猪CR1-like基因全长cDNA和部分DNA片段的克隆及序列生物信息学分析
发布时间：2021-09-09 13:49
目的：本实验以猪为研究对象设计实验,为进一步研究猪红细胞免疫功能,我们从分子水平上克隆猪CRl-like基因序列,并且分析该基因的特征。方法：运用RT-PCR （Reverse transcription-polymerase chain reaction）和RACE （Rapid-amplification of cDNA ends）技术克隆猪CR1-like基因全长cDNA,运用普通PCR克隆猪CR1-like基因的启动子区域,结合生物信息学方法分析克隆的序列。结果：猪CR1-like基因全长cDNA为4391bp,包含3996bp的ORF（Open reading frame）,37bp的5’UTR （Untranslated regions）和358bp的3’UTR,该基因位于猪第九号染色体；通过对猪全血基因组DNA的PCR扩增,得到了4872bp的猪CR1-like基因的富含转录因子结合位点的启动子区域序列。此外,生物信息学分析表明：预测猪的CR1-like蛋白分子质量为146.6kD,理论等电点为7.95；该蛋白共编码1331个氨基酸,由包含19个SCR （Short co...
【文章来源】：山西农业大学山西省
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１人Ａ型Ｅ－Ｃ民１示意图：Ｓｉｔｅｌ所示ｓｃ民位置（ＳＣＲｓ?１－３）结合Ｃ４ｂ，?Ｓｉｔｅ２所示ＳＣＲ位置（ＳＣＲｓ??８－１０、１５－１７）结合Ｃ３ｂ／Ｃ４ｂ；?ＳＣ民２５血
ｃｏｍｐｅｍｅｎａｒｙ，为１组，其内部序列具有高度的同源性，因此形成了?４个长同源重复序列（Ｌｏｎｇ??ｏｕｓ?ｒｅｐｅａｔ，?ＬＨＲ），仅ＳＣＲ?２９与ＳＣＲ?３０不是ＬＨＲ的组成部分，从Ｎ端巧始，??为ＬＨＲ－Ａ，ＬＨＲ－Ｂ，ＬＨＲ－Ｃ，ＬＨＲ－Ｄ，ＬＨＲ是ＣＲ１的独特标志［１〇］。相关试验??ＬＨＲ－Ａ中有一个Ｃ４ｂ结合位点并具有补体转化酶衰变加速活性，ＬＨ民－Ｂ和??有一个Ｃ３ｂ／Ｃ４ｂ结合位点并具有因子Ｉ辅助因子活性，该试验中利用点巧变研??证实了?Ｃ３ｂ的结合位晉在ＳＣＲＳ８－１０和１５－１７，Ｃ４ｂ的结合位賈在ＳＣＲ１－３［Ｗ??ＬＨ民－Ｄ有ＭＢＬ［口］（Ｍａｎｎａｎ－ｂｉｎｇｄｉｎｇ?ｌｅｃｔｉｎ）和?Ｃｌｑ［＂喃结合位点，并且在?ＳＣ民－２５??（Ｓｗａｉｎ－ｌａｎｇｌｅｙ）和ＭｃＣ?（ＭｃＣｏｙ）的结合位点［Ｗ。在Ａ型Ｅ－ＣＲ１中，由７个??序列分隔形成的ＳＣＲ彼此具有同源性（例如ＳＣＲ?３、１０及１７），仅Ｎ－端的ＳＣ民???２是例外的，这种同源性模式在ＳＣ民１８和ＳＣＲ?２８之后略有变化。因此，在??８?Ｗ及ＳＣＲｓｌ９－２８的碱基序列内，每对由７个重复序列间隔形成的ＳＣ艮之间存??上的同源性（例如ＳＣ民Ｓ３－９和ＳＣ民ｓｌＯ－１６，?ＳＣＲｓｌＯ－１１和ＳＣＲＳ１７－１８之间的同??９９〇／〇）。正是Ｗ上所化的ＳＣＲ特征的存在，导致ＣＲ１各个ＬＨ民之间同源性为??不等［１５３。??＾?ＵｉＨ?Ａ?＂?ＬＨＲＢ?■【?ＬＨＲＣ?■?，?ＬＨＲ?Ｄ??
