猪瘟病毒E2蛋白在大肠杆菌中表达及免疫原性分析
发布时间：2021-09-03 14:21
猪瘟（Classical swine fever,CSF）被国际兽医组织OIE列为A类传染病,由猪瘟病毒（Classical swine fever virus,CSFV）引起。近些年来,我国因感染CSFV死亡的猪的数量占全部疫病致死猪数量的三分之一以上,对国内养猪业造成巨大的经济损失和资源浪费。我国通常采用接种猪瘟弱毒疫苗等防控措施来控制猪瘟疫情的爆发。猪瘟疫情由大规模流行逐渐转化为无规律散发流行,尽管免疫时的疫苗剂量和频率都有所增加,但仍未有效及时地控制住猪瘟的蔓延。由于滥用猪瘟弱毒疫苗以及野毒株的变异,猪瘟疫情出现慢性、隐性感染,导致难以区分疫苗免疫猪与野毒感染猪,从而使疫情更加难以控制。因此,研制能鉴别诊断、安全高效的新型基因工程亚单位疫苗是全世界养猪业的迫切需求。为制备具有免疫原性的CSFV E2蛋白,并对其进行纯化和免疫原性分析。将E2基因插入原核表达载体pET-28a中,构建重组质粒pET-28a-E2。并将质粒转入大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达,经SDS-PAGE电泳和Western-Blot结果证明,本试验成功表达出可溶的E2蛋白。分别对IPTG的终浓度、诱导温...
【文章来源】：河南农业大学河南省
【文章页数】：50 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
CSFV病毒粒子结构
图 2.CSFV 基因组的组织，多蛋白加工与蛋白拓扑结构[23]Fig.2 The organization of the CSFV genome, polyprotein processing and protein topography[23].2 猪瘟蛋白结构和功能核衣壳C蛋白位于多聚蛋白N端，Erns蛋白和蛋白水解酶Npro之间，分子量为14 kD[白是小分子衣壳蛋白，由 Arg、Lys 等 86 个氨基酸组成[25]。C 蛋白可调控病毒基因毒粒子的成熟，病毒粒子C蛋白与病毒基因组RNA形成的复合物可保护病毒基因组究表明 C 蛋白对于病毒的感染、组装以及病毒感染的发病机制起到重要作用[27]。Erns是由 227 个氨基酸组成的大小为 44 kD 的囊膜糖蛋白。Erns蛋白常通过二硫键连分子量为 100 kD 的同源二聚体[28]，最新研究表明 Erns蛋白糖基化位点与 CSFV 毒力定关系[29]。Erns可以附着于各物种的细胞表面，Erns的易位不依赖能量，同时不由蛋白介导，以便其通过真核细胞膜[30]。Erns蛋白可诱导淋巴细胞凋亡，在其缺失后，C明显下降[31]。E1 是由 195 个氨基酸组成的分子量约为 33 kD 的囊膜糖蛋白[32]。E1 和 E2 形成的聚体可介导 CSFV 入侵动物机体[33]。有学者发现在 Brescia 强毒株 E1 蛋白 C 端插入 1酸残基构成 CSFV 突变株[34]。突变株较 CSFV 强毒株，病毒复制减少，发病和传染
图 3.CSFV 与宿主细胞之间的相互作用途径[48]Figure.3 Interaction pathways between CSFV and host cells[48] 猪瘟病毒病原学和流行病学特征.1 病毒的病原学特征CSFV 是直径约为 50 nm 的球型病毒。基因组为单股正链的线状 RNA，形成对称的二面体结构。CSFV 可在 37 ℃培养物中存活 7 d，在 60 ℃存活 0.5 h，猪瘟病毒 56 ℃作用 以上才将其灭活[49]。CSFV 在弱碱或弱酸性环境中均保持稳定，其最适宜 pH 为 5.2。CSFV毒粒子在-70 ℃可存活多年不丧失感染性，对研究猪瘟流行病学有重要意义。目前大多数学者认为 CSFV 只有 1 种血清型，但血清中和试验及遗传进化研究结果表明FV 可能存在同一血清型的血清学亚种，分为 3 种基因群，其中我国广泛流行的为基因 250]。上世纪 60 年代中期，学者 Menge[51]分离出低毒力毒株。上世纪 70 年代末，日本科上条泰雄将 CSFV 株分成 B 群和 H 群，易发生中和反应的弱毒株称 B 群(弱毒株)，而发生中和反应的强毒株称 H 群[52]。.2 病毒的流行病学中国是生猪养殖业大国，每年因猪瘟造成大量的经济损失。我国于 1954 年研制出猪瘟
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪瘟研究现状简述[J]. 朱生荣. 国外畜牧学(猪与禽). 2017(06)
