新型鸭呼肠孤病毒的分离鉴定及致病性研究
发布时间：2021-09-03 04:11
最近几年,在我国肉鸭养殖地区出现一种以脾脏坏死为特征的疾病,该病主要造成患鸭大群精神状态差,饮水、采食均出现下降并伴有死亡,脾脏坏死后机体免疫力下降容易继发感染造成更高的死亡率,耐过鸭发育受阻、生长缓慢,成为僵鸭。目前,大多数研究者认为新型鸭呼肠孤病毒（New type duck reovirus,NDRV）是造成该病的主要病原,针对该病发病日龄小、病情发展快、容易快速传播的特点,急需建立一种快速、精确、可靠的检测方法应用于该病早期定性与定量诊断。本研究从患鸭的坏死脾脏中分离到一株NDRV,对分离的毒株进行了序列分析及致病性研究。针对该病建立了TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测方法,并利用该方法对病毒在感染肉鸭不同组织器官中的分布、排毒规律及病毒血症情况进行了监测,为该病的防控提供了理论依据。根据NDRV S2基因序列设计一对引物和一条特异性探针,扩增长度85 bp。将扩增的片段连接到pMD18-T载体上构建重组质粒,经筛选、测序鉴定后,倍比稀释作为标准品,优化反应条件后构建标准曲线,建立检测NDRV的TaqMan探针荧光定量RT-PCR方法。该方法的标准曲线有良好的线性关系,线...
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
组织样品感染后致鸡胚病变Fig.1Cytopathiceffectofchickenembryoinducedbytissuesamples
针尖状出血点，剖检病变主要是肝脏肿大、出血以及坏死灶的出现（见图图 1 组织样品感染后致鸡胚病变Fig. 1 Cytopathic effect of chicken embryo induced by tissue samplesa.胚体出血；b.肝脏肿大、出血、坏死a. Embryonic bleeding ;b.Liver enlargement, hemorrhage, necrosisl品处理液感染生长状态良好的鸡胚肝细胞，从第三代开始出现以细胞融合病变（见图 2），到第五代时细胞病变出现时间以及病变程度趋于稳定，0%的细胞可出现典型病变。
图 3 NDRV σC 基因 PCR 扩增结果Fig. 3 PCR amplification of NDRV σC gene；2.细胞病毒液 PCR 产物；3.阴性对照； M.-2.the σC gene of NDRV；3.Negative control分析第 3 个阅读框编码的结构蛋白，位产生保护性中和抗体（Zhang Y, 20白，是目前唯一能够从被 ARV 感染类细胞，与病毒的吸附、增殖、致了解分离株病毒与 ARV 之间的进与已发表的 ARV 分离株的σC 基因的绘制。结果如图 4 所示，ARV 进和水禽源分支，水禽源呼肠孤分支
【参考文献】：
期刊论文
[1]实时荧光定量PCR技术的原理及其应用[J]. 安钢力. 中国现代教育装备. 2018(21)
[2]禽源呼肠孤病毒S1基因节段分子生物学研究进展[J]. 吴巧梅,刘光清,陈宗艳. 中国动物传染病学报. 2017(04)
[3]鸭呼肠孤病毒人工感染SPF鸡胚的病理学研究[J]. 刘晓丽,刘婷,刘波,程国富,谷长勤,张万坡,胡薛英. 中国农业科学. 2016(14)
[4]实时荧光定量PCR技术研究进展及其应用[J]. 王玉倩,薛秀花. 生物学通报. 2016(02)
[5]TaqMan探针法实时荧光定量PCR的应用和研究进展[J]. 姜文灿,岳素文,江洪,王成彬. 临床检验杂志(电子版). 2015(01)
[6]番鸭呼肠孤病毒M（M1～M3）基因序列克隆及特性分析[J]. 林锋强,陈少莺,王劭,陈仕龙,程晓霞,朱小丽,李兆龙. 福建农业学报. 2012(09)
[7]新型鸭呼肠孤病毒的分离与鉴定[J]. 陈少莺,陈仕龙,林锋强,王劭,江斌,程晓霞,朱小丽,李兆龙. 病毒学报. 2012(03)
[8]一株新型鸭源呼肠孤病毒（TH11株）的分离与鉴定[J]. 陈宗艳,朱英奇,王世传,李传峰,李露,王玢缤,付玉志,高景鹏,王超,刘光清. 中国动物传染病学报. 2012(01)
[9]质粒制备绝对定量PCR标准曲线方法的建立[J]. 李丽,赵成萍,李宏,李武峰,张利环,许冬梅,王金胜,李慧锋. 农业生物技术学报. 2011(06)
[10]规模化番鸭场感染呼肠孤病毒病的流行病学调查[J]. 李巨银,蔡丙严,吴小龙. 家禽科学. 2011(04)
博士论文
[1]两株北京鸭源呼肠孤病毒生物学特性比较[D]. 郑献进.中国农业大学 2016
硕士论文
[1]禽呼肠孤病毒流行株的进化及致病性研究[D]. 钟丽.中国农业科学院 2017
[2]鹅源呼肠孤病毒油乳剂灭活疫苗的制备[D]. 张秉乾.山东农业大学 2017
[3]血清4型Ⅰ群禽腺病毒的分离鉴定及流行病学调查[D]. 窦砚国.山东农业大学 2017
[4]一株鹅呼肠孤病毒的分离鉴定及全基因组序列分析[D]. 刘水芳.扬州大学 2015
