中国麻鸭血管紧张素转化酶2（ACE2）的基因克隆及基因结构的序列解析

发布时间：2021-09-12 09:55

　　血管紧张素转化酶2（ACE2）被发现以来,其病理生理功能,特别是作为SARS、COVID-19等冠状病毒侵入细胞的功能性受体,显示了巨大的潜能,明确其在不同物种的基因序列及结构可为冠状病毒感染机制研究提供依据。本研究以中国麻鸭为研究对象,利用RT-PCR和Western blot检测ACE2在中国麻鸭各组织中的表达,然后用PCR技术,扩增出中国麻鸭ACE2基因的完整ORF序列,再TA克隆至pMD-19T载体中进行测序,对所得序列进行生物信息学解析。结果证实,ACE2在中国麻鸭心、肝、肺、肾等组织中均有表达。基因克隆结果显示,该中国麻鸭ACE2基因的CDS序列全长为2 435 bp,编码805个氨基酸残基,与人ACE2核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别为66.2%和66.4%,且处在不同进化树分支上。通过对与SARS病毒S蛋白结合有关的18个关键氨基酸残基分析发现,中国麻鸭除第330和353位氨基酸外,其余均与人不相同。结构分析发现,中国麻鸭ACE2为Ⅰ型跨膜蛋白,有多处N-糖基化位点。研究首次获得中国麻鸭ACE2基因的完整ORF序列及相关基础资料,所得序列已上传GenBank并被成功收录... 

【文章来源】：畜牧兽医学报. 2020,51(07)北大核心CSCD

【文章页数】：10 页

【部分图文】：

中国麻鸭ACE2基因CDS区和编码氨基酸序列

采用RT-PCR检测ACE2基因在中国麻鸭体内各组织的分布,检测结果如图1A。由图1A可知,在中国麻鸭心、肝、肺、肾组织中均有ACE2基因的单一条带(泳道1、2、3、4),条带大小为395 bp左右,与预期(395 bp)一致。取检测到ACE2基因分布的心、肝、肺、肾组织进行Western blot,由试验结果(图1B)可知,在这些组织中有ACE2蛋白表达,说明ACE2在中国麻鸭体内存在并有蛋白表达。2.2 中国麻鸭ACE2目的基因PCR扩增

酶切验证结果如图3B所示。HindⅢ单酶切后发现有1条5 127 bp左右的条带(泳道2和5),大小与pMD-19T载体(2 692 bp)和目的基因(2 435 bp) 总和一致。因此本研究成功克隆了中国麻鸭ACE2基因的CDS序列。2.4 中国鸭ACE2基因阳性质粒测序

【参考文献】：
期刊论文
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[2]血管紧张素转换酶2在仔猪空肠中的分布表达及其与物质转运的关系[J]. 李志强,闫书平,纪晓霞,王凯,张源淑.  畜牧兽医学报. 2019(08)
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[4]血管紧张素转化酶2（ACE2）对大鼠肾氧化应激损伤的保护作用及其机制[J]. 王艳霞,张伟,韩东宁,张源淑.  农业生物技术学报. 2011(05)



本文编号：3394017