犬瘟热假病毒系统的建立及其在中和抗体检测方法中的应用
发布时间：2021-09-09 17:32
犬是药物安全性评价常用的实验动物之一,控制与评价实验犬的质量,对保证临床前药物安全性评价十分重要。犬瘟热（Canine distemper,CD）作为危害实验犬的一种疾病,其致病源犬瘟热病毒（Canine distemper virus,CDV）一直是实验犬必须控制的一项指标。目前主要采用注射疫苗等免疫学方法控制。由于疫苗质量、免疫程序、动物个体差异、以及检测时机的问题,往往会出现免疫后抗体效价降低、全体免疫不合格等问题。而且,目前国家标准规定的血清学方法,检测出的是血清抗体,并不是针对抵抗病毒感染的中和抗体。因而,对实验犬质量的评价存在一定问题。CDV中和抗体的检测方法主要有CDV中和实验,间接免疫酶染色法、ELISA检测方法等。目前CDV中和抗体的检测方法存在着一些弊端,例如结果的判定一般是通过观察,而未能量化;操作过程繁杂,周期较长;结果不易判断,容易误判;CDV对理化因素敏感,难以通过常规病毒纯化的方法获得包被抗原。为此,本研究建立了犬瘟热的假病毒系统,病毒颗粒高度模拟原病毒,生物安全高,为CD的病毒学研究及其疫苗效力评价等提供了新的方法。本研究首先构建具有不同长度胞质区的H、...
【文章来源】：中国食品药品检定研究院北京市
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
不同胞质区长度的H、F基因扩增结果
图 3 SDS-PAGE 鉴定含 CDV 不同胞质区长度的 F、H 重组蛋同胞质区长度的糖蛋白 H 电泳结果，其中野生型 H 蛋白大小为长度的糖蛋白 F 电泳后裂解为 F1 类片段的电泳结果，其中野生 F1 大小为 40 kDa；3：表示不同胞质区长度的糖蛋白 F 电泳后野生型糖蛋白 F 基因的裂解片段 F2 大小为 23 kDa）病毒包装体系的优化质粒的选择、膜蛋白基因的修饰和骨架质粒、囊膜质粒共时间四个方面优化包装系统，最终达到假病毒的最高滴与 F 30 的组合有效的抑制了细胞融合，提高假示，表达麻疹病毒糖蛋白 H 和 F 的细胞会发生融合现象染初始 T 细胞的慢病毒转染体系通过改变糖蛋白 H 和 细胞融合的现象[48]。而在本研究中，以 H 和 F 为囊膜蛋
24/F 20 、 H 24/F 24 、 H 24/F 26 、 H 24/F 30 ； 26/F 20 、 H 26/F 24 、 H 26/F 26 、 H 26/F 30 、 30/F 20、H 30/F 24、H 30/F 26、H 30/F 30）包被。研究发现，以 H 和 F 30 组合为囊膜糖蛋白包被出的犬以确定了以 H 和 F 30 为最佳组合，结果见图 4。
【参考文献】：
期刊论文
[1]水貂抗犬瘟热病毒中和抗体滴度的测定[J]. 刁非非,赵永峰,姜常青,韩铠怿,谢之景. 山东畜牧兽医. 2016(08)
[2]犬瘟热病毒核衣壳蛋白分子生物学研究进展[J]. 罗彬,易立,王建科,程世鹏. 特产研究. 2010(02)
[3]犬瘟热免疫预防研究进展[J]. 孔庆波. 动物医学进展. 2007(06)
[4]狐貉犬瘟热、细小病毒性肠炎和脑(肝)炎流行病学调查[J]. 丛丽,闫新华,闫喜军,吴威. 特产研究. 2000(02)
[5]犬实验感染CDV的病理学研究[J]. 遇秀玲,田克恭,吴娜,隋丽华,李俊梅,刘永梅,渠川玫. 中国畜禽传染病. 1998(02)
[6]犬瘟热病毒抗体检测方法的比较研究[J]. 乔贵林,夏咸柱,王度林,贾补年,袁书智,林庆年,王允海. 中国兽医学报. 1997(01)
[7]犬瘟热病毒野毒株融合蛋白主要功能区基因的变异研究[J]. 李金中,夏咸柱,殷震,李佑民,涂长春,金宁一. 中国兽医学报. 1996(06)
硕士论文
[1]犬瘟热病毒核蛋白基因的原核表达及检测CDV抗体间接ELISA方法的建立[D]. 王琛.吉林大学 2007
本文编号：3392499
【文章来源】：中国食品药品检定研究院北京市
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
不同胞质区长度的H、F基因扩增结果
图 3 SDS-PAGE 鉴定含 CDV 不同胞质区长度的 F、H 重组蛋同胞质区长度的糖蛋白 H 电泳结果，其中野生型 H 蛋白大小为长度的糖蛋白 F 电泳后裂解为 F1 类片段的电泳结果，其中野生 F1 大小为 40 kDa；3：表示不同胞质区长度的糖蛋白 F 电泳后野生型糖蛋白 F 基因的裂解片段 F2 大小为 23 kDa）病毒包装体系的优化质粒的选择、膜蛋白基因的修饰和骨架质粒、囊膜质粒共时间四个方面优化包装系统，最终达到假病毒的最高滴与 F 30 的组合有效的抑制了细胞融合，提高假示，表达麻疹病毒糖蛋白 H 和 F 的细胞会发生融合现象染初始 T 细胞的慢病毒转染体系通过改变糖蛋白 H 和 细胞融合的现象[48]。而在本研究中，以 H 和 F 为囊膜蛋
24/F 20 、 H 24/F 24 、 H 24/F 26 、 H 24/F 30 ； 26/F 20 、 H 26/F 24 、 H 26/F 26 、 H 26/F 30 、 30/F 20、H 30/F 24、H 30/F 26、H 30/F 30）包被。研究发现，以 H 和 F 30 组合为囊膜糖蛋白包被出的犬以确定了以 H 和 F 30 为最佳组合，结果见图 4。
【参考文献】：
期刊论文
[1]水貂抗犬瘟热病毒中和抗体滴度的测定[J]. 刁非非,赵永峰,姜常青,韩铠怿,谢之景. 山东畜牧兽医. 2016(08)
[2]犬瘟热病毒核衣壳蛋白分子生物学研究进展[J]. 罗彬,易立,王建科,程世鹏. 特产研究. 2010(02)
[3]犬瘟热免疫预防研究进展[J]. 孔庆波. 动物医学进展. 2007(06)
[4]狐貉犬瘟热、细小病毒性肠炎和脑(肝)炎流行病学调查[J]. 丛丽,闫新华,闫喜军,吴威. 特产研究. 2000(02)
[5]犬实验感染CDV的病理学研究[J]. 遇秀玲,田克恭,吴娜,隋丽华,李俊梅,刘永梅,渠川玫. 中国畜禽传染病. 1998(02)
[6]犬瘟热病毒抗体检测方法的比较研究[J]. 乔贵林,夏咸柱,王度林,贾补年,袁书智,林庆年,王允海. 中国兽医学报. 1997(01)
[7]犬瘟热病毒野毒株融合蛋白主要功能区基因的变异研究[J]. 李金中,夏咸柱,殷震,李佑民,涂长春,金宁一. 中国兽医学报. 1996(06)
硕士论文
[1]犬瘟热病毒核蛋白基因的原核表达及检测CDV抗体间接ELISA方法的建立[D]. 王琛.吉林大学 2007
本文编号：3392499
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