RAD18基因在小鼠早期胚胎DNA损伤修复中作用的初步研究
发布时间：2021-09-22 06:52
RAD18是一种与单链DNA结合的RING结构蛋白,具有泛素E3连接酶作用。RAD18基因在DNA损伤修复中具有多方面的功能[1],同时在蛋白降解[2]、基因转录调控中也起作用[3]。目前有关RAD18基因的DNA损伤修复功能研究主要集中在体细胞和肿瘤细胞上,对其在动物胚胎发育过程中是否也具有相同的作用尚不清楚。为此,本研究首先建立了以H202为DNA损伤诱导剂的小鼠胚胎DNA损伤模型,而后采用RNA干扰技术,将RAD18基因shRNA病毒颗粒注入到小鼠受精卵中,通过qRT-PCR及免疫荧光技术分析小鼠早期胚胎中RAD18基因及DNA双链断裂（DSB）指标（γH2AX和ρATM）的表达变化,初步探索RAD18基因在小鼠早期胚胎DNA损伤修复中的作用。研究结果可为阐明胚胎DNA氧化损伤修复机制及提高体外培养胚胎质量奠定基础。1.RAD18基因在小鼠早期胚胎中的表达及小鼠胚胎DNA损伤模型的建立为了研究RAD18基因在小鼠早期胚胎DNA损伤修复中的作用,本实验首先采用qRT-PCR及免疫荧光方法分析了RAD18基因在小鼠早期胚胎发育过程中的表达规律。而后以H202作为DNA损伤诱导剂,观察...
【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
-1DSB识别和信号转导通路的示意图
图3-2 RAD18蛋白在小鼠早期胚胎中的表达Figure 3-2 Expression of RAD 18 protein in mouse early embryos.2.2小鼠早期胚胎DNA损伤模型建立.1 H2O2对小鼠早期胚胎发育的影响以KOSM和KOSM (-)为对照组，以H2O2为DNA损伤诱导剂，观察不同对小鼠胚胎发育的影响。结果显示，与KOSM对照组相比，KOSM (-)组率下降，无显著差异（/>>0.05)，囊胚率显著下降（P<0.05)。与K相比，随着H2O2浓度的增加，小鼠胚胎的分裂率和囊胚率都呈下.降趋02浓度开始，小鼠胚胎的分裂率和囊胚率均显著低下降（尸<0.05) ； 2两组间胚胎的分裂率和囊胚率无显著差异，2.4 |iM H2O2处理的胚胎不期。以上结果说明1.5?2.4^1^1吐02对小鼠早期胚胎发育均有影响（表3-
其中2.4 ^iM组两个时期胚胎的YH2AX焦点数多于2.1 |aM组同时期的胚胎，说明2.1 |iM和2.4 HMH2O2可诱导小鼠胚胎产生明显的DSB现象（图3-5A、图3-5B)，后续试验主要观察2.1 ^lM和2.4 H2O2处理对胚胎发育及DNA氧化耐受能力的影响。.YH2AX pATM■■■■。。一 ■■ ■。。“tr。12 ■■ ■图3-5A阴性对照组胚胎YH2AX利pATM的表达Figure 3-5A The expression of yHZAX and pATM in embryos of negative controls28
【参考文献】：
期刊论文
[1]过氧化氢和谷胱甘肽对延边黄牛体细胞克隆胚胎氧化损伤的影响[J]. 杨月春,王士勇,李钟淑,方南洙. 江西农业大学学报. 2012(06)
[2]过氧化氢对原代心肌细胞及H9c2细胞的损伤作用[J]. 李月婷,刘影,王静娴,李靖,肖婷婷,王爱民,廖尚高,王永林. 贵阳医学院学报. 2012(03)
[3]Rad18缺失对雄小鼠生殖细胞的影响[J]. 孙婧华,刘立峰. 大连医科大学学报. 2012(03)
[4]鸡胚氧化应激模型研究进展[J]. 李小迪,覃杨,何蓉蓉,栗原博. 中国药理学通报. 2011(01)
