Sn受体D9和D10结构域在PRRSV感染PAM细胞中的作用
发布时间：2021-09-23 14:34
猪繁殖与呼吸综合征是一种以临床表现为猪呼吸障碍、妊娠母猪流产或死胎和小猪高致死率为特征的传染性疾病,该病是由动脉炎病毒科的一种单股正链RNA病毒——猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的。该病毒的主要靶细胞是猪肺泡巨噬细胞（PAMs）,同时PRRSV在单核细胞、淋巴细胞等细胞中也可增殖。研究发现猪唾液酸黏附素（Sialoadhesin,Sn）和CD163共同介导着PRRSV感染猪肺泡巨噬细胞,其中猪唾液酸黏附素主要在介导PRRSV病毒的黏附和内吞中发挥重要作用。有研究表明,将猪Sn（pSn）、人Sn（hSn）、小鼠Sn（mSn）与猪CD163共转染到PK-15细胞中,均可以促进PRRSV的感染,这说明三种受体在介导PRRSV感染细胞时物种间的差异并不大,提示这三个物种的Sn可能共同存在高度保守的功能结构域在介导PRRSV感染中发挥作用。本研究通过预测猪、人和小鼠三种动物源性Sn结构域,找到了具有高度同源性的Sn保守结构域D10。同时,本实验室以前将猪Sn分为九段进行未复性蛋白的竞争结合试验和抗体封闭试验时发现,Sn6（包括结构域D9和D10）可能在PRRSV感染中发挥重要作用。因此...
【文章来源】：河南农业大学河南省
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
RT-PCR扩增结果
图 3 pET-32a-D9 和 pET-32a-D10 重组质粒的双酶切鉴定g. 3 The double restriction enzyme identification of the pET-32a-D9 and pET-32a-D10 recombinant plaM:蛋白相对分子量标准；1：pET-32a-D9 双酶切；2：pET-32a-D10 双酶切；3：pET-32a 双酶切M:DL 5000 DNA Marker; 1: Enzyme-digested product of pET-32a-D9; 2: Enzyme-digested product opET-32a-D10; 3: Enzyme-digested product of pET-32a pET32a-D9 和 pET32a-D10 重组蛋白的表达及纯化1 IPTG 最佳诱导浓度当摸索 IPTG 的最佳诱导浓度时，固定诱导时间为 6h；IPTG 诱导浓度分别为 0.m、0.6Mm、0.8Mm、1.0Mm；诱导表达结束后取等量的培养物制样，通过 SDS-对表达产物中重组蛋白含量进行检测，如图可知，两个重组蛋白 IPTG 的最佳诱导为 0.6Mm 和 1.0Mm（图 4）。
图 3 pET-32a-D9 和 pET-32a-D10 重组质粒的 restriction enzyme identification of the pET-32a-D9 a子量标准；1：pET-32a-D9 双酶切；2：pET-32a-DNA Marker; 1: Enzyme-digested product of pET-32a-DpET-32a-D10; 3: Enzyme-digested product o 和 pET32a-D10 重组蛋白的表达及纯导浓度G 的最佳诱导浓度时，固定诱导时间为 6h；、0.8Mm、1.0Mm；诱导表达结束后取等量中重组蛋白含量进行检测，如图可知，两个 1.0Mm（图 4）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪CD151转基因PK-15细胞系构建及其对猪繁殖与呼吸综合征病毒的易感性[J]. 黄燕燕,郭睿,张钰,张鑫宇,夏晓莉,孙怀昌. 微生物学报. 2013(05)
[2]波形蛋白介导猪繁殖与呼吸综合征病毒感染Marc-145细胞作用的初步研究[J]. 王伟伟,张璐,马晓春,高继明,肖一红,周恩民. 病毒学报. 2011(05)
[3]PRRS检测技术的研究进展[J]. 黄伟,陈进会,颜其贵,冯迎春. 广东畜牧兽医科技. 2010(02)
[4]猪繁殖与呼吸综合征病毒分子生物学研究进展[J]. 李国娟,田永强,李建强,李宝玉,柳纪省. 生物技术通报. 2009(12)
[5]高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-PCR鉴别诊断方法的建立[J]. 郝晓芳,周艳君,田志军,韦天超,安同庆,彭金美,华荣虹,童光志. 中国预防兽医学报. 2007(09)
[6]猪生殖与呼吸综合征病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立[J]. 宋志军,宋长绪,杨增岐,朱道中,武占银,蒋智勇,林志雄,刘燕玲,张福良. 中国兽医科学. 2006(02)
[7]猪繁殖与呼吸综合征病毒分子生物学研究进展[J]. 舒秀伟,宣华,王文成,段文龙. 中国兽药杂志. 2005(08)
