黔北麻羊RARRES1基因的克隆表达及功能初步研究
发布时间：2021-09-09 15:33
旨在对黔北麻羊视黄酸受体应答蛋白1（retinoic acid receptor responder 1,RARRES1）基因的功能进行初步探究。本研究首先利用PCR扩增克隆得到黔北麻羊RARRES1基因编码的完整序列,应用生物信息学方法分析黔北麻羊RARRES1蛋白理化性质、高级结构、疏水性、氨基酸同源性及亚细胞定位,并构建系统进化树,同时应用qRT-PCR法检测RARRES1基因在单、多羔黔北麻羊不同组织中的表达水平,随后构建目的基因pEGFP-N3-RARRES1真核表达载体与pGPH1/GFP/Neo-RARRES1 RNA干扰载体,并转染至黔北麻羊卵泡颗粒细胞,利用qRT-PCR法从细胞水平检测并分析目的基因真核表达载体与RNA干扰载体对目的基因RARRES1及多胎性状候选基因BMPR-IB mRNA表达的影响。qRT-PCR结果显示,RARRES1 mRNA在卵巢中的表达量最高,单羔组黔北麻羊卵巢组织中的表达量极显著高于多羔组（P<0.01）。生物信息学分析表明,黔北麻羊RARRES1基因共编码289个氨基酸,RARRES1是一种定位在细胞质中的亲水性蛋白,蛋白质二级...
【文章来源】：畜牧兽医学报. 2020,51(07)北大核心CSCD
【文章页数】：15 页
【部分图文】：
RARRES1基因mRNA在单、多羔黔北麻羊不同组织中的表达水平
菌液PCR条带位置与PCR扩增CDS区目的条带位置相同且条带明亮(图3)。将菌液PCR中筛选出来的阳性菌液送至上海生工生物工程有限公司测序后发现,扩增出的黔北麻羊RARRES1基因CDS区与原序列比对后正确率高达99.8%(图4),菌液PCR及测序结果证实,黔北麻羊RARRES1基因亚克隆载体构建成功,可用于下一步研究。2.4 黔北麻羊RARRES1基因生物信息学分析
阳性菌液测序后得到大小为949 bp的序列,包含黔北麻羊RARRES1基因CDS区全长以及部分5′UTR与3′UTR序列,本研究获得黔北麻羊RARRES1基因的CDS区序列,与山羊 (Capra hircus)原序列相比,比对成功率达到99.8%,黔北麻羊RARRES1基因CDS区共发生两处突变,第一处为第662位A→G突变,第二处为第679位T→G突变,但两处突变均为同义突变,没有引起氨基酸的改变。随后,利用DNA Star软件对黔北麻羊RARRES1氨基酸编码序列与绵羊、牛、猪、大鼠、小鼠、鸡、腔棘鱼、人等8个物种进行同源性比较,结果显示,其编码序列与绵羊、牛、猪、大鼠、小鼠、鸡、腔棘鱼、人的同源性分别为99.7%、95.5%、76.0%、62.6%、62.9%、34.2%、35.6%、60.4%。利用MEGA 6.0软件构建不同物种RARRES1基因的系统进化树(图5)发现,RARRES1基因在反刍动物中具有较高的保守性,黔北麻羊与绵羊、牛的遗传距离相对较近,与鸡、腔棘鱼的遗传距离相对较远,证实RARRES1基因具有良好的种属特异性。图5 黔北麻羊RARRES1基因系统进化树
【参考文献】：
期刊论文
[1]携带TFPI-2基因的真核表达载体对SHI-1细胞生长的抑制作用[J]. 李君君,廖佩,文锋,罗泽宇,曹翊雄. 中国实验血液学杂志. 2019(06)
[2]维生素A对动物毛囊发育影响的研究进展[J]. 南韦肖,司华哲,娄玉杰,李光玉. 动物营养学报. 2019(09)
[3]视黄醇在卵巢发育中的作用研究进展[J]. 杨言昭,张艳敏,刘颖,李文通,杨亚岚,葛长利,陈其美,周荣,李奎. 中国畜牧杂志. 2019(05)
[4]猪LYRM1基因对脂肪沉积的影响研究[J]. 苑洪霞,骆金红,冯文武,陈祥. 畜牧兽医学报. 2019(04)
[5]内质网应激标记基因Grp78参与鹅肥肝免疫/炎症状态的调控[J]. 刘同君,赵盼,赵敏孟,刘龙,崔恒宓,龚道清,耿拓宇. 畜牧兽医学报. 2019(04)
[6]从江香猪PHKG2基因超表达载体和RNA干扰载体的构建及其表达[J]. 王圆圆,许厚强,陈伟,周迪,张鸣,杨涛. 畜牧兽医学报. 2018(09)
[7]香猪卵巢RARRES1基因第1外显子CG位点的甲基化及其与基因差异表达的关联[J]. 阮亦麒,李大鹏,冉雪琴,毛宁,易凡利,张福平,王嘉福. 中国畜牧兽医. 2018(06)
[8]三个绵羊品种BMPR-IB基因CDS区1113位点的多态性与产羔数的相关性分析[J]. 杜丽,张利平,张筱艳,朱韶华,马晓明. 农业生物技术学报. 2017(12)
[9]BMPR-IB基因多态性与湖羊产羔性能的关系[J]. 杨媛,翁恺麒,李拥军,顾祝荣,郭海燕. 安徽农业科学. 2017(26)
[10]绵羊BMPR-IB基因第7外显子多态性与产羔性状的相关性研究[J]. 贾建磊,张利平,丁强,杨志文. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2016(01)
博士论文
