牛结核/布病双重抗体检测胶体金试纸条方法的初步建立

发布时间：2021-09-06 05:31

　　牛布鲁氏菌病（Brucellosis,简称布病）和牛结核病（Bovine Tuberculosis）是牛的两个最重要的人兽共患传染病,简称,“两病”。牛布病是由布鲁氏菌（Brucella）引起的一种人畜共患传染病,主要引起反刍动物的流产、不育和人类的慢性感染和波状热；牛结核病主要由牛分枝杆菌（Mycobacterium bovis）引起；除牛结核外,分枝杆菌也是人结核的重要病因之一。“两病”严重危害了人类健康和养殖业的发展。目前在我国,牛“两病”实行春秋两次检疫,因此准确、便捷的诊断,对有效控制“两病”,保障人类及动物健康,显得极为重要。常规布病检测方法主要是检测血清中布鲁氏菌脂多糖（Lipopolysaccharide, LPS）抗体,结核检疫方法为结核菌素皮内变态反应实验。传统的“两病”检测方法费时费力,并存在非特异性,本研究旨在建立一种特异、灵敏、简便的牛“两病”双重胶体金免疫层析检测方法,检测样本为血清,以便实现牛“两病”联合检测,减少采样次数,简化检测程序,消除非特异性,提高检测效率,同时减少劳动力成本和牛群应激反应。在布病血清学检测方面,传统的布鲁氏菌血清学检测方法都是基于... 

【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略语表(Abbreviation)
1 前言
    1.1 研究问题的由来
    1.2 文献综述
        1.2.1 布鲁氏菌病的流行情况
        1.2.2 布鲁氏菌病的危害
        1.2.3 布鲁氏菌结构
        1.2.4 布鲁氏菌病的主要诊断方法
        1.2.5 布鲁氏菌疫苗研究进展
        1.2.6 牛结核病流行现状
        1.2.7 牛结核病主要诊断方法
        1.2.8 SPG分子结构及与IgG的结合特性
        1.2.9 SPG的应用
        1.2.10 胶体金免疫层析原理
        1.2.11 胶体金免疫层析技术的优势
    1.3 研究目的
2 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 菌种及质粒
        2.1.2 主要仪器
        2.1.3 主要药品
    2.2 方法
        2.2.1 P17、Omp25、bp26基因的引物设计及PCR扩增
        2.2.2 重组质粒pET-30a-p17,pET-30a-Omp25,pET-30a-bp26的构建
        2.2.3 重组蛋白p17、Omp25、bp26的表达、鉴定和纯化
        2.2.4 Western blot鉴定重组蛋白P17、Omp25、bp26免疫原性
        2.2.5 p17、Omp25、bp26重组蛋白的ELISA活性分析
        2.2.6 重组SPG-(C3)_4(D)_3,SPG-(C3)_4(D)_3(Cys)_2基因的设计
        2.2.7 SPG-(C3)_4(D)_3,SPG-(C3)_4(D)_3(Cys)_2基因的克隆
        2.2.8 SPG-(C3)_4(D)_3,SPG-(C3)_4(D)_3(Cys)_2基因的原核表达及鉴定
        2.2.9 胶体金-SPG-(C3)_4(D)_3(Cys)_2复合物的制备
        2.2.10 胶体金试纸条的制备
        2.2.11 胶体金试纸条检测效果评价
3 结果与分析
    3.1 重组蛋白P17、OMP25及BP26的表达及鉴定
        3.1.1 P17、OMP25及BP26扛原表位的预测结果
        3.1.2 p17、Omp25、bp26基因的克隆与鉴定
        3.1.3 重组蛋白p17、Omp25、bp26的表达
        3.1.4 重组蛋白p17、Omp25、bp26反应原性分析
    3.2 重组蛋白SPG-(C3)_4(D)_3,SPG-(C3)_4(D)_3(Cys)_2的表达及鉴定
        3.2.1 SPG-(C3)_4(D)_3,SPG-(C3)_4(D)_3(Cys)_2表达载体的构建
        3.2.2 重组蛋白SPG-(C3)_4(D)_3,SPG-(C3)_4(D)_3(Cys)_2的表达
        3.2.3 Western blot分析SPG-(C3)_4(D)_3,SPG-(C3)_4(D)_3(Cys)_2
        3.2.4 SPG-(C3)_4(D)_3在牛结核抗体检测胶体金试纸条中的初步应用
    3.3 牛结核/布病抗体双重检测试纸条
        3.3.1 胶体金试纸条的制备
        3.3.2 胶体金试纸条初步应用
4 讨论
    4.1 布鲁氏菌特异性检测抗原的选择
    4.2 重组SPG蛋白IGG结合区的多拷贝表达
    4.3 牛结核/布病双重抗体检测胶体金试纸条检测效果
5 结论
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]光滑型布鲁杆菌抗体竞争ELISA检测方法的建立[J]. 王加兰,胡森,高红霞,郑孝辉,步志高.  中国兽医科学. 2009(09)
[2]布鲁菌种属鉴定多重PCR方法的建立及初步应用[J]. 丁家波,张存帅,彭小兵,蒋颖,程君生,张尔利,蒋玉文,毛开荣.  中国兽医学报. 2009(05)
[3]中国布鲁氏菌病疫情监测与控制[J]. 崔步云.  疾病监测. 2007(10)
[4]四种牛分枝杆菌特异性蛋白融合表达及在牛结核病诊断中的临床应用[J]. 吴波,张书环,邓铨涛,项杰,陈军,刘朝,陈鑫,宋念华,陶淑珍,黄继根,韩永佩,赵波,林祥梅,陈焕春,郭爱珍.  中国奶牛. 2007(10)
[5]牛结核病抗体胶体金快速检测技术的建立和应用[J]. 张书环,杨俊兴,晁彦杰,颜邦芬,吴波,曹莎,陈颖钰,谭亚娣,陈焕春,郭爱珍.  动物医学进展. 2007(07)
[6]布氏杆菌病疫苗的应用和研究现状[J]. 丁家波,毛开荣,程君生,戴志红,蒋玉文.  微生物学报. 2006(05)
[7]布鲁氏菌病感染与免疫研究近况(续前)[J]. 尚德秋.  中国地方病防治杂志. 2003(03)
[8]布鲁氏菌病免疫制剂现况[J]. 尚德秋.  地方病通报. 2000(01)
[9]链球菌蛋白G应用于ELISA的实验研究[J]. 曹之舫,王皓.  中华微生物学和免疫学杂志. 1994(05)
[10]链球菌蛋白G——一种优于葡萄球菌蛋白A的IgG结合物[J]. 曹之舫,武建国.  国外医学(微生物学分册). 1989(05)

硕士论文
[1]家畜布鲁氏菌病流行病学调查及布鲁氏菌单核苷酸多态性分子分型研究[D]. 莫莎.南京农业大学 2011
[2]布鲁氏菌BLS-L7/L12重组亚单位疫苗的初步研究[D]. 周丽丽.中国人民解放军军事医学科学院 2007



本文编号：3386843