PB2蛋白576E对H3N2犬流感病毒哺乳动物适应性的作用及其机制研究
发布时间：2021-09-23 19:46
H3N2犬流感病毒（Canine influenza virus,CIV）是一种由禽流感病毒跨宿主传染至犬,可在犬间迅速传播的传染性呼吸道病毒,在亚洲多国以及美国的犬中广泛流行,易伴随继发性感染,对犬的健康造成极大危害。实验室前期研究发现两株在鼠上复制能力完全不同的毒株:一株禽源H3N2 CIV（A/canine/Zhejiang/01/2012）（简称为ZJ01）,鼠上复制良好,但无法感染禽;一株H3N2禽流感病毒（A/chicken/Shanghai/D6/2012）（简称为SHD6）,不感染小鼠。ZJ01-PB2被SHD6-PB2替换后,ZJ01病毒无法成功拯救;反之,将ZJ01-PB2替换到SHD6毒株之后,SHD6在鼠上复制能力从不感染变为复制良好。本研究重点阐明PB2对ZJ01病毒在哺乳动物中的适应性及作用机制。分别以ZJ01和SHD6为背景,通过聚合酶活性实验测定单、双基因替换后的聚合酶活性,结果显示,ZJ01-PB2是影响ZJ01病毒株聚合酶活性的关键基因。通过替换PB2基因的五个功能区测定聚合酶活性,结果发现,ZJ01 PB2蛋白的627-domain对聚合酶活性具有...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
目的片段扩增Fig.2-1Amplificationofthetargetfragment
中国农业科学院硕士学位论文第二章H3N2犬流感病毒PB2基因576氨基酸位点对聚合酶活性有重要影响16图2-2单基因和双基因替换检测聚合酶活性结果Fig.2-2resultsofsinglegeneanddoublegenesubstitutionfordetectionofpolymeraseactivityA:以ZJ01为背景单基因替换B:以SHD6为背景单基因替换C:以ZJ01为背景双基因替换D:以SHD6为背景双基因替换2.3.3关键氨基酸位点的筛选对比ZJ01和SHD6毒株的PB2基因，共有18个氨基酸位点不同。将PB2通过功能区划分为五个区域：PB2基因N端区域、Mid区域、帽子结合区域(Cap-binding)、Linker区域、627功能区(627-Domain)。每个区域都包含ZJ01与SHD6毒株不同的氨基酸位点，其结果如下图所示(图2-3)。
中国农业科学院硕士学位论文第二章H3N2犬流感病毒PB2基因576氨基酸位点对聚合酶活性有重要影响17图2-3氨基酸位点的筛选Fig.2-3Screeningofaminoacidsites2.3.4不同区域以及氨基酸位点影响聚合酶活性的结果构建了不同区域突变的PB2基因，通过聚合酶活性实验测定不同区域突变对聚合酶活性的影响。其结果如下图所示(图2.4)。根据以下结果可知，627-domain突变后使ZJ01聚合酶活性显著降低260倍(****P＜0.0001)。以SHD6为背景，PB2的627-domain使得SHD6的聚合酶活性显著增高380倍(****P＜0.0001)；PB2基因的627-domain区域中共包含4个ZJ01和SHD6不同的氨基酸位点，通过单点突变，测定不同点突变对聚合酶活性的影响。其结果如下图所示(图2-4)，当PB2基因的576氨基酸从谷氨酸(E)突变为赖氨酸(K)时，使得ZJ01的聚合酶活性显著降低90倍(****P＜0.0001)。当SHD6的PB2基因的576氨基酸位点从赖氨酸(K)突变为谷氨酸(E)之后，使得SHD6的聚合酶活性显著增高240倍(***P＜0.0002)(图2-4)。图2-4627-domain对聚合酶活性的影响Fig.2-4627-domainEffectonpolymeraseactivityA:以ZJ01为背景区域替换聚合酶活性B:以ZJ01为背景单点突变聚合酶活性C:以SHD6为背景单点突变聚合酶活性
【参考文献】：
期刊论文
[1]The D253N Mutation in the Polymerase Basic 2 Gene in Avian Influenza（H9N2） Virus Contributes to the Pathogenesis of the Virus in Mammalian Hosts[J]. Jinfeng Zhang,Rong Su,Xiaoyun Jian,Hongliang An,Ronbing Jiang,Chris Ka Pun Mok. Virologica Sinica. 2018(06)
本文编号：3406304
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
目的片段扩增Fig.2-1Amplificationofthetargetfragment
中国农业科学院硕士学位论文第二章H3N2犬流感病毒PB2基因576氨基酸位点对聚合酶活性有重要影响16图2-2单基因和双基因替换检测聚合酶活性结果Fig.2-2resultsofsinglegeneanddoublegenesubstitutionfordetectionofpolymeraseactivityA:以ZJ01为背景单基因替换B:以SHD6为背景单基因替换C:以ZJ01为背景双基因替换D:以SHD6为背景双基因替换2.3.3关键氨基酸位点的筛选对比ZJ01和SHD6毒株的PB2基因，共有18个氨基酸位点不同。将PB2通过功能区划分为五个区域：PB2基因N端区域、Mid区域、帽子结合区域(Cap-binding)、Linker区域、627功能区(627-Domain)。每个区域都包含ZJ01与SHD6毒株不同的氨基酸位点，其结果如下图所示(图2-3)。
中国农业科学院硕士学位论文第二章H3N2犬流感病毒PB2基因576氨基酸位点对聚合酶活性有重要影响17图2-3氨基酸位点的筛选Fig.2-3Screeningofaminoacidsites2.3.4不同区域以及氨基酸位点影响聚合酶活性的结果构建了不同区域突变的PB2基因，通过聚合酶活性实验测定不同区域突变对聚合酶活性的影响。其结果如下图所示(图2.4)。根据以下结果可知，627-domain突变后使ZJ01聚合酶活性显著降低260倍(****P＜0.0001)。以SHD6为背景，PB2的627-domain使得SHD6的聚合酶活性显著增高380倍(****P＜0.0001)；PB2基因的627-domain区域中共包含4个ZJ01和SHD6不同的氨基酸位点，通过单点突变，测定不同点突变对聚合酶活性的影响。其结果如下图所示(图2-4)，当PB2基因的576氨基酸从谷氨酸(E)突变为赖氨酸(K)时，使得ZJ01的聚合酶活性显著降低90倍(****P＜0.0001)。当SHD6的PB2基因的576氨基酸位点从赖氨酸(K)突变为谷氨酸(E)之后，使得SHD6的聚合酶活性显著增高240倍(***P＜0.0002)(图2-4)。图2-4627-domain对聚合酶活性的影响Fig.2-4627-domainEffectonpolymeraseactivityA:以ZJ01为背景区域替换聚合酶活性B:以ZJ01为背景单点突变聚合酶活性C:以SHD6为背景单点突变聚合酶活性
【参考文献】：
期刊论文
[1]The D253N Mutation in the Polymerase Basic 2 Gene in Avian Influenza（H9N2） Virus Contributes to the Pathogenesis of the Virus in Mammalian Hosts[J]. Jinfeng Zhang,Rong Su,Xiaoyun Jian,Hongliang An,Ronbing Jiang,Chris Ka Pun Mok. Virologica Sinica. 2018(06)
本文编号：3406304
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