地衣芽孢杆菌联合中药提取物应用的初步研究

发布时间：2021-09-22 05:42

　　益生菌和中药提取物对机体均有良好的保健作用,能否保持各自的优点联合应用,对药品研发具有深远的指导意义。本研究通过对比试验选择适合的益生菌,采用检测表型特征的常规方法结合现代分子生物学PCR方法鉴定益生菌,用溶血性实验及小鼠致病性实验评价益生菌的安全性,根据多糖含量变化、细菌生长曲线与活菌数计数方法观察益生菌与中药提取物共培养的相互影响,采用抑菌试验研究益生菌与中药提取物共培养对致病菌的作用,试验结果如下:试验一、3种益生菌的对比筛选试验。将益生菌（30亿cfu/mL）按0.1mL/10g小鼠体重进行灌胃。结果,各试验组的小鼠脾脏指数、胸腺指数差异不显著（P>0.05）。混合菌组鼠在试验第7天增重率为0.72±0.04g/d增重显著高于对照组（P<0.05）,第14天丁酸梭菌组的增重率为1.57±0.05g/天增重显著高于对照组（P≤0.05）。在植物乳杆菌组和混合菌组三个阶段内均出现小鼠剖检异常。试验二、LYD芽孢杆菌的鉴定与抵抗力试验。采用传统方法及分子生物学方法鉴定LYD芽孢杆菌为地衣芽孢杆菌。11种防腐消毒药耐受力试验,结果2%氢氧化钠、3%双氧水对地衣芽孢杆菌有杀灭... 

【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图３－１?ＬＹＤ芽孢杆菌菌落?

３．２．４结果与分析??３．２．４．１形态学鉴定??ＬＹＤ芽孢杆菌菌株在营养琼脂培养基培养１２ｈ后，形态如图３－１，３－２所示，菌落??呈白色、扁平、表面粗糙褶皱、边缘不整齐的地衣状。挑取菌落进行革兰氏染色，如??图所示，菌体为蓝紫色、杆状、单个或成对、短链、革兰氏阳性杆菌。??．Ｗ?二．??图３－１?ＬＹＤ芽孢杆菌菌落?图３－２?ＬＹＤ芽孢杆菌革兰氏染色??Ｆｉｇ．?３－１?ＬＹＤ?ｂａｃｉｌｌｕｓ?ｓｕｂｔｉｌｉｓ．?Ｆｉｇ．?３－２?ＬＹＤ?Ｂａｃｉｌｌｕｓ?ｇｒａｍｍｅ?ｓｔａｉｎ．??３．２．４．２生理生化鉴定??ＬＹＤ芽孢杆菌的生理生化试验和对不同碳源的发酵利用情况试验结果如图３－３、??３￣４、３－５和表３－１所示，对照《伯杰氏细菌鉴定手册》进行判断，鉴定结果为地衣芽??孢杆菌属。??表３－１?ＬＹＤ芽孢杆菌的生化试验??Ｔａｂｌｅ?３－１?ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ?ｔｅｓｔ?ｏｆ?Ｂａｃｉｌｌｕｓ?ＬＹＤ???项目名称?＾???厌氧生长?＋??Ｖ－Ｐ测定?＋??淀粉水解试验?＋??明胶液化试验?＋??Ｄ－甘露醇?＋??枸橼酸?＋???一内酸盐?＋???注：＋表示阳性结果，－表示阴性结果??２０??

畚牡匾卵浚嘲?司??现忻缣崛∥镉τ玫某醪窖芯浚崳?＃．?ｒｉ?場??图３－３?ＬＹＤ芽孢杆菌菌落?图３－４?ＬＹＤ芽孢杆菌淀粉水解图３－５?ＬＹＤ芽孢杆菌生化鉴定??ＦＩＧ３－３?ＬＹＤ?ｂａｃｉｌｌｕｓ?ｓｕｂｔｉｌｉｓ．?试验?ＦＩＧ３－５?ＬＹＤ?Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ??ＦＩＧ?３－４?．ＬＹＤ?ｔｅｓｔ?ｏｆ?ｓｔａｒｃｈ?ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｂａｃｉｌｌｕｓ??ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ?ｏｆ?Ｂａｃｉｌｌｕｓ??３．２．４．２?１６Ｓ?ｒＤＮＡ基因序列同源性分析??以地衣芽孢杆菌的ＤＮＡ为模板，１６Ｓ?ｒＤＮＡ通用引物进行扩增后得到约ｌＯＯＯｂｐ??的特异性扩增产物如图所示，产物送康维生物科技有限公司测序。??将地衣芽孢杆菌的１６Ｓ?ｒＤＮＡ的ＰＣＲ克隆进行测序，获得长度为１０１５ｂｐ的１６Ｓ??ｒＤＮＡ序列，和ＰＣＲ电泳结果一致如图３－８。测序结果见附录１。??将测序结果在ＮＣＢＩ数据库与其他细菌进行１６ＳｒＤＮＡ序列进行对比，找出同源性??较高的３株菌株，ＭｅｇＡｌｉｇｎ构建矩形图和系统进化树，如图３－６、３－７。经同源性对比，??试验菌株于地衣芽孢杆菌同源性达９７．８％，属于芽孢杆菌属地衣芽孢杆菌种。???Ｐｅｒｃｅｎｔ?Ｉｄｅｎｔｉｔｙ???Ｍ?１?Ｉ?２?Ｉ?３?Ｉ?４????Ｉ〇＞?１?ｍ?９７．８?９７．８?９７．６?１?ＮＲ＿Ｂａｄｌｌｕｓ??｜?＇?ＨＵ?ｌｌｌｌ丨丨丨丨丨?Ｉ?２?ＮＲ＿１１８９９６．１??｜?３?２．２?０．０?ｌ?３?ＮＲ＿１１６０２３．１??〇?４?


本文编号：3403244