猪BLM解旋酶基因CDS区的克隆表达与功能分析
发布时间：2021-09-22 07:14
Bloom解旋酶基因（BLM基因）是RecQ解旋酶家族中的重要成员,在细胞DNA的复制、重组、修复、及维持染色体末端稳定性等过程中具有重要作用。人BLM基因突变会使BLM解旋酶活性降低,DNA修复过程受阻,导致染色体不稳定,进而引起Bloom综合征（Bloom syndrome,BS）。BS是一种罕见隐性常染色体遗传疾病,患者易患各种类型癌症。关于畜禽BLM基因与疫病相关性的研究却少有报导。本试验选取从江香猪为研究对象,采用PCR扩增、分子克隆、原核表达、亲和层析和荧光偏振等方法和技术,对猪BLM基因的结构和功能进行研究,为猪重大疾病的发生、发展和防控等方面提供科学依据和新的思路。研究结果如下:（1）运用qRT-PCR技术检测BLM基因在不同病理及猪不同组织中的表达差异,结果显示:以心脏组织为对照,BLM基因在从江香猪各组织中均能检测到表达,其中在睾丸中的相对表达量最高,其次为肺、肝、脾、心、肾、小肠、大肠,在睾丸和肺组织中的表达水平均高于其他组织,为极显著差异（P<0.01）。BLM基因在猪繁殖与呼吸道综合征肺组织、鸡白血病肝组织和鸭瘟肝组织中的表达水平均高于正常组织的表达水平...
【文章来源】：贵州大学贵州省 211工程院校
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
DNA解旋酶的解链模型（引自Ren,2007）
图 1.2 RecQ 解旋酶结构域（Garcia , 2004）Fig. 1.2 structure domain of RecQ helicaseRecQ 解旋酶核心结构域大约由 450 个氨基酸组成，含有 7 个保守的基序：Motif I、I-VI（Sharma et al.,2005），是 SF1 和 SF2 解旋酶超家族的特征性标记。主要参与 的识别结合与偶联 NTP 水解放能与核酸底物解旋（史婧，2017）。RecQ 解旋酶除个保守的基序外，还含有一个连接在 Motif I N 末端的 Motif 0 基序（Bernstein et003），此基序非常重要。如当 Motif 0 中保守的谷氨酸（glutamine）突变成为精氨arginine）时，将会导致 Bloom 综合症的发生（Ellis et al.,1996），还会使此蛋白的 酶活性和 DNA 解旋活性丧失（Bahr et al.,1998）。RQC 结构域位于保守的解旋酶结构域的 C 末端，参与调控蛋白质-蛋白质反应和 结合反应。目前除了 RecQ4、RecQ5α和 RecQ5γ之外，绝大多数 RecQ 解旋酶都含QC 基序。RQC 结构域含有一个 Zn2+结合区域和一个侧翼解旋区域，能辅助结合，具有分子开关的作用（Bernstein et al.,2003）。当大肠杆菌 RecQ 解旋酶的 Zn2+
DNA 修复过程受阻，导致染色体不稳定，进而引起 BS（Sudha et人 BLM 基因位于 15q26.1 区带上（张永娟等，2012），CDS 区包括 4254 码 1417 个氨基酸，分子质量约为 159kD（Kitao et al.,1998；段志强等，201旋酶包含 RecQ 家族中高度保守的三大结构域：解旋酶核心结构域（Velank9；Lee et al.,2006）、RQC 结构域（Rezazadeh，2012）、HRDC 结构域（Kil008），除此之外，人BLM解旋酶在近C1334-1349端含有一个核定位信号序列（NLM 合成后向细胞核的靶向定位（Kaneko et al.,1997；刘金河等，2014）。B在 DNA 代谢过程中均起到重要作用，如在 DNA 复制时可修复停止或受到叉（Justin et al.,2003）。在 DNA 重组的过程中 BLM 解旋酶可以促进同源重的溶解并阻碍链的交叉（Leonard et al.,2003）。BLM 解旋酶在 DNA 修复中在于对细胞 S 期感知并修复受损 DNA（Wang et al.,2000；Brosh et al.,2001；S014）。BLM 解旋酶可参与端粒末端的修复和加工以此来维护染色体的sko et al.,2002；张永娟，2012）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]端粒酶及其与疾病的关系概述[J]. 梁丽琴,任盼盼. 生物学教学. 2019(03)