[5]GSH和过氧化氢对小鼠早期胚胎体外发育的影响[J]. 柳海星. 延边大学农学学报. 2010(04)
[6]磷酸化组蛋白H2AX介导的DNA损伤精子受精卵内修复[J]. 刘婉敏,刘容菊,李志凌. 中华男科学杂志. 2010(04)
[7]γH2AX和ATM与内源性氧化剂所致DNA损伤关系的研究进展[J]. 赵晋,郭忠,马建秀. 基础医学与临床. 2010(04)
[8]活性氧在卵泡发育及胚胎发育中的作用[J]. 陈霞. 实用医学杂志. 2008(11)
[9]DNA双链断裂损伤修复系统研究进展[J]. 黄敏,缪泽鸿,丁健. 生理科学进展. 2007(04)
[10]γ-H2AX与DNA双链断裂关系的研究进展[J]. 宾萍,郑玉新. 卫生研究. 2007(04)
博士论文
[1]DNA复制压力和活性氧诱发γ-H2AX阳性微核及其机制研究[D]. 徐冰.山东大学 2012
[2]DNA氧化损伤修复反应体系及其对细胞寿命影响机制初探[D]. 于珊珊.山东大学 2009
[3]蛋白质组学解析正常肝细胞与肝癌细胞DNA损伤修复相关复合物的研究[D]. 杨小丽.复旦大学 2008
[4]IAP家族蛋白Livin在细胞凋亡中的作用机制研究[D]. 马丽.中国科学技术大学 2006
[5]RAD18在DNA双链损伤修复中的作用[D]. 毕晓辉.东北师范大学 2002
硕士论文
[1]转CD14基因shRNA小鼠模型的制备[D]. 王梦.广西大学 2013
[2]水牛SUV39H1基因shRNA片段的筛选及对外源转基因表达效率的影响[D]. 林浪.广西大学 2013
[3]组蛋白H3S10磷酸化在动物卵母细胞成熟及核移植胚胎发育过程中的作用研究[D]. 田明明.广西大学 2013
[4]水牛CD14基因shRNA片段的筛选及其对相关基因表达的影响研究[D]. 李美青.广西大学 2012
[5]氧化应激性DNA损伤精子受精后受精卵修复与没食子儿茶素没食子酸酯（）抗氧化保护作用的研究[D]. 陈曼.汕头大学 2011
[6]UV介导的细胞DNA损伤及损伤后修复的初步研究[D]. 刘淼.陕西师范大学 2006
[7]过氧化氢（H2O2）对小鼠1—细胞期胚胎体外发育的影响[D]. 韩荣勋.延边大学 2005
[8]小鼠早期转基因胚胎体外培养与鉴定的研究[D]. 赵永贞.西北农林科技大学 2004
本文编号：3403336
【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
-1DSB识别和信号转导通路的示意图
图3-2 RAD18蛋白在小鼠早期胚胎中的表达Figure 3-2 Expression of RAD 18 protein in mouse early embryos.2.2小鼠早期胚胎DNA损伤模型建立.1 H2O2对小鼠早期胚胎发育的影响以KOSM和KOSM (-)为对照组，以H2O2为DNA损伤诱导剂，观察不同对小鼠胚胎发育的影响。结果显示，与KOSM对照组相比，KOSM (-)组率下降，无显著差异（/>>0.05)，囊胚率显著下降（P<0.05)。与K相比，随着H2O2浓度的增加，小鼠胚胎的分裂率和囊胚率都呈下.降趋02浓度开始，小鼠胚胎的分裂率和囊胚率均显著低下降（尸<0.05) ； 2两组间胚胎的分裂率和囊胚率无显著差异，2.4 |iM H2O2处理的胚胎不期。以上结果说明1.5?2.4^1^1吐02对小鼠早期胚胎发育均有影响（表3-