[2]新型猪瘟疫苗的研究进展[J]. 张双,郭慧,徐浩,孟繁星,胡桂学. 中国兽医杂志. 2015(01)
[3]猪瘟国内流行情况及净化技术[J]. 张浩吉. 兽医导刊. 2015(01)
[4]我国猪瘟流行现状与防控措施[J]. 范灿洪,杨大慰. 当代畜牧. 2014(33)
[5]猪瘟与猪弓形虫病的鉴别和诊治[J]. 路伟,李永彬,路方. 黑龙江畜牧兽医. 2014(12)
[6]国务院办公厅关于印发国家中长期动物疫病防治规划（2012—2020年）的通知[J]. 青海农牧业. 2013(02)
[7]猪瘟的流行特点及防制[J]. 王素坤. 养殖技术顾问. 2013(05)
[8]蛋白质的糖基化作用及其在生物制药中的应用[J]. 董炳梅,王金良,张春玲,魏凤,吕素芳,祖立闯,汪洋,沈志强. 中国畜牧兽医. 2012(11)
[9]中国猪瘟发生风险定性评估[J]. 姚文生,范学政,王琴,宁宜宝. 中国畜牧兽医. 2011(12)
[10]猪瘟病毒分子生物学与致病机制研究进展[J]. 南文金,胡鸿惠,彭国良,娄高明. 韶关学院学报. 2011(08)
博士论文
[1]基于DNA的核酸、酶及生物小分子的免标记荧光检测研究[D]. 刘文婷.武汉大学 2016
[2]CSFV和PCV2感染后免疫抑制性受体转录水平研究及阻断猪PD-1/PD-L1通路多肽基序鉴定[D]. 岳锋.四川农业大学 2015
[3]猪圆环病毒-Ⅱ型抗体检测免疫层析试纸的研制及单克隆抗体的筛选与鉴定[D]. 金前跃.河南农业大学 2012
[4]猪瘟病毒感染蛋白质组学研究[D]. 孙金福.吉林大学 2008
[5]猪水疱病和猪瘟基因工程亚单位疫苗的研究[D]. 田宏.西北农林科技大学 2006
[6]CSFV石门株基因组感染性克隆的构建与致细胞病变分子机制研究[D]. 吴海祥.武汉大学 2003
硕士论文
[1]猪瘟病毒囊膜E2蛋白原核表达及初步应用研究[D]. 郭鹤.吉林大学 2013
[2]广西CSFV地方株的分离、全基因序列测定分析和致病性研究[D]. 张民秀.广西大学 2012
[3]重组猪瘟病毒E2杆状病毒的构建及其在蚕蛹中表达重组猪瘟E2蛋白[D]. 胡刚叶.河南农业大学 2012
[4]PRRSV、CSFV和PCV-2多重PCR诊断方法及基因芯片诊断方法的建立[D]. 叶芬.西南大学 2011
[5]CSFV SM株感染对猪外周血白细胞的影响以及在猪体内的分布[D]. 周远成.四川农业大学 2009
[6]猪瘟病毒特异性单克隆抗体的研究[D]. 朱妍.吉林农业大学 2005
[7]猪瘟病毒SM株单克隆抗体的制备、初步鉴定及应用研究[D]. 韦英益.广西大学 2004
[8]猪瘟病毒E2基因的表达及其间接ELISA诊断方法的研究[D]. 胡慧.西北农林科技大学 2004
本文编号：3381274
【文章来源】：河南农业大学河南省
【文章页数】：50 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
CSFV病毒粒子结构
图 2.CSFV 基因组的组织，多蛋白加工与蛋白拓扑结构[23]Fig.2 The organization of the CSFV genome, polyprotein processing and protein topography[23].2 猪瘟蛋白结构和功能核衣壳C蛋白位于多聚蛋白N端，Erns蛋白和蛋白水解酶Npro之间，分子量为14 kD[白是小分子衣壳蛋白，由 Arg、Lys 等 86 个氨基酸组成[25]。C 蛋白可调控病毒基因毒粒子的成熟，病毒粒子C蛋白与病毒基因组RNA形成的复合物可保护病毒基因组究表明 C 蛋白对于病毒的感染、组装以及病毒感染的发病机制起到重要作用[27]。Erns是由 227 个氨基酸组成的大小为 44 kD 的囊膜糖蛋白。Erns蛋白常通过二硫键连分子量为 100 kD 的同源二聚体[28]，最新研究表明 Erns蛋白糖基化位点与 CSFV 毒力定关系[29]。Erns可以附着于各物种的细胞表面，Erns的易位不依赖能量，同时不由蛋白介导，以便其通过真核细胞膜[30]。Erns蛋白可诱导淋巴细胞凋亡，在其缺失后，C明显下降[31]。E1 是由 195 个氨基酸组成的分子量约为 33 kD 的囊膜糖蛋白[32]。E1 和 E2 形成的聚体可介导 CSFV 入侵动物机体[33]。有学者发现在 Brescia 强毒株 E1 蛋白 C 端插入 1酸残基构成 CSFV 突变株[34]。突变株较 CSFV 强毒株，病毒复制减少，发病和传染