【参考文献】：
期刊论文
[1]感染猪放线杆菌（Ⅰ型）对猪红细胞免疫功能的影响[J]. 左之才,崔恒敏,甘梦,彭西,邓俊良. 东北农业大学学报. 2012(12)
[2]黄芪杂多糖调节AA小鼠红细胞免疫黏附功能的研究[J]. 杨丽华,邱建东,李宏全. 药学学报. 2009(12)
[3]温度对中华大蟾蜍和中华鳖冬眠前离体红细胞免疫功能及其大小的影响[J]. 董晓敏,周显青,王迎. 动物学杂志. 2009(03)
[4]Effect of Astragalus polysaccharides on Erythrocyte Immune Adherence of Chickens Inoculated with Infectious Bursal Disease Virus[J]. Lloyd Reeve-Johnson. Agricultural Sciences in China. 2007(11)
[5]酵母活性物质对断乳仔猪红细胞免疫功能的影响[J]. 王玲,蒲万霞,扎西英派,索朗斯珠,孟晓琴,李芸,程胜利,孟聚诚,华兰英. 动物医学进展. 2007(08)
[6]红细胞免疫的物质基础及影响因素[J]. 赵孟春,李宏全,段瑞旭,白瑞. 浙江畜牧兽医. 2007(03)
[7]补体受体1型的结构功能及sCR1基因克隆表达的策略[J]. 罗雪,汪正清. 创伤外科杂志. 2005(06)
[8]高渗盐水处理对失血性休克兔红细胞免疫黏附功能及抗细菌感染的影响[J]. 李汉臣,秦兆寅,纪宗正,黎一鸣,刘先珍,王喜青,金绍岐. 细胞与分子免疫学杂志. 2004(06)
[9]附红细胞体自然感染对猪红细胞的影响[J]. 马海利,韩惠瑛,王胜,郑明学,李宏全,宁官保. 中国预防兽医学报. 2003(04)
[10]11类哺乳类和鸟类动物红细胞免疫功能的对比研究[J]. 王旭东,饶家荣,李正甫,朱文斌,杨红华,周述成,李天祥,张世洪. 畜牧兽医学报. 1995(06)
博士论文
[1]红细胞免疫分子、T细胞亚群水平及相关基因单核苷酸多态性与系统性红斑狼疮、肝细胞癌的关联研究[D]. 胡金川.中国人民解放军军医进修学院 2009
硕士论文
[1]不同发育阶段WHBE兔红细胞免疫特性研究[D]. 潘永明.浙江大学 2009
本文编号：3392207
【文章来源】：山西农业大学山西省
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１人Ａ型Ｅ－Ｃ民１示意图：Ｓｉｔｅｌ所示ｓｃ民位置（ＳＣＲｓ?１－３）结合Ｃ４ｂ，?Ｓｉｔｅ２所示ＳＣＲ位置（ＳＣＲｓ??８－１０、１５－１７）结合Ｃ３ｂ／Ｃ４ｂ；?ＳＣ民２５血
ｃｏｍｐｅｍｅｎａｒｙ，为１组，其内部序列具有高度的同源性，因此形成了?４个长同源重复序列（Ｌｏｎｇ??ｏｕｓ?ｒｅｐｅａｔ，?ＬＨＲ），仅ＳＣＲ?２９与ＳＣＲ?３０不是ＬＨＲ的组成部分，从Ｎ端巧始，??为ＬＨＲ－Ａ，ＬＨＲ－Ｂ，ＬＨＲ－Ｃ，ＬＨＲ－Ｄ，ＬＨＲ是ＣＲ１的独特标志［１〇］。相关试验??ＬＨＲ－Ａ中有一个Ｃ４ｂ结合位点并具有补体转化酶衰变加速活性，ＬＨ民－Ｂ和??有一个Ｃ３ｂ／Ｃ４ｂ结合位点并具有因子Ｉ辅助因子活性，该试验中利用点巧变研??证实了?Ｃ３ｂ的结合位晉在ＳＣＲＳ８－１０和１５－１７，Ｃ４ｂ的结合位賈在ＳＣＲ１－３［Ｗ??