猪圆环病毒2型ORF3蛋白的表达、抗原性鉴定及初步应用
发布时间：2021-09-08 12:28
猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2,PCV-2）是造成断奶仔猪多系统衰竭综合症（Postweanig multisystemic wasting syndrome,PMWS）的主要病原,也可导致免疫抑制,引起其它相关疾病的并发和继发感染,给养猪业造成了巨大的经济损失。疫苗免疫接种是预防PCV-2的主要措施,免疫猪群中仍会存在野毒感染的猪。要将其从免疫猪群中淘汰,必须要建立能大规模鉴别野毒感染的方法。本研究的目的就是建立检测PCV-2野毒感染抗体的ELISA方法。为鉴定PCV-2 ORF3蛋白的抗原性,本实验首先将ORF3基因插入pT7-IRES表达载体,使用体外无细胞蛋白合成系统进行蛋白表达,用PCV-2野毒感染猪的血清对表达蛋白的抗原性进行Western-blot鉴定。为获得大量的表达蛋白进行纯化和ELISA方法的建立,将其插入pET-28a表达载体构建重组表达质粒,鉴定后进行纯化,随后用其作为包被抗原建立间接ELISA,并对临床野毒感染样品进行了检测。试验结果表明,PCV-2 ORF3基因被插入pT7-IRES表达载体,构建成功pT7-PCV-2-O...
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
PCV2ORF3基因的扩增Figure2-1PCRamplificationofPCV2ORF3geneM.2000bpDNAMarker；1.阴性对照；2.PCR产物M.2000bpDNAMarker；1.negativecontrol；2.PCR
ES 质粒的线性化2 所示：将 pT7-IREF 质粒酶切后进行胶回收，在 3300bp 处出条带，说明成功将 pT7-IRES 质粒线性化。达质粒的鉴定成功的菌株过夜培养后，抽提质粒，对质粒进行 PCR 和双酶泳观察，如图 2-3，PCR 结果显示扩增出单独一条 315bp 条带 3300bp 和 315bp 两条核酸条带。结果说明成功构建了表达质R amplification of PCV2 ORF3 geneNA Marker；1.阴性对照；2.PCR 产物NA Marker；1.negative control；2.PCRamplification products图 2-2 pT7-IRES 质粒的线性Fig.2-2 Linearization of pT7-IRESM.5000bp DNA Marker；1.pT7-IRES 质M.5000bp DNA Marker；1.LinearizpT7-IRES plasmids
Western-Blot 鉴定考马斯亮蓝染色条带大约 13.5K以看到阳性样品PAGE 和 Western-的制备 2-3 质粒双酶切ble enzyme digestionDNA Marker;1.PCR 扩增Marker;1.PCR amplificatdigestion
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪圆环病毒2型ORF3蛋白的表达及抗原性鉴定[J]. 刘梦志,陈欣,金淑秀,张艺凡,蒋佳羲,刘宝山. 中国兽医杂志. 2017(10)
[2]猪瘟兔化弱毒疫苗与猪圆环病毒2型灭活疫苗同时接种的免疫效果评价[J]. 朱子健,唐志芬,杨金雨,闫丽辉,夏伟,付彤,朱庆虎. 中国预防兽医学报. 2017(02)
[3]猪圆环病毒病的中西医结合疗法[J]. 车书云. 中兽医学杂志. 2017(01)
[4]一种猪圆环病毒疫苗的免疫效果评估[J]. 高纪振,安强,王和平,马沛,喻正军. 湖南畜牧兽医. 2016(03)
[5]猪圆环病毒2型分子流行病学及疫苗研究进展[J]. 赵晨辰,王敏,刘长辉,牟巍,马阿丽,马惠宇,张家旺,赵亚荣,王贵华. 中国兽药杂志. 2015(02)
[6]猪圆环病毒的研究进展[J]. 薛健. 国外畜牧学(猪与禽). 2014(12)
[7]猪圆环病毒病的研究进展[J]. 孙健,杨久仙. 黑龙江畜牧兽医. 2014(13)
