猪圆环病毒2型Cap蛋白基因在毕赤酵母中的表达与复合水佐剂的研制

发布时间：2021-09-08 09:58

　　猪圆环病毒2型（PCV2）可以引起一系列相关疾病,统称为猪圆环病毒相关疾病（PCVAD）,临床典型的有断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）、猪皮炎和肾病综合征（PDNS）等。PCV2还可以破坏猪体免疫系统,引起猪细小病毒病、副猪嗜血杆菌病、巴氏杆菌病等疾病的混合或继发感染,给养猪业带来了巨大的经济损失。Cap蛋白由病毒基因ORF2编码,是PCV2的主要结构蛋白,具有PCV2的主要抗原表位,是PCV2疫苗和诊断试剂研究的主要靶向抗原。目前,我国已经研制成功PCV2灭活疫苗,但安全性和免疫效力还不十分理想。本研究研制比较了PCV2疫苗用新型复合水佐剂,并且尝试用毕赤酵母表达PCV2 Cap蛋白,为未来廉价PCV2疫苗研制奠定了基础。具体研究内容如下：1、PCV2灭活疫苗新型水佐剂研制本研究以水性高分子聚合物卡波姆（CP）为基础,首先通过添加适量H和T蛋白,配置成两种水溶性佐剂CPH和CPT,小鼠免疫试验结果显示,CPH佐剂可以明显增强PCV2灭活抗原抗体水平。然后以CP为基础,添加不同剂量的H蛋白,并以商品化的ISA206和Gel佐剂为对照,制成PCV2灭活疫苗,小鼠免疫试验结果显示,CP... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：93 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 猪圆环病毒病诊断与疫苗研究进展
    1 病原学
        1.1 病毒形态
        1.2 病毒基因组与编码蛋白
        1.3 病毒致病性
        1.4 PCV2传播
    2 诊断技术
        2.1 病原学诊断
        2.2 血清学诊断
    3 免疫防控
        3.1 全病毒灭活疫苗
        3.2 单位疫苗
        3.3 活载体疫苗
        3.4 基因疫苗
        3.5 弱毒疫苗
        3.6 PCV2疫苗佐剂
    参考文献
第二章 猪圆环病毒2型灭活疫苗新型复合水性佐剂的研制
    1 材料与方法
        1.1 病毒、实验动物和主要试剂
        1.2 比较CP、CPH、CPT的佐剂效果
        1.3 CPH佐剂中H蛋白的最适比例
        1.4 CPH佐剂与商品佐剂的比较
        1.5 CPH佐剂疫苗猪体免疫保护试验
        1.6 数据的统计与分析
    2 结果
        2.1 不同佐剂免疫效果的比较
        2.2 CPH佐剂中H蛋白最适浓度的筛选
        2.3 CPH佐剂与商品佐剂的比较
        2.4 猪体免疫保护试验
    3 讨论
    参考文献
第三章 猪圆环病毒2型Cap蛋白在毕赤酵母中的表达
    1 材料与方法
        1.1 主要试剂
        1.2 引物设计
        1.3 重组质粒的构建
        1.4 重组质粒线性化
        1.5 酵母GS115菌株感受态的制备
        1.6 重组质粒电转化入酵母感受态
        1.7 重组酵母菌株的筛选
        1.8 重组酵母菌株的PCR鉴定
        1.9 目的蛋白诱导表达
        1.10 表达上清中蛋白浓度测定及浓缩
        1.11 诱导产物的SDS-PAGE分析
        1.12 诱导上清的Western-blot鉴定
        1.13 电子显微镜下各蛋白形态特征
    2 结果
        2.1 目的基因的扩增
        2.2 重组质粒的鉴定
        2.4 诱导产物SDS-PAGE
        2.5 诱导产物Western-blot鉴定
        2.6 电镜观察
    3 讨论
    参考文献
第四章 酵母表达Cap蛋白的免疫特性研究
    1 材料与方法
        1.1 主要试剂
        1.2 夹心ELISA方法测定不同蛋白抗原性
        1.3 不同疫苗的配制和小鼠免疫
        1.4 PCV2特异性ELISA抗体的检测
        1.5 血清中和抗体的检测
        1.6 淋巴细胞转化增殖实验
        1.7 数据统计与分析
    2 结果
        2.1 夹心ELISA测定不同蛋白结果
        2.2 小鼠血清ELISA抗体水平
        2.3 血清中和抗体结果
        2.4 小鼠淋巴细胞增殖转化结果
    3 讨论
    参考文献
全文总结
附录
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]几种佐剂对猪支原体肺炎灭活疫苗的免疫增强作用比较[J]. 董璐,熊祺琰,刘茂军,韦艳娜,冯志新,白方方,王海燕,邵国青.  中国预防兽医学报. 2014(01)
[2]油乳佐剂及其安全性研究进展[J]. 陈世豪,郝同杨,施祖灏,高玉时,陆俊贤.  中国家禽. 2013(16)
[3]基因佐剂的研究进展[J]. 满朝来,常杨,唐高霞,赵丽,李凤,甄鑫,弭晓菊.  中国生物工程杂志. 2013(07)
[4]复合佐剂的研究进展[J]. 肖建雄,罗满林.  广东畜牧兽医科技. 2013(01)
[5]兽用疫苗佐剂研究现状[J]. 戴波涛,赵刚.  现代畜牧兽医. 2013(02)
[6]猪圆环病毒2型疫苗的研究进展[J]. 王一平,郭龙军,唐青海,刘长明.  畜牧兽医学报. 2012(09)
[7]毕赤酵母蛋白表达系统研究进展[J]. 杨梅,温真,林丽玉,杨彩云.  生物技术通报. 2011(04)
[8]巴斯德毕赤酵母表达系统的研究进展和前景展望[J]. 娄瑞娟,罗利龙,张霞,张瑞刚,宋水山.  生物学杂志. 2010(05)
[9]An ELISA Based on a Truncated Soluble ORF2 Protein for the Detection of PCV2 Antibodies in Domestic Pigs[J]. Shuang-hui YIN, Shun-li YANG, Hong TIAN, Jin-yan WU, You-jun SHANG, Xue-peng CAI and Xiang-tao LIU (Lanzhou Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, State Key Laboratory of Veterinary Etiological Biology, Key Laboratory of Animal Virology of Ministry of Agriculture, Lanzhou 730046, China).  Virologica Sinica. 2010(03)
[10]猪圆环病毒2型Cap蛋白核定位信号区抗原表位的鉴定[J]. 郭龙军,陆月华,黄立平,危艳武,刘长明.  中国农业科学. 2010(07)



本文编号：3390582