其中2.4 ^iM组两个时期胚胎的YH2AX焦点数多于2.1 |aM组同时期的胚胎，说明2.1 |iM和2.4 HMH2O2可诱导小鼠胚胎产生明显的DSB现象（图3-5A、图3-5B)，后续试验主要观察2.1 ^lM和2.4 H2O2处理对胚胎发育及DNA氧化耐受能力的影响。.YH2AX pATM■■■■。。一 ■■ ■。。“tr。12 ■■ ■图3-5A阴性对照组胚胎YH2AX利pATM的表达Figure 3-5A The expression of yHZAX and pATM in embryos of negative controls28
【参考文献】：
期刊论文
[1]过氧化氢和谷胱甘肽对延边黄牛体细胞克隆胚胎氧化损伤的影响[J]. 杨月春,王士勇,李钟淑,方南洙. 江西农业大学学报. 2012(06)
[2]过氧化氢对原代心肌细胞及H9c2细胞的损伤作用[J]. 李月婷,刘影,王静娴,李靖,肖婷婷,王爱民,廖尚高,王永林. 贵阳医学院学报. 2012(03)
[3]Rad18缺失对雄小鼠生殖细胞的影响[J]. 孙婧华,刘立峰. 大连医科大学学报. 2012(03)
[4]鸡胚氧化应激模型研究进展[J]. 李小迪,覃杨,何蓉蓉,栗原博. 中国药理学通报. 2011(01)
[5]GSH和过氧化氢对小鼠早期胚胎体外发育的影响[J]. 柳海星. 延边大学农学学报. 2010(04)
[6]磷酸化组蛋白H2AX介导的DNA损伤精子受精卵内修复[J]. 刘婉敏,刘容菊,李志凌. 中华男科学杂志. 2010(04)
[7]γH2AX和ATM与内源性氧化剂所致DNA损伤关系的研究进展[J]. 赵晋,郭忠,马建秀. 基础医学与临床. 2010(04)
[8]活性氧在卵泡发育及胚胎发育中的作用[J]. 陈霞. 实用医学杂志. 2008(11)
[9]DNA双链断裂损伤修复系统研究进展[J]. 黄敏,缪泽鸿,丁健. 生理科学进展. 2007(04)
[10]γ-H2AX与DNA双链断裂关系的研究进展[J]. 宾萍,郑玉新. 卫生研究. 2007(04)
博士论文
[1]DNA复制压力和活性氧诱发γ-H2AX阳性微核及其机制研究[D]. 徐冰.山东大学 2012
[2]DNA氧化损伤修复反应体系及其对细胞寿命影响机制初探[D]. 于珊珊.山东大学 2009
[3]蛋白质组学解析正常肝细胞与肝癌细胞DNA损伤修复相关复合物的研究[D]. 杨小丽.复旦大学 2008
[4]IAP家族蛋白Livin在细胞凋亡中的作用机制研究[D]. 马丽.中国科学技术大学 2006
[5]RAD18在DNA双链损伤修复中的作用[D]. 毕晓辉.东北师范大学 2002
硕士论文
[1]转CD14基因shRNA小鼠模型的制备[D]. 王梦.广西大学 2013
[2]水牛SUV39H1基因shRNA片段的筛选及对外源转基因表达效率的影响[D]. 林浪.广西大学 2013
[3]组蛋白H3S10磷酸化在动物卵母细胞成熟及核移植胚胎发育过程中的作用研究[D]. 田明明.广西大学 2013
[4]水牛CD14基因shRNA片段的筛选及其对相关基因表达的影响研究[D]. 李美青.广西大学 2012
[5]氧化应激性DNA损伤精子受精后受精卵修复与没食子儿茶素没食子酸酯（）抗氧化保护作用的研究[D]. 陈曼.汕头大学 2011
[6]UV介导的细胞DNA损伤及损伤后修复的初步研究[D]. 刘淼.陕西师范大学 2006
[7]过氧化氢（H2O2）对小鼠1—细胞期胚胎体外发育的影响[D]. 韩荣勋.延边大学 2005
[8]小鼠早期转基因胚胎体外培养与鉴定的研究[D]. 赵永贞.西北农林科技大学 2004
本文编号：3403336
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