胞、膜细胞和透明带中均表达Ｃｘ４３ｗ］。本研究结果并未显示Ｃｘ４３??蛋白在绵羊透明带上的定位特征，这可能源于本试验所采用ＣＯＣ切片技术的差异性，??但上述研宄结果与本研宄发现是一致的，即Ｃｘ４３蛋白仅存在于卵丘细胞。有关猪的??相关研宄显示，Ｃｘ４３蛋白在未成熟卵母细胞中有表达，在减数分裂过程中其表达呈??动态变化特征，推测其原因可能在于卵丘细胞内合成的Ｃｘ４３，随后被运输至卵母细??胞中，以供形成卵母与卵丘细胞间的间隙连接通道［８°］，表明Ｃｘ４
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