[1]牦牛卵巢Label-free蛋白组学分析及相关蛋白在生殖系统的表达[D]. 陈虹.甘肃农业大学 2018
硕士论文
[1]黔北麻羊BMP4和BMPR-IB基因克隆表达及其多态性与繁殖性状的关联分析[D]. 孙振梅.贵州大学 2017
[2]西藏绒山羊多胎性状候选基因BMP15、GDF9、BMPR1B多态性分析[D]. 刘亚成.四川农业大学 2017
[3]湖羊多胎性状候选基因BMPR-IB多态性研究及检测技术优化[D]. 祝振硕.西北农林科技大学 2016
本文编号：3392344
【文章来源】：畜牧兽医学报. 2020,51(07)北大核心CSCD
【文章页数】：15 页
【部分图文】：
RARRES1基因mRNA在单、多羔黔北麻羊不同组织中的表达水平
菌液PCR条带位置与PCR扩增CDS区目的条带位置相同且条带明亮(图3)。将菌液PCR中筛选出来的阳性菌液送至上海生工生物工程有限公司测序后发现,扩增出的黔北麻羊RARRES1基因CDS区与原序列比对后正确率高达99.8%(图4),菌液PCR及测序结果证实,黔北麻羊RARRES1基因亚克隆载体构建成功,可用于下一步研究。2.4 黔北麻羊RARRES1基因生物信息学分析
阳性菌液测序后得到大小为949 bp的序列,包含黔北麻羊RARRES1基因CDS区全长以及部分5′UTR与3′UTR序列,本研究获得黔北麻羊RARRES1基因的CDS区序列,与山羊 (Capra hircus)原序列相比,比对成功率达到99.8%,黔北麻羊RARRES1基因CDS区共发生两处突变,第一处为第662位A→G突变,第二处为第679位T→G突变,但两处突变均为同义突变,没有引起氨基酸的改变。随后,利用DNA Star软件对黔北麻羊RARRES1氨基酸编码序列与绵羊、牛、猪、大鼠、小鼠、鸡、腔棘鱼、人等8个物种进行同源性比较,结果显示,其编码序列与绵羊、牛、猪、大鼠、小鼠、鸡、腔棘鱼、人的同源性分别为99.7%、95.5%、76.0%、62.6%、62.9%、34.2%、35.6%、60.4%。利用MEGA 6.0软件构建不同物种RARRES1基因的系统进化树(图5)发现,RARRES1基因在反刍动物中具有较高的保守性,黔北麻羊与绵羊、牛的遗传距离相对较近,与鸡、腔棘鱼的遗传距离相对较远,证实RARRES1基因具有良好的种属特异性。图5 黔北麻羊RARRES1基因系统进化树
【参考文献】：
期刊论文
[1]携带TFPI-2基因的真核表达载体对SHI-1细胞生长的抑制作用[J]. 李君君,廖佩,文锋,罗泽宇,曹翊雄. 中国实验血液学杂志. 2019(06)
[2]维生素A对动物毛囊发育影响的研究进展[J]. 南韦肖,司华哲,娄玉杰,李光玉. 动物营养学报. 2019(09)
[3]视黄醇在卵巢发育中的作用研究进展[J]. 杨言昭,张艳敏,刘颖,李文通,杨亚岚,葛长利,陈其美,周荣,李奎. 中国畜牧杂志. 2019(05)
[4]猪LYRM1基因对脂肪沉积的影响研究[J]. 苑洪霞,骆金红,冯文武,陈祥. 畜牧兽医学报. 2019(04)
[5]内质网应激标记基因Grp78参与鹅肥肝免疫/炎症状态的调控[J]. 刘同君,赵盼,赵敏孟,刘龙,崔恒宓,龚道清,耿拓宇. 畜牧兽医学报. 2019(04)
[6]从江香猪PHKG2基因超表达载体和RNA干扰载体的构建及其表达[J]. 王圆圆,许厚强,陈伟,周迪,张鸣,杨涛. 畜牧兽医学报. 2018(09)
[7]香猪卵巢RARRES1基因第1外显子CG位点的甲基化及其与基因差异表达的关联[J]. 阮亦麒,李大鹏,冉雪琴,毛宁,易凡利,张福平,王嘉福. 中国畜牧兽医. 2018(06)
[8]三个绵羊品种BMPR-IB基因CDS区1113位点的多态性与产羔数的相关性分析[J]. 杜丽,张利平,张筱艳,朱韶华,马晓明. 农业生物技术学报. 2017(12)
[9]BMPR-IB基因多态性与湖羊产羔性能的关系[J]. 杨媛,翁恺麒,李拥军,顾祝荣,郭海燕. 安徽农业科学. 2017(26)
[10]绵羊BMPR-IB基因第7外显子多态性与产羔性状的相关性研究[J]. 贾建磊,张利平,丁强,杨志文. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2016(01)
博士论文
[1]牦牛卵巢Label-free蛋白组学分析及相关蛋白在生殖系统的表达[D]. 陈虹.甘肃农业大学 2018
硕士论文
[1]黔北麻羊BMP4和BMPR-IB基因克隆表达及其多态性与繁殖性状的关联分析[D]. 孙振梅.贵州大学 2017
[2]西藏绒山羊多胎性状候选基因BMP15、GDF9、BMPR1B多态性分析[D]. 刘亚成.四川农业大学 2017
[3]湖羊多胎性状候选基因BMPR-IB多态性研究及检测技术优化[D]. 祝振硕.西北农林科技大学 2016
本文编号：3392344
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