[8]从疑似PRRS流产胎儿分离PRRSV的研究[J]. 郭宝清,陈章水,刘文兴,崔益洙. 中国畜禽传染病. 1996(02)
硕士论文
[1]唾液酸黏附素胞外区结构域的原核表达及其多克隆抗体制备[D]. 张继希.河南农业大学 2012
[2]唾液酸近氨基端结构域功能及脂多糖对PRRSV诱导IFN-α的影响研究[D]. 张志远.河南农业大学 2011
[3]PRRSV GP3和GP4的免疫活性及其在感染细胞内的分布研究[D]. 王中明.河南农业大学 2009
本文编号：3405880
【文章来源】：河南农业大学河南省
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
RT-PCR扩增结果
图 3 pET-32a-D9 和 pET-32a-D10 重组质粒的双酶切鉴定g. 3 The double restriction enzyme identification of the pET-32a-D9 and pET-32a-D10 recombinant plaM:蛋白相对分子量标准；1：pET-32a-D9 双酶切；2：pET-32a-D10 双酶切；3：pET-32a 双酶切M:DL 5000 DNA Marker; 1: Enzyme-digested product of pET-32a-D9; 2: Enzyme-digested product opET-32a-D10; 3: Enzyme-digested product of pET-32a pET32a-D9 和 pET32a-D10 重组蛋白的表达及纯化1 IPTG 最佳诱导浓度当摸索 IPTG 的最佳诱导浓度时，固定诱导时间为 6h；IPTG 诱导浓度分别为 0.m、0.6Mm、0.8Mm、1.0Mm；诱导表达结束后取等量的培养物制样，通过 SDS-对表达产物中重组蛋白含量进行检测，如图可知，两个重组蛋白 IPTG 的最佳诱导为 0.6Mm 和 1.0Mm（图 4）。
图 3 pET-32a-D9 和 pET-32a-D10 重组质粒的 restriction enzyme identification of the pET-32a-D9 a子量标准；1：pET-32a-D9 双酶切；2：pET-32a-DNA Marker; 1: Enzyme-digested product of pET-32a-DpET-32a-D10; 3: Enzyme-digested product o 和 pET32a-D10 重组蛋白的表达及纯导浓度G 的最佳诱导浓度时，固定诱导时间为 6h；、0.8Mm、1.0Mm；诱导表达结束后取等量中重组蛋白含量进行检测，如图可知，两个 1.0Mm（图 4）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪CD151转基因PK-15细胞系构建及其对猪繁殖与呼吸综合征病毒的易感性[J]. 黄燕燕,郭睿,张钰,张鑫宇,夏晓莉,孙怀昌. 微生物学报. 2013(05)
[2]波形蛋白介导猪繁殖与呼吸综合征病毒感染Marc-145细胞作用的初步研究[J]. 王伟伟,张璐,马晓春,高继明,肖一红,周恩民. 病毒学报. 2011(05)
[3]PRRS检测技术的研究进展[J]. 黄伟,陈进会,颜其贵,冯迎春. 广东畜牧兽医科技. 2010(02)
[4]猪繁殖与呼吸综合征病毒分子生物学研究进展[J]. 李国娟,田永强,李建强,李宝玉,柳纪省. 生物技术通报. 2009(12)
[5]高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-PCR鉴别诊断方法的建立[J]. 郝晓芳,周艳君,田志军,韦天超,安同庆,彭金美,华荣虹,童光志. 中国预防兽医学报. 2007(09)
[6]猪生殖与呼吸综合征病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立[J]. 宋志军,宋长绪,杨增岐,朱道中,武占银,蒋智勇,林志雄,刘燕玲,张福良. 中国兽医科学. 2006(02)
[7]猪繁殖与呼吸综合征病毒分子生物学研究进展[J]. 舒秀伟,宣华,王文成,段文龙. 中国兽药杂志. 2005(08)
[8]从疑似PRRS流产胎儿分离PRRSV的研究[J]. 郭宝清,陈章水,刘文兴,崔益洙. 中国畜禽传染病. 1996(02)
硕士论文
[1]唾液酸黏附素胞外区结构域的原核表达及其多克隆抗体制备[D]. 张继希.河南农业大学 2012
[2]唾液酸近氨基端结构域功能及脂多糖对PRRSV诱导IFN-α的影响研究[D]. 张志远.河南农业大学 2011
[3]PRRSV GP3和GP4的免疫活性及其在感染细胞内的分布研究[D]. 王中明.河南农业大学 2009
本文编号：3405880
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