[8]猪圆环病毒2型引起相关肠炎疾病的研究进展[J]. 袁婧,魏萍,刘长明. 动物医学进展. 2013(10)
[9]猪圆环病毒2型ORF3基因的表达及其表达产物免疫小鼠后致细胞因子变化的研究[J]. 王亚军,杨顺利,才学鹏. 中国兽医科学. 2013(06)
[10]猪圆环病毒2型ORF3基因的克隆及原核表达[J]. 杨晓燕,刘航,杨顺利,尹双辉,尚佑军,田永强. 湖南农业科学. 2012(03)
硕士论文
[1]PCV2感染性克隆构建及ORF3蛋白功能研究[D]. 雷战.山东农业大学 2011
本文编号：3390787
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
PCV2ORF3基因的扩增Figure2-1PCRamplificationofPCV2ORF3geneM.2000bpDNAMarker；1.阴性对照；2.PCR产物M.2000bpDNAMarker；1.negativecontrol；2.PCR
ES 质粒的线性化2 所示：将 pT7-IREF 质粒酶切后进行胶回收，在 3300bp 处出条带，说明成功将 pT7-IRES 质粒线性化。达质粒的鉴定成功的菌株过夜培养后，抽提质粒，对质粒进行 PCR 和双酶泳观察，如图 2-3，PCR 结果显示扩增出单独一条 315bp 条带 3300bp 和 315bp 两条核酸条带。结果说明成功构建了表达质R amplification of PCV2 ORF3 geneNA Marker；1.阴性对照；2.PCR 产物NA Marker；1.negative control；2.PCRamplification products图 2-2 pT7-IRES 质粒的线性Fig.2-2 Linearization of pT7-IRESM.5000bp DNA Marker；1.pT7-IRES 质M.5000bp DNA Marker；1.LinearizpT7-IRES plasmids
Western-Blot 鉴定考马斯亮蓝染色条带大约 13.5K以看到阳性样品PAGE 和 Western-的制备 2-3 质粒双酶切ble enzyme digestionDNA Marker;1.PCR 扩增Marker;1.PCR amplificatdigestion
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪圆环病毒2型ORF3蛋白的表达及抗原性鉴定[J]. 刘梦志,陈欣,金淑秀,张艺凡,蒋佳羲,刘宝山. 中国兽医杂志. 2017(10)
[2]猪瘟兔化弱毒疫苗与猪圆环病毒2型灭活疫苗同时接种的免疫效果评价[J]. 朱子健,唐志芬,杨金雨,闫丽辉,夏伟,付彤,朱庆虎. 中国预防兽医学报. 2017(02)
[3]猪圆环病毒病的中西医结合疗法[J]. 车书云. 中兽医学杂志. 2017(01)
[4]一种猪圆环病毒疫苗的免疫效果评估[J]. 高纪振,安强,王和平,马沛,喻正军. 湖南畜牧兽医. 2016(03)
[5]猪圆环病毒2型分子流行病学及疫苗研究进展[J]. 赵晨辰,王敏,刘长辉,牟巍,马阿丽,马惠宇,张家旺,赵亚荣,王贵华. 中国兽药杂志. 2015(02)
[6]猪圆环病毒的研究进展[J]. 薛健. 国外畜牧学(猪与禽). 2014(12)
[7]猪圆环病毒病的研究进展[J]. 孙健,杨久仙. 黑龙江畜牧兽医. 2014(13)
[8]猪圆环病毒2型引起相关肠炎疾病的研究进展[J]. 袁婧,魏萍,刘长明. 动物医学进展. 2013(10)
[9]猪圆环病毒2型ORF3基因的表达及其表达产物免疫小鼠后致细胞因子变化的研究[J]. 王亚军,杨顺利,才学鹏. 中国兽医科学. 2013(06)
[10]猪圆环病毒2型ORF3基因的克隆及原核表达[J]. 杨晓燕,刘航,杨顺利,尹双辉,尚佑军,田永强. 湖南农业科学. 2012(03)
硕士论文
[1]PCV2感染性克隆构建及ORF3蛋白功能研究[D]. 雷战.山东农业大学 2011
本文编号：3390787
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3390787.html