[5]共表达禽（番鸭）呼肠孤病毒σB-σC-LTB蛋白亚单位疫苗载体的构建及免疫保护的研究[D]. 杨志刚.中国农业科学院 2014
[6]鸭甲肝病毒1型和3型实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及其在雏鸭体内动态分布规律的研究[D]. 李井新.山东农业大学 2013
[7]新型鸭呼肠孤病毒的鉴定及其全基因组序列解析[D]. 朱英奇.安徽农业大学 2013
[8]禽呼肠孤病毒σC基因的克隆表达及其免疫原性初步研究[D]. 凌珊珊.四川农业大学 2008
本文编号：3380378
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
组织样品感染后致鸡胚病变Fig.1Cytopathiceffectofchickenembryoinducedbytissuesamples
针尖状出血点，剖检病变主要是肝脏肿大、出血以及坏死灶的出现（见图图 1 组织样品感染后致鸡胚病变Fig. 1 Cytopathic effect of chicken embryo induced by tissue samplesa.胚体出血；b.肝脏肿大、出血、坏死a. Embryonic bleeding ;b.Liver enlargement, hemorrhage, necrosisl品处理液感染生长状态良好的鸡胚肝细胞，从第三代开始出现以细胞融合病变（见图 2），到第五代时细胞病变出现时间以及病变程度趋于稳定，0%的细胞可出现典型病变。
图 3 NDRV σC 基因 PCR 扩增结果Fig. 3 PCR amplification of NDRV σC gene；2.细胞病毒液 PCR 产物；3.阴性对照； M.-2.the σC gene of NDRV；3.Negative control分析第 3 个阅读框编码的结构蛋白，位产生保护性中和抗体（Zhang Y, 20白，是目前唯一能够从被 ARV 感染类细胞，与病毒的吸附、增殖、致了解分离株病毒与 ARV 之间的进与已发表的 ARV 分离株的σC 基因的绘制。结果如图 4 所示，ARV 进和水禽源分支，水禽源呼肠孤分支
【参考文献】：
期刊论文
[1]实时荧光定量PCR技术的原理及其应用[J]. 安钢力. 中国现代教育装备. 2018(21)
[2]禽源呼肠孤病毒S1基因节段分子生物学研究进展[J]. 吴巧梅,刘光清,陈宗艳. 中国动物传染病学报. 2017(04)
[3]鸭呼肠孤病毒人工感染SPF鸡胚的病理学研究[J]. 刘晓丽,刘婷,刘波,程国富,谷长勤,张万坡,胡薛英. 中国农业科学. 2016(14)
[4]实时荧光定量PCR技术研究进展及其应用[J]. 王玉倩,薛秀花. 生物学通报. 2016(02)
[5]TaqMan探针法实时荧光定量PCR的应用和研究进展[J]. 姜文灿,岳素文,江洪,王成彬. 临床检验杂志(电子版). 2015(01)
[6]番鸭呼肠孤病毒M（M1～M3）基因序列克隆及特性分析[J]. 林锋强,陈少莺,王劭,陈仕龙,程晓霞,朱小丽,李兆龙. 福建农业学报. 2012(09)
[7]新型鸭呼肠孤病毒的分离与鉴定[J]. 陈少莺,陈仕龙,林锋强,王劭,江斌,程晓霞,朱小丽,李兆龙. 病毒学报. 2012(03)
[8]一株新型鸭源呼肠孤病毒（TH11株）的分离与鉴定[J]. 陈宗艳,朱英奇,王世传,李传峰,李露,王玢缤,付玉志,高景鹏,王超,刘光清. 中国动物传染病学报. 2012(01)
[9]质粒制备绝对定量PCR标准曲线方法的建立[J]. 李丽,赵成萍,李宏,李武峰,张利环,许冬梅,王金胜,李慧锋. 农业生物技术学报. 2011(06)
[10]规模化番鸭场感染呼肠孤病毒病的流行病学调查[J]. 李巨银,蔡丙严,吴小龙. 家禽科学. 2011(04)
博士论文
[1]两株北京鸭源呼肠孤病毒生物学特性比较[D]. 郑献进.中国农业大学 2016
硕士论文
[1]禽呼肠孤病毒流行株的进化及致病性研究[D]. 钟丽.中国农业科学院 2017
[2]鹅源呼肠孤病毒油乳剂灭活疫苗的制备[D]. 张秉乾.山东农业大学 2017
[3]血清4型Ⅰ群禽腺病毒的分离鉴定及流行病学调查[D]. 窦砚国.山东农业大学 2017
[4]一株鹅呼肠孤病毒的分离鉴定及全基因组序列分析[D]. 刘水芳.扬州大学 2015
[5]共表达禽（番鸭）呼肠孤病毒σB-σC-LTB蛋白亚单位疫苗载体的构建及免疫保护的研究[D]. 杨志刚.中国农业科学院 2014
[6]鸭甲肝病毒1型和3型实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及其在雏鸭体内动态分布规律的研究[D]. 李井新.山东农业大学 2013
[7]新型鸭呼肠孤病毒的鉴定及其全基因组序列解析[D]. 朱英奇.安徽农业大学 2013
[8]禽呼肠孤病毒σC基因的克隆表达及其免疫原性初步研究[D]. 凌珊珊.四川农业大学 2008
本文编号：3380378
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