犬瘟热病毒适应人SLAM受体的研究及犬瘟热灭活疫苗免疫效果评价
发布时间：2021-09-22 07:48
犬瘟热（Canine distemper,CD）是由犬瘟热病毒（Canine distemper virus,CDV）引起的一种多种属动物共患传染病,因其引起感染动物发病率高和死亡率高被人们所重视。CD临床症状多样,可以引起发热、结膜炎、神经系统症状等,病程中后期可因细菌引起继发感染。传统宿主包括犬科、鼬科、浣熊科和猫科等。近年来,CD在世界范围内暴发,特别是CD的跨宿主传播引起了人们的重视。作为CDV受体识别蛋白的H蛋白是病毒变异最频繁的蛋白,H蛋白变异导致的抗原漂移可能是CD高发的原因。研究显示,CDV H基因的变异导致病毒适应了新宿主猕猴,有可能突破宿主屏障通过SLAM受体传播给人类,这可能对当今人类公共卫生安全构成威胁。本研究通过表达绿色荧光蛋白（eGFP）的重组CDV 5804Pe株在表达人SLAM受体的Vero细胞（Vero-hSLAM,VHS）上连续传代,最终获得能快速适应人SLAM受体的毒株。病毒H基因测序表明,CDV适应人SLAM受体H基因第540位氨基酸发生改变,即由天冬氨酸（D）突变为甘氨酸（G）。通过构建突变体的真核表达载体和细胞融合试验证实,仅需一个氨基酸的改...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 犬瘟热病毒研究进展
1.1 犬瘟热病毒基因组
1.1.1 核衣壳蛋白(Nucleocapsid protein N)
1.1.2 磷蛋白(Phospho protein P)
1.1.3 基质蛋白(Matrix protein M)
1.1.4 大蛋白(Large polymerase protein L)
1.1.5 融合蛋白(Fusion protein F)
1.1.6 附着蛋白或血凝素蛋白(Hemagglutinin protein H)
1.2 CDV的变异与跨宿主传播
1.3 犬瘟热的临床症状和病理变化
1.4 犬瘟热的流行病学
1.5 犬瘟热疫苗的研究现状
1.5.1 灭活疫苗
1.5.2 弱毒活疫苗
1.5.3 亚单位疫苗
1.5.4 DNA疫苗
1.6 研究的目的及意义
第二章 犬瘟热病毒适应人SLAM受体的研究
2.1 材料
2.1.1 病毒和细胞
2.1.2 载体与菌种
2.1.3 工具酶与主要试剂
2.1.4 主要仪器设备
2.2 方法
2.2.1 CDV5804Pe-VHS适应株的获得
2.2.2 CDV5804Pe-VHS适应株H基因RBS区分析
2.2.3 H基因真核表达载体的构建
2.2.4 H/F质粒共转染
2.2.5 CDV5804Pe-VHS适应株全基因组测序
2.3 结果及分析
2.3.1 CDV5804Pe株感染Vero-hSLAM细胞
2.3.2 CDV5804Pe株和5804Pe-VHS株对不同易感细胞的感染能力
2.3.3 5804 Pe-VHS H基因RBS区测序比对
2.3.4 H和 F基因PCR扩增
2.3.5 H和 F基因重组质粒鉴定
2.3.6 细胞融合
2.3.7 5804 Pe-VHS全基因组RT-PCR电泳结果
2.3.8 阳性重组克隆PCR鉴定结果
2.3.9 全基因组序列分析
2.4 讨论
2.5 小结
第三章 犬瘟热灭活疫苗制备与免疫效果评价
3.1 材料和方法
3.1.1 试验动物与病毒
3.1.2 试验材料
3.1.3 主要仪器设备