[2]猪BLM基因N端、C端的克隆及其在不同组织与疾病中的表达分析[J]. 王赛楠,许厚强,赵佳福. 中国畜牧兽医. 2018(08)
[3]汉防己甲素衍生物HL-27对BLM解旋酶生物学特性的影响[J]. 张望明,葛章文,晏文涛,潘卫东,焦彦朝,刘杰麟. 中国药理学通报. 2018(07)
[4]eIF4A1基因沉默对胃癌SGC-7901细胞生物学行为影响机制的探讨[J]. 谢东毅,韦尉元,吴锟,谢玉波,肖强. 中国临床新医学. 2018(04)
[5]细粒棘球蚴原头节β4微管蛋白的可溶性表达、纯化及生物信息学分析[J]. 姚嘉青,刘丛珊,薛剑,陶奕,张皓冰. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2018(03)
[6]影响BLM基因表达的miRNAs筛选及抑制效率研究[J]. 谌颖莲,许厚强,赵佳福,王赛楠. 生物技术. 2018(01)
[7]抗RecQ解旋酶单克隆抗体的制备、鉴定及应用[J]. 张荣红,贾铁文,廉芳,刘杰麟,周孟. 细胞与分子免疫学杂志. 2018(02)
[8]胶质瘤基因多态性的研究进展[J]. 黄冠又,甘鸿川. 国际神经病学神经外科学杂志. 2017(06)
[9]猪DDX1基因的克隆、序列分析及表达[J]. 谢立兰,李晨,吴蔚,方六荣,肖少波. 中国兽医学报. 2017(11)
[10]尼罗罗非鱼NCCRP-1基因的原核表达及条件优化[J]. 黄瑜,牛金中,汤菊芬,鲁义善,汪志文,郑琦,蔡佳,简纪常. 基因组学与应用生物学. 2018(09)
博士论文
[1]BLM解旋酶的酶学特性与DHBN结构研究[D]. 史婧.西北农林科技大学 2017
[2]RecQ解旋酶的动力学机理研究[D]. 丁秀艳.西北农林科技大学 2012
硕士论文
[1]贵州从江香猪PHKG1、PHKG2基因的克隆表达及功能研究[D]. 王圆圆.贵州大学 2018
[2]CRISPR/Cas9敲除BLM解旋酶基因对前列腺癌细胞增殖的影响[D]. 吴萍.贵州大学 2017
[3]甘草次酸抑制前列腺癌细胞侵袭迁移的分子机制研究[D]. 陈福.贵州大学 2017
[4]牛FATP1启动子调控PPAR基因转录水平的研究[D]. 张青青.贵州大学 2017
[5]猪肉质性状相关基因FoxO4、PRKAA1的克隆表达及功能研究[D]. 孙成娟.贵州大学 2017
[6]关岭牛MSTN基因启动子相关转录因子的筛选、克隆及表达纯化[D]. 夏丹.贵州大学 2016
[7]BLM基因在白血病细胞中的表达及其临床意义[D]. 张永娟.蚌埠医学院 2012
[8]猪DDX3X的功能分析及其对猪繁殖与呼吸综合征病毒增殖的影响[D]. 刘琴.华中农业大学 2011
本文编号：3403363
【文章来源】：贵州大学贵州省 211工程院校
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
DNA解旋酶的解链模型（引自Ren,2007）
图 1.2 RecQ 解旋酶结构域（Garcia , 2004）Fig. 1.2 structure domain of RecQ helicaseRecQ 解旋酶核心结构域大约由 450 个氨基酸组成，含有 7 个保守的基序：Motif I、I-VI（Sharma et al.,2005），是 SF1 和 SF2 解旋酶超家族的特征性标记。主要参与 的识别结合与偶联 NTP 水解放能与核酸底物解旋（史婧，2017）。RecQ 解旋酶除个保守的基序外，还含有一个连接在 Motif I N 末端的 Motif 0 基序（Bernstein et003），此基序非常重要。如当 Motif 0 中保守的谷氨酸（glutamine）突变成为精氨arginine）时，将会导致 Bloom 综合症的发生（Ellis et al.,1996），还会使此蛋白的 酶活性和 DNA 解旋活性丧失（Bahr et al.,1998）。RQC 结构域位于保守的解旋酶结构域的 C 末端，参与调控蛋白质-蛋白质反应和 结合反应。目前除了 RecQ4、RecQ5α和 RecQ5γ之外，绝大多数 RecQ 解旋酶都含QC 基序。RQC 结构域含有一个 Zn2+结合区域和一个侧翼解旋区域，能辅助结合，具有分子开关的作用（Bernstein et al.,2003）。当大肠杆菌 RecQ 解旋酶的 Zn2+