ＬＨ民－Ｄ有ＭＢＬ［口］（Ｍａｎｎａｎ－ｂｉｎｇｄｉｎｇ?ｌｅｃｔｉｎ）和?Ｃｌｑ［＂喃结合位点，并且在?ＳＣ民－２５??（Ｓｗａｉｎ－ｌａｎｇｌｅｙ）和ＭｃＣ?（ＭｃＣｏｙ）的结合位点［Ｗ。在Ａ型Ｅ－ＣＲ１中，由７个??序列分隔形成的ＳＣＲ彼此具有同源性（例如ＳＣＲ?３、１０及１７），仅Ｎ－端的ＳＣ民???２是例外的，这种同源性模式在ＳＣ民１８和ＳＣＲ?２８之后略有变化。因此，在??８?Ｗ及ＳＣＲｓｌ９－２８的碱基序列内，每对由７个重复序列间隔形成的ＳＣ艮之间存??上的同源性（例如ＳＣ民Ｓ３－９和ＳＣ民ｓｌＯ－１６，?ＳＣＲｓｌＯ－１１和ＳＣＲＳ１７－１８之间的同??９９〇／〇）。正是Ｗ上所化的ＳＣＲ特征的存在，导致ＣＲ１各个ＬＨ民之间同源性为??不等［１５３。??＾?ＵｉＨ?Ａ?＂?ＬＨＲＢ?■【?ＬＨＲＣ?■?，?ＬＨＲ?Ｄ??
【参考文献】：
期刊论文
[1]感染猪放线杆菌（Ⅰ型）对猪红细胞免疫功能的影响[J]. 左之才,崔恒敏,甘梦,彭西,邓俊良. 东北农业大学学报. 2012(12)
[2]黄芪杂多糖调节AA小鼠红细胞免疫黏附功能的研究[J]. 杨丽华,邱建东,李宏全. 药学学报. 2009(12)
[3]温度对中华大蟾蜍和中华鳖冬眠前离体红细胞免疫功能及其大小的影响[J]. 董晓敏,周显青,王迎. 动物学杂志. 2009(03)
[4]Effect of Astragalus polysaccharides on Erythrocyte Immune Adherence of Chickens Inoculated with Infectious Bursal Disease Virus[J]. Lloyd Reeve-Johnson. Agricultural Sciences in China. 2007(11)
[5]酵母活性物质对断乳仔猪红细胞免疫功能的影响[J]. 王玲,蒲万霞,扎西英派,索朗斯珠,孟晓琴,李芸,程胜利,孟聚诚,华兰英. 动物医学进展. 2007(08)
[6]红细胞免疫的物质基础及影响因素[J]. 赵孟春,李宏全,段瑞旭,白瑞. 浙江畜牧兽医. 2007(03)
[7]补体受体1型的结构功能及sCR1基因克隆表达的策略[J]. 罗雪,汪正清. 创伤外科杂志. 2005(06)
[8]高渗盐水处理对失血性休克兔红细胞免疫黏附功能及抗细菌感染的影响[J]. 李汉臣,秦兆寅,纪宗正,黎一鸣,刘先珍,王喜青,金绍岐. 细胞与分子免疫学杂志. 2004(06)
[9]附红细胞体自然感染对猪红细胞的影响[J]. 马海利,韩惠瑛,王胜,郑明学,李宏全,宁官保. 中国预防兽医学报. 2003(04)
[10]11类哺乳类和鸟类动物红细胞免疫功能的对比研究[J]. 王旭东,饶家荣,李正甫,朱文斌,杨红华,周述成,李天祥,张世洪. 畜牧兽医学报. 1995(06)
博士论文
[1]红细胞免疫分子、T细胞亚群水平及相关基因单核苷酸多态性与系统性红斑狼疮、肝细胞癌的关联研究[D]. 胡金川.中国人民解放军军医进修学院 2009
硕士论文
[1]不同发育阶段WHBE兔红细胞免疫特性研究[D]. 潘永明.浙江大学 2009
本文编号：3392207
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