3.1.4 灭活疫苗的制备
3.1.5 比格犬免疫
3.1.6 动物攻毒与病料采集
3.1.7 中和抗体的测定
3.1.8 淋巴细胞计数
3.1.9 病料处理及病理学观察
3.1.10 病毒RNA的提取和c DNA的合成
3.1.11 荧光定量PCR测定病毒RNA载量
3.1.12 统计学分析
3.2 结果及分析
3.2.1 CDV攻毒后临床症状
3.2.2 CDV攻毒后病理变化
3.2.3 CDV外周血淋巴细胞数
3.2.4 CDV中和抗体的测定
3.2.5 眼鼻拭子和直肠拭子中CDV RNA含量
3.2.6 组织脏器中CDV RNA含量
3.3 讨论
3.4 小结
结论
参考文献
致谢
个人简历
【参考文献】：
期刊论文
[1]犬瘟热流行病学研究进展[J]. 许阳阳. 农村实用技术. 2018(07)
[2]犬瘟热灭活疫苗与弱毒疫苗免疫效果的研究[J]. 苏俊,王晓庆,王吉贵,李智丽,刘维全. 中国兽医科学. 2018(08)
[3]犬瘟热的流行病学调查及治疗措施[J]. 赵永娟,赵凯,郭瑞强. 山西农业科学. 2017(04)
[4]狐源犬瘟热病毒的分离鉴定及H基因遗传变异分析[J]. 孙彦刚,赵建军,史宁,王洋,马凡舒,鲁荣光,胡博,张蕾,张海玲,白雪,刘昊,吕爽,薛向红,闫如勋,徐淑娟,范思宁,凌明玉,李欣彤,赵辉,闫喜军. 中国预防兽医学报. 2016(03)
[5]大熊猫犬瘟热研究进展[J]. 胡彦博,秦晓东,梁晚枫. 吉林畜牧兽医. 2016(02)
[6]稳定表达貉犬瘟热病毒细胞受体SLAM的Vero细胞系的建立及应用[J]. 赵建军,闫如勋,张海玲,张蕾,胡博,白雪,邵西群,柴秀丽,闫喜军,吴威. 微生物学报. 2012(12)
[7]犬瘟热病原学与蛋白的研究进展[J]. 杨继杰,马福健,孟潇. 养殖技术顾问. 2012(06)
[8]犬瘟热病毒研究分析[J]. 陈云政. 中国畜禽种业. 2009(07)
[9]犬瘟热病毒基因变异及其细胞受体研究进展[J]. 赵建军,闫喜军,吴威. 微生物学报. 2008(07)
[10]犬瘟热免疫预防研究进展[J]. 孔庆波. 动物医学进展. 2007(06)
博士论文
[1]犬瘟热病毒敏感细胞系和感染性克隆的构建与初步应用研究[D]. 刘玉秀.吉林大学 2014
本文编号：3403403
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 犬瘟热病毒研究进展
1.1 犬瘟热病毒基因组
1.1.1 核衣壳蛋白(Nucleocapsid protein N)
1.1.2 磷蛋白(Phospho protein P)
1.1.3 基质蛋白(Matrix protein M)
1.1.4 大蛋白(Large polymerase protein L)
1.1.5 融合蛋白(Fusion protein F)
1.1.6 附着蛋白或血凝素蛋白(Hemagglutinin protein H)
1.2 CDV的变异与跨宿主传播
1.3 犬瘟热的临床症状和病理变化
1.4 犬瘟热的流行病学
1.5 犬瘟热疫苗的研究现状
1.5.1 灭活疫苗
1.5.2 弱毒活疫苗
1.5.3 亚单位疫苗
1.5.4 DNA疫苗
1.6 研究的目的及意义
第二章 犬瘟热病毒适应人SLAM受体的研究
2.1 材料
2.1.1 病毒和细胞
2.1.2 载体与菌种
2.1.3 工具酶与主要试剂
2.1.4 主要仪器设备
