E3泛素连接酶RNF114通过泛素化降解NS4B蛋白抑制猪瘟病毒复制

发布时间：2021-09-03 17:23

　　猪瘟是一种猪的烈性传染病,其病原体猪瘟病毒（CSFV）属于黄病毒科瘟病毒属成员。蛋白质的泛素化修饰是一种重要而广泛的修饰过程,参与细胞内许多生理过程。宿主利用泛素化修饰抵抗病毒的感染,而病毒利用泛素化修饰介导免疫逃逸。目前,文献相继报道,蛋白质的泛素化修饰参与黄病毒科病毒的生命周期。前期,本实验室将表达萤火虫荧光素酶的报告病毒（rCSFV-Fluc）感染过表达猪源干扰素刺激基因（ISGs）的PK-15细胞系,筛选到E3泛素连接酶RNF114（ZNF313）为一种潜在的抗CSFV宿主分子,但其抗病毒机制尚不清楚。本研究旨在证实猪源RNF114（pRNF114）的抗CSFV活性,并解析其抑制CSFV复制的分子机制。我们检测了CSFV感染过程中pRNF114的表达情况,结果表明,在CSFV-SM株感染猪的外周血单个核细胞（体内）以及CSFV感染的PK-15、肺泡巨噬细胞和外周血单个核细胞（体外）中,RNF114的mRNA水平随着CSFV感染时间、感染剂量的增加而上调,说明pRNF114参与调控CSFV的复制。在pRNF114抗病毒功能方面:我们将不同剂量（MOI=0.01和0.1）的rCSF... 

【文章来源】：中国农业科学院北京市

【文章页数】：52 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

猪瘟病毒基因组结构模式图（Jietal.,2015）

中国农业科学院硕士学位论文 第二章 E3 泛素连接酶 pRNF114 的抗猪瘟病毒活性研究检测 pRNF114 的 mRNA 水平，发现随着感染时间的延长，pRNF114 mRNA 水平上调（图 3A），在感染后 1 d 达到最高，3 d 和 5 d 有下降的趋势，可能是由于机体的调节作用。同时，将 MOI=0.1CSFV-SM株分别接种PBMCs、PK-15和PAM细胞，于感染后6和12 h，分别检测细胞内的pRNF114的 mRNA 水平，发现随着感染时间的增加，pRNF114 mRNA 水平上调（图 3B、C 和 D）。此外，将不同剂量的 CSFV-SM 株感染 PAMs 细胞，发现 pRNF114 的转录水平随着感染剂量的增加而上调（图 3E）。以上结果说明，CSFV 感染后诱导 pRNF114 表达上调，提示 pRNF114 在 CSFV 感染过程中发挥一定的作用。

敲除内源性 RNF114 后，细胞内的荧光素酶活性（图 5C），病毒基因组拷贝数（图5D）和病毒滴度（图 5E）均显著上升，说明敲除内源性 RNF114 促进 CSFV 复制。过表达和敲除试验均证实，pRNF114 具有抗 CSFV 复制的活性。

【参考文献】：
期刊论文
[1]中国猪瘟净化之路:离我们还有多远?[J]. 孙元,仇华吉.  中国农业科学. 2018(21)
[2]猪瘟兔化弱毒疫苗——半个世纪的回顾[J]. 仇华吉,童光志,沈荣显.  中国农业科学. 2005(08)



本文编号：3381538