图 3.CSFV 与宿主细胞之间的相互作用途径[48]Figure.3 Interaction pathways between CSFV and host cells[48] 猪瘟病毒病原学和流行病学特征.1 病毒的病原学特征CSFV 是直径约为 50 nm 的球型病毒。基因组为单股正链的线状 RNA，形成对称的二面体结构。CSFV 可在 37 ℃培养物中存活 7 d，在 60 ℃存活 0.5 h，猪瘟病毒 56 ℃作用 以上才将其灭活[49]。CSFV 在弱碱或弱酸性环境中均保持稳定，其最适宜 pH 为 5.2。CSFV毒粒子在-70 ℃可存活多年不丧失感染性，对研究猪瘟流行病学有重要意义。目前大多数学者认为 CSFV 只有 1 种血清型，但血清中和试验及遗传进化研究结果表明FV 可能存在同一血清型的血清学亚种，分为 3 种基因群，其中我国广泛流行的为基因 250]。上世纪 60 年代中期，学者 Menge[51]分离出低毒力毒株。上世纪 70 年代末，日本科上条泰雄将 CSFV 株分成 B 群和 H 群，易发生中和反应的弱毒株称 B 群(弱毒株)，而发生中和反应的强毒株称 H 群[52]。.2 病毒的流行病学中国是生猪养殖业大国，每年因猪瘟造成大量的经济损失。我国于 1954 年研制出猪瘟
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪瘟研究现状简述[J]. 朱生荣. 国外畜牧学(猪与禽). 2017(06)
[2]新型猪瘟疫苗的研究进展[J]. 张双,郭慧,徐浩,孟繁星,胡桂学. 中国兽医杂志. 2015(01)
[3]猪瘟国内流行情况及净化技术[J]. 张浩吉. 兽医导刊. 2015(01)
[4]我国猪瘟流行现状与防控措施[J]. 范灿洪,杨大慰. 当代畜牧. 2014(33)
[5]猪瘟与猪弓形虫病的鉴别和诊治[J]. 路伟,李永彬,路方. 黑龙江畜牧兽医. 2014(12)
[6]国务院办公厅关于印发国家中长期动物疫病防治规划（2012—2020年）的通知[J]. 青海农牧业. 2013(02)
[7]猪瘟的流行特点及防制[J]. 王素坤. 养殖技术顾问. 2013(05)
[8]蛋白质的糖基化作用及其在生物制药中的应用[J]. 董炳梅,王金良,张春玲,魏凤,吕素芳,祖立闯,汪洋,沈志强. 中国畜牧兽医. 2012(11)
[9]中国猪瘟发生风险定性评估[J]. 姚文生,范学政,王琴,宁宜宝. 中国畜牧兽医. 2011(12)
[10]猪瘟病毒分子生物学与致病机制研究进展[J]. 南文金,胡鸿惠,彭国良,娄高明. 韶关学院学报. 2011(08)
博士论文
[1]基于DNA的核酸、酶及生物小分子的免标记荧光检测研究[D]. 刘文婷.武汉大学 2016
[2]CSFV和PCV2感染后免疫抑制性受体转录水平研究及阻断猪PD-1/PD-L1通路多肽基序鉴定[D]. 岳锋.四川农业大学 2015
[3]猪圆环病毒-Ⅱ型抗体检测免疫层析试纸的研制及单克隆抗体的筛选与鉴定[D]. 金前跃.河南农业大学 2012
[4]猪瘟病毒感染蛋白质组学研究[D]. 孙金福.吉林大学 2008
[5]猪水疱病和猪瘟基因工程亚单位疫苗的研究[D]. 田宏.西北农林科技大学 2006
[6]CSFV石门株基因组感染性克隆的构建与致细胞病变分子机制研究[D]. 吴海祥.武汉大学 2003
硕士论文
[1]猪瘟病毒囊膜E2蛋白原核表达及初步应用研究[D]. 郭鹤.吉林大学 2013
[2]广西CSFV地方株的分离、全基因序列测定分析和致病性研究[D]. 张民秀.广西大学 2012
[3]重组猪瘟病毒E2杆状病毒的构建及其在蚕蛹中表达重组猪瘟E2蛋白[D]. 胡刚叶.河南农业大学 2012
[4]PRRSV、CSFV和PCV-2多重PCR诊断方法及基因芯片诊断方法的建立[D]. 叶芬.西南大学 2011
[5]CSFV SM株感染对猪外周血白细胞的影响以及在猪体内的分布[D]. 周远成.四川农业大学 2009
[6]猪瘟病毒特异性单克隆抗体的研究[D]. 朱妍.吉林农业大学 2005
[7]猪瘟病毒SM株单克隆抗体的制备、初步鉴定及应用研究[D]. 韦英益.广西大学 2004
[8]猪瘟病毒E2基因的表达及其间接ELISA诊断方法的研究[D]. 胡慧.西北农林科技大学 2004
本文编号：3381274
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