干扰lnc0803基因对牛骨骼肌卫星细胞增殖与分化的影响
发布时间：2021-09-19 10:54
为了探究lncRNA对牛骨骼肌卫星细胞（MSCs）增殖及成肌分化的影响,试验选择前期通过高通量测序技术获得的一个牛MSCs分化前后表达差异的lnc0803基因,采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术验证测序获得的牛MSCs分化前后表达差异倍数;Ensembl数据库比对分析lnc0803基因的生物信息学特征;以及通过细胞核质分离试验后的实时荧光定量PCR对lnc0803基因进行亚细胞定位;并设计合成lnc0803基因的干扰RNA（siRNA）,筛选有效的siRNA转染牛MSCs,采用EdU染色方法检测干扰lnc0803基因对牛MSCs增殖的影响;进一步对牛MSCs进行体外成肌诱导分化,采用实时荧光定量PCR和Western-blot分别检测分化标志因子肌细胞生成素（MyoG）和肌球蛋白重链（MyHC）的基因及蛋白表达水平,从而综合分析干扰lnc0803基因对牛MSCs成肌分化的影响。结果表明:诱导分化后的牛MSCs中lnc0803基因的表达量比增殖期高2.26倍;lnc0803基因由牛基因组的28号染色体转录而来,是一条不具有蛋白编码能力的长链非编码RNA,在牛MSCs的细胞质和细...
【文章来源】：黑龙江畜牧兽医. 2020,(07)北大核心
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
牛MSCs分化前后lnc0803基因表达量的检测结果
为了探究lnc0803基因表达变化对牛MSCs发育是否具有调控作用,针对lnc0803基因序列设计合成3条siRNA,即si-1、si-2、si-3,同时以设计合成的无效干扰序列为对照,将其转染至牛MSCs中,并对MSCs进行成肌诱导分化,采用实时荧光定量PCR法检测lnc0803基因在增殖期和成肌诱导分化72小时时的表达量,结果发现在增殖期si-2对lnc0803基因的干扰更加彻底,在分化期仍然能有效干扰lnc0803基因,因此选择si-2对lnc0803基因进行干扰,结果见图4。表2 CPC网站预测结果Table 2 Prediction results of CPC website 基因名称 编码能力 蛋白编码能力评分 MEG9 非编码Noncoding (weak) -0.808 597 lnc0803 非编码Noncoding (weak) -1.191 400 HPRT1 编码Coding 2.305 820
表2 CPC网站预测结果Table 2 Prediction results of CPC website 基因名称 编码能力 蛋白编码能力评分 MEG9 非编码Noncoding (weak) -0.808 597 lnc0803 非编码Noncoding (weak) -1.191 400 HPRT1 编码Coding 2.305 820图4 牛MSCs lnc0803基因干扰模型的构建结果
【参考文献】：
期刊论文
[1]干扰lnc4351对牛骨骼肌卫星细胞增殖与成肌分化的影响[J]. 张俊星,朱菲菲,李燕,陈明明,刘新峰,郭宏,丁向彬. 中国畜牧兽医. 2019(03)
[2]成肌分化抗原相关长链非编码RNA对肌生成过程作用的研究进展[J]. 张晓娟,李佳轩,刘新峰,张林林,丁向彬,郭宏,李新. 黑龙江畜牧兽医. 2018(21)
[3]LncRNA调控骨骼肌发育的分子机制及其在家养动物中的研究进展[J]. 周瑞,王以鑫,龙科任,蒋岸岸,金龙. 遗传. 2018(04)
[4]lncRNA-HZ5对牛骨骼肌卫星细胞成肌分化的调控作用研究[J]. 丁向彬,张蔚然,张俊星,王轶敏,刘新峰,郭宏. 天津农学院学报. 2017(03)
[5]兔骨骼肌卫星细胞成肌诱导分化及鉴定[J]. 代阳,王轶敏,刘新峰,周朋洋,郭宏,丁向彬. 黑龙江畜牧兽医. 2014(21)
[6]牛骨骼肌卫星细胞的分离鉴定和诱导分化[J]. 王轶敏,代阳,刘新峰,刘中伟,李吉霞,郭宏,丁向彬. 中国畜牧兽医. 2014(07)
本文编号：3401483
【文章来源】：黑龙江畜牧兽医. 2020,(07)北大核心
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
牛MSCs分化前后lnc0803基因表达量的检测结果
为了探究lnc0803基因表达变化对牛MSCs发育是否具有调控作用,针对lnc0803基因序列设计合成3条siRNA,即si-1、si-2、si-3,同时以设计合成的无效干扰序列为对照,将其转染至牛MSCs中,并对MSCs进行成肌诱导分化,采用实时荧光定量PCR法检测lnc0803基因在增殖期和成肌诱导分化72小时时的表达量,结果发现在增殖期si-2对lnc0803基因的干扰更加彻底,在分化期仍然能有效干扰lnc0803基因,因此选择si-2对lnc0803基因进行干扰,结果见图4。表2 CPC网站预测结果Table 2 Prediction results of CPC website 基因名称 编码能力 蛋白编码能力评分 MEG9 非编码Noncoding (weak) -0.808 597 lnc0803 非编码Noncoding (weak) -1.191 400 HPRT1 编码Coding 2.305 820
表2 CPC网站预测结果Table 2 Prediction results of CPC website 基因名称 编码能力 蛋白编码能力评分 MEG9 非编码Noncoding (weak) -0.808 597 lnc0803 非编码Noncoding (weak) -1.191 400 HPRT1 编码Coding 2.305 820图4 牛MSCs lnc0803基因干扰模型的构建结果
【参考文献】：
期刊论文
[1]干扰lnc4351对牛骨骼肌卫星细胞增殖与成肌分化的影响[J]. 张俊星,朱菲菲,李燕,陈明明,刘新峰,郭宏,丁向彬. 中国畜牧兽医. 2019(03)
[2]成肌分化抗原相关长链非编码RNA对肌生成过程作用的研究进展[J]. 张晓娟,李佳轩,刘新峰,张林林,丁向彬,郭宏,李新. 黑龙江畜牧兽医. 2018(21)
[3]LncRNA调控骨骼肌发育的分子机制及其在家养动物中的研究进展[J]. 周瑞,王以鑫,龙科任,蒋岸岸,金龙. 遗传. 2018(04)
[4]lncRNA-HZ5对牛骨骼肌卫星细胞成肌分化的调控作用研究[J]. 丁向彬,张蔚然,张俊星,王轶敏,刘新峰,郭宏. 天津农学院学报. 2017(03)
[5]兔骨骼肌卫星细胞成肌诱导分化及鉴定[J]. 代阳,王轶敏,刘新峰,周朋洋,郭宏,丁向彬. 黑龙江畜牧兽医. 2014(21)
[6]牛骨骼肌卫星细胞的分离鉴定和诱导分化[J]. 王轶敏,代阳,刘新峰,刘中伟,李吉霞,郭宏,丁向彬. 中国畜牧兽医. 2014(07)
本文编号：3401483
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