DNA 修复过程受阻，导致染色体不稳定，进而引起 BS（Sudha et人 BLM 基因位于 15q26.1 区带上（张永娟等，2012），CDS 区包括 4254 码 1417 个氨基酸，分子质量约为 159kD（Kitao et al.,1998；段志强等，201旋酶包含 RecQ 家族中高度保守的三大结构域：解旋酶核心结构域（Velank9；Lee et al.,2006）、RQC 结构域（Rezazadeh，2012）、HRDC 结构域（Kil008），除此之外，人BLM解旋酶在近C1334-1349端含有一个核定位信号序列（NLM 合成后向细胞核的靶向定位（Kaneko et al.,1997；刘金河等，2014）。B在 DNA 代谢过程中均起到重要作用，如在 DNA 复制时可修复停止或受到叉（Justin et al.,2003）。在 DNA 重组的过程中 BLM 解旋酶可以促进同源重的溶解并阻碍链的交叉（Leonard et al.,2003）。BLM 解旋酶在 DNA 修复中在于对细胞 S 期感知并修复受损 DNA（Wang et al.,2000；Brosh et al.,2001；S014）。BLM 解旋酶可参与端粒末端的修复和加工以此来维护染色体的sko et al.,2002；张永娟，2012）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]端粒酶及其与疾病的关系概述[J]. 梁丽琴,任盼盼. 生物学教学. 2019(03)
[2]猪BLM基因N端、C端的克隆及其在不同组织与疾病中的表达分析[J]. 王赛楠,许厚强,赵佳福. 中国畜牧兽医. 2018(08)
[3]汉防己甲素衍生物HL-27对BLM解旋酶生物学特性的影响[J]. 张望明,葛章文,晏文涛,潘卫东,焦彦朝,刘杰麟. 中国药理学通报. 2018(07)
[4]eIF4A1基因沉默对胃癌SGC-7901细胞生物学行为影响机制的探讨[J]. 谢东毅,韦尉元,吴锟,谢玉波,肖强. 中国临床新医学. 2018(04)
[5]细粒棘球蚴原头节β4微管蛋白的可溶性表达、纯化及生物信息学分析[J]. 姚嘉青,刘丛珊,薛剑,陶奕,张皓冰. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2018(03)
[6]影响BLM基因表达的miRNAs筛选及抑制效率研究[J]. 谌颖莲,许厚强,赵佳福,王赛楠. 生物技术. 2018(01)
[7]抗RecQ解旋酶单克隆抗体的制备、鉴定及应用[J]. 张荣红,贾铁文,廉芳,刘杰麟,周孟. 细胞与分子免疫学杂志. 2018(02)
[8]胶质瘤基因多态性的研究进展[J]. 黄冠又,甘鸿川. 国际神经病学神经外科学杂志. 2017(06)
[9]猪DDX1基因的克隆、序列分析及表达[J]. 谢立兰,李晨,吴蔚,方六荣,肖少波. 中国兽医学报. 2017(11)
[10]尼罗罗非鱼NCCRP-1基因的原核表达及条件优化[J]. 黄瑜,牛金中,汤菊芬,鲁义善,汪志文,郑琦,蔡佳,简纪常. 基因组学与应用生物学. 2018(09)
博士论文
[1]BLM解旋酶的酶学特性与DHBN结构研究[D]. 史婧.西北农林科技大学 2017
[2]RecQ解旋酶的动力学机理研究[D]. 丁秀艳.西北农林科技大学 2012
硕士论文
[1]贵州从江香猪PHKG1、PHKG2基因的克隆表达及功能研究[D]. 王圆圆.贵州大学 2018
[2]CRISPR/Cas9敲除BLM解旋酶基因对前列腺癌细胞增殖的影响[D]. 吴萍.贵州大学 2017
[3]甘草次酸抑制前列腺癌细胞侵袭迁移的分子机制研究[D]. 陈福.贵州大学 2017
[4]牛FATP1启动子调控PPAR基因转录水平的研究[D]. 张青青.贵州大学 2017
[5]猪肉质性状相关基因FoxO4、PRKAA1的克隆表达及功能研究[D]. 孙成娟.贵州大学 2017
[6]关岭牛MSTN基因启动子相关转录因子的筛选、克隆及表达纯化[D]. 夏丹.贵州大学 2016
[7]BLM基因在白血病细胞中的表达及其临床意义[D]. 张永娟.蚌埠医学院 2012
[8]猪DDX3X的功能分析及其对猪繁殖与呼吸综合征病毒增殖的影响[D]. 刘琴.华中农业大学 2011
本文编号：3403363
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