猪早期胚胎发育中sox2启动子活性分析
发布时间：2021-09-28 21:24
sox2是sox家族中研究最多的基因之一,它以单外显子单拷贝的形式分布在猪（Sus scrofa）的第13号染色体上,其表达产物作为转录因子调控下游众多基因的表达,包括涉及机体发育在内许多重要的生物学事件[1]。它与OCT4、NANOG一同作为核心多能因子,在哺乳动物早期胚胎发育的第一次谱系分化,形成分别具有发育为胎体和胎盘两种命运的细胞群体——内细胞团细胞（Inner cell mass,ICM）和滋养层细胞（Trophoblast,TE）以及内细胞团多能性维持的过程中便开始发挥作用[2]。同时SOX2也是大多数种类的多能性干细胞和癌细胞的标记基因[3],在干细胞与再生医学以及癌症研究领域中是重要的研究对象[4]。尽管sox2对机体而言具有众多且十分重要的作用,但是对于sox2基因上游调控网络的研究并不像下游功能那样深入,对它启动子调控的系统研究较少,已知结论有其核心启动元件是位于编码区上游468 bp,转录起始位点上游46 bp处的一个倒转的“CCAAT box”[5],这...
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：46 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
候选报告质粒图谱
结果与分析表 3-1 报告质粒对比Table 3-1 Comparison of reporter plasmids名称 大小 质粒骨架 启动子 报告基因pEGFP-CMV promoter-T 4,731 bp pEGF-C1 CMV EGFPpEGFP-UBC promoter-T 5,348 bp pEGF-C1 UBC EGFPpEGFP-CMV promoter 3,448 bp pRL-TK CMV EGFPpEGFP-UBC promoter 4,066 bp pRL-TK UBC EGFP将上述构建好的四种质粒去内毒素提取后稀释到 20ng/μl，分别注射到激活后4h胚胎中，培养、观察荧光表达（图 3-2 B，C，D）。在 4-cell 时期注射 pEGFP-CMV promoter-T 的组别中少数胚胎开始能观察到微弱的荧光，8-cell 时开始有广泛的表达。我们在孤雌后 5 天对胚胎进行了荧光镜检与统计。结果只有 pEGFP-CMV promoter-T 质粒注射组有较好的 EGFP 表达。在后续我们对 pEGFP-CMV promoter-T 注射组额外添加了浓度 100ng/μl 的注射组。其余结果与上次相同，但提高浓度后阳性率与荧光强度均有提高（图 3-2 B，D）。在发育率方面，注射对胚胎发育有较大影响，相较孤雌对照组，囊胚率下降显著，卵裂后发育主要阻滞在 4,8-cell 阶段（图 3-2 C）。因此在后续试验中将以 pEGFP-CMV promoter-T 质粒为基本骨架，质粒总浓度设置为 100ng/μl。
东北农业大学理学硕士学位论文（+0h），孤雌后 2 小时胚胎（+2h），孤雌后 4 小时胚胎（+4h），孤雌后 6 小和孤雌后 8 小时胚胎（+8h），孤雌后 10 小时胚胎（+10h），孤雌后 11 小时胚养并跟踪荧光表达情况（图 3-3）。与之前的结果类似，4-cell 时期开始能监测在 8-cell 时广泛表达。我们在孤雌后 6 天胚胎进行了荧光镜检与统计（图 3-3示，注射时间对胚胎发育和 EGFP 表达有较大影响。卵裂后的胚胎发育主要阻阶 段 （ 图 3-3 C ）， 综 合 后 认 为 在 +2h 到 +6h 之 间 是 较 为 合 适 的
本文编号：3412553
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：46 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
候选报告质粒图谱
结果与分析表 3-1 报告质粒对比Table 3-1 Comparison of reporter plasmids名称 大小 质粒骨架 启动子 报告基因pEGFP-CMV promoter-T 4,731 bp pEGF-C1 CMV EGFPpEGFP-UBC promoter-T 5,348 bp pEGF-C1 UBC EGFPpEGFP-CMV promoter 3,448 bp pRL-TK CMV EGFPpEGFP-UBC promoter 4,066 bp pRL-TK UBC EGFP将上述构建好的四种质粒去内毒素提取后稀释到 20ng/μl，分别注射到激活后4h胚胎中，培养、观察荧光表达（图 3-2 B，C，D）。在 4-cell 时期注射 pEGFP-CMV promoter-T 的组别中少数胚胎开始能观察到微弱的荧光，8-cell 时开始有广泛的表达。我们在孤雌后 5 天对胚胎进行了荧光镜检与统计。结果只有 pEGFP-CMV promoter-T 质粒注射组有较好的 EGFP 表达。在后续我们对 pEGFP-CMV promoter-T 注射组额外添加了浓度 100ng/μl 的注射组。其余结果与上次相同，但提高浓度后阳性率与荧光强度均有提高（图 3-2 B，D）。在发育率方面，注射对胚胎发育有较大影响，相较孤雌对照组，囊胚率下降显著，卵裂后发育主要阻滞在 4,8-cell 阶段（图 3-2 C）。因此在后续试验中将以 pEGFP-CMV promoter-T 质粒为基本骨架，质粒总浓度设置为 100ng/μl。
东北农业大学理学硕士学位论文（+0h），孤雌后 2 小时胚胎（+2h），孤雌后 4 小时胚胎（+4h），孤雌后 6 小和孤雌后 8 小时胚胎（+8h），孤雌后 10 小时胚胎（+10h），孤雌后 11 小时胚养并跟踪荧光表达情况（图 3-3）。与之前的结果类似，4-cell 时期开始能监测在 8-cell 时广泛表达。我们在孤雌后 6 天胚胎进行了荧光镜检与统计（图 3-3示，注射时间对胚胎发育和 EGFP 表达有较大影响。卵裂后的胚胎发育主要阻阶 段 （ 图 3-3 C ）， 综 合 后 认 为 在 +2h 到 +6h 之 间 是 较 为 合 适 的
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