2.2 方法
2.2.1 CDV5804Pe-VHS适应株的获得
2.2.2 CDV5804Pe-VHS适应株H基因RBS区分析
2.2.3 H基因真核表达载体的构建
2.2.4 H/F质粒共转染
2.2.5 CDV5804Pe-VHS适应株全基因组测序
2.3 结果及分析
2.3.1 CDV5804Pe株感染Vero-hSLAM细胞
2.3.2 CDV5804Pe株和5804Pe-VHS株对不同易感细胞的感染能力
2.3.3 5804 Pe-VHS H基因RBS区测序比对
2.3.4 H和 F基因PCR扩增
2.3.5 H和 F基因重组质粒鉴定
2.3.6 细胞融合
2.3.7 5804 Pe-VHS全基因组RT-PCR电泳结果
2.3.8 阳性重组克隆PCR鉴定结果
2.3.9 全基因组序列分析
2.4 讨论
2.5 小结
第三章 犬瘟热灭活疫苗制备与免疫效果评价
3.1 材料和方法
3.1.1 试验动物与病毒
3.1.2 试验材料
3.1.3 主要仪器设备
3.1.4 灭活疫苗的制备
3.1.5 比格犬免疫
3.1.6 动物攻毒与病料采集
3.1.7 中和抗体的测定
3.1.8 淋巴细胞计数
3.1.9 病料处理及病理学观察
3.1.10 病毒RNA的提取和c DNA的合成
3.1.11 荧光定量PCR测定病毒RNA载量
3.1.12 统计学分析
3.2 结果及分析
3.2.1 CDV攻毒后临床症状
3.2.2 CDV攻毒后病理变化
3.2.3 CDV外周血淋巴细胞数
3.2.4 CDV中和抗体的测定
3.2.5 眼鼻拭子和直肠拭子中CDV RNA含量
3.2.6 组织脏器中CDV RNA含量
3.3 讨论
3.4 小结
结论
参考文献
致谢
个人简历
【参考文献】：
期刊论文
[1]犬瘟热流行病学研究进展[J]. 许阳阳. 农村实用技术. 2018(07)
[2]犬瘟热灭活疫苗与弱毒疫苗免疫效果的研究[J]. 苏俊,王晓庆,王吉贵,李智丽,刘维全. 中国兽医科学. 2018(08)
[3]犬瘟热的流行病学调查及治疗措施[J]. 赵永娟,赵凯,郭瑞强. 山西农业科学. 2017(04)
[4]狐源犬瘟热病毒的分离鉴定及H基因遗传变异分析[J]. 孙彦刚,赵建军,史宁,王洋,马凡舒,鲁荣光,胡博,张蕾,张海玲,白雪,刘昊,吕爽,薛向红,闫如勋,徐淑娟,范思宁,凌明玉,李欣彤,赵辉,闫喜军. 中国预防兽医学报. 2016(03)
[5]大熊猫犬瘟热研究进展[J]. 胡彦博,秦晓东,梁晚枫. 吉林畜牧兽医. 2016(02)
[6]稳定表达貉犬瘟热病毒细胞受体SLAM的Vero细胞系的建立及应用[J]. 赵建军,闫如勋,张海玲,张蕾,胡博,白雪,邵西群,柴秀丽,闫喜军,吴威. 微生物学报. 2012(12)
[7]犬瘟热病原学与蛋白的研究进展[J]. 杨继杰,马福健,孟潇. 养殖技术顾问. 2012(06)
[8]犬瘟热病毒研究分析[J]. 陈云政. 中国畜禽种业. 2009(07)
[9]犬瘟热病毒基因变异及其细胞受体研究进展[J]. 赵建军,闫喜军,吴威. 微生物学报. 2008(07)
[10]犬瘟热免疫预防研究进展[J]. 孔庆波. 动物医学进展. 2007(06)
博士论文
[1]犬瘟热病毒敏感细胞系和感染性克隆的构建与初步应用研究[D]. 刘玉秀.吉林大学 2014
本文编号：3403403
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