济宁青山羊子宫内雌激素受体（ERα、β）和孕激素受体（PR）的定位及其mRNA表达的增龄性变化
发布时间：2021-09-29 18:18
济宁青山羊是中国优质的地方山羊品种，也是世界上优良的种质资源。因青山羊性成熟较早，高繁殖力，四季均可发情，遗传性稳定，适应性强，肉质细腻、鲜美等优良特性而深受广大人民的青睐。母羊初情期一般始于60日龄，90120日龄即性成熟。为探讨济宁青山羊出生当天至180日龄雌激素（E）和孕激素（P）含量的变化规律，雌激素受体α（ERα）、雌激素受体β（ERβ）和孕激素受体（PR）在子宫中的分布和表达规律，本试验用放射免疫分析法检测济宁青山羊出生当天至180日龄血清中雌激素和孕激素的含量；用SABC免疫组化法检测ERα、ERβ和PR免疫阳性细胞在不同试验组济宁青山羊子宫中的分布；以GAPDH为内参基因，qRT-PCR法对生后发育不同时期济宁青山羊子宫中ERα、ERβ和PRmRNA表达规律进行研究。放射免疫分析法结果显示：济宁青山羊出生当天至180日龄均能检测到E和P，血清中E含量出生时最多，30日龄显著下降（P<0.05），虽在90日龄和180日龄分别出现两个峰值，但60180日龄期间变化不大（P>0.05）；血清中P浓度在出生时较高，此后迅速...
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
1 引言
1.1 下丘脑一垂体一卵巢轴对动物生殖的影响
1.2 子宫的形态结构与功能
1.3 雌、孕激素对子宫发育的调控
1.3.1 雌激素对子宫发育的调控
1.3.2 孕激素对子宫发育的调控
1.4 雌、孕激素受体的结构和功能及对子宫发育的调控
1.4.1 雌激素受体的结构和功能及对子宫发育的调控
1.4.2 孕激素受体的结构和功能及对子宫发育的调控
1.5 荧光定量 qRT-PCR 技术
1.6 济宁青山羊的生物学特性
1.7 本研究的目的和意义
2 材料与方法
2.1 试验材料
2.1.1 试验动物
2.1.2 试验地点
2.1.3 主要试剂和试验用品
2.2 放射免疫分析法测定血清中 E2和 P
2.2.1 血清样品的采集与保存
2.2.2 激素水平的测定
2.2.3 数据处理
2.3 SABC 免疫组织化学方法检测子宫 ERα、ERβ和 PR 阳性分布
2.3.1 切片标本制备
2.3.2 HE 法染色
2.3.3 SABC 免疫组织化学方法
2.3.4 对照试验
2.3.5 Image pro-plus 4.5 图像分析
2.4 qRT-PCR 检测子宫 ERαmRNA、ERβmRNA 和 PR mRNA 相对表达量
2.4.1 总 RNA 的提取
2.4.2 RNA 质量的鉴定
2.4.3 引物设计及 qRT-PCR 扩增
3 结果及分析
3.1 生后发育过程中血清中 E2和 P 的分泌变化
3.2 生后发育过程中子宫的形态学变化
3.3 生后发育过程中 ERα、ERβ和 PR 阳性细胞在子宫的分布规律
3.3.1 ERα阳性细胞在生后发育不同阶段子宫内的分布特点
3.3.2 ERβ阳性细胞在生后发育不同阶段子宫内的分布特点
3.3.3 PR 阳性细胞在生后发育不同阶段子宫内的分布特点
3.4 qRT-PCR 试验结果
3.4.1 溶解曲线分析结果
3.4.2 总 RNA 及 PCR 产物的检测结果
3.4.3 重组质粒的 PCR 检测结果
3.4.4 阳性克隆的测序
3.4.5 扩增曲线的分析结果
3.4.6 标准曲线产物的检测结果
3.4.7 标准曲线及其目的基因的的扩增效率
3.4.8 生后发育过程中子宫内 ERα mRNA 变化规律
3.4.9 生后发育过程中子宫内 ERβ mRNA 变化规律
3.4.10 生后发育过程中子宫内 PR mRNA 变化规律
4 讨论
4.1 生后发育过程中血清中 E2和 P 的分泌规律
4.2 生后发育时期济宁青山羊子宫内 ERα、ERβ和 PR 的分布特点及表达
4.2.1 生后发育时期济宁青山羊子宫内 ERα的分布特点及表达
4.2.2 生后发育时期济宁青山羊子宫内 ERβ的分布特点及表达
4.2.3 生后发育时期济宁青山羊子宫内 PR 的分布特点及表达
5 结论
6 参考文献
7 附图
致谢
攻读学位期间发表论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]雌激素受体α和孕激素受体在不同发情周期牦牛子宫中的表达变化[J]. 阿依木古丽,蔡勇,曹忻,龙玲,陈士恩,余四九,崔燕. 中国农业科学. 2011(11)
[2]人胎盘间充质干细胞雌、孕激素受体的表达[J]. 沙文琼,王自能,苏放明. 中国组织工程研究与临床康复. 2010(45)
[3]牦牛发情周期子宫组织结构的观察[J]. 段永霞,崔燕,余四九,杨波. 畜牧兽医学报. 2010(09)
[4]雌激素的非基因组途径在哺乳动物雌性生殖过程中的作用机制[J]. 梁晓欢,杨增明. 生物化学与生物物理进展. 2010(06)
[5]自然发情与诱导发情小鼠子宫内膜中雌激素受体α表达的比较[J]. 高雅,林自力,张鸿波,梁鸿斌,刘云海,郭勇,倪和民. 中国实验动物学报. 2010(02)
[6]神经肽Y-Y1受体基因（NPY-Y1R）多态性及其与山羊繁殖性能关系[J]. 储明星,冯涛,赵有璋,张英杰,方丽,狄冉. 农业生物技术学报. 2009(06)
[7]八点黑獭兔不同发育时期子宫组织结构变化的研究[J]. 位兰,卢佳佳,薛帮群,罗来强. 中国养兔. 2009(09)
[8]济宁青山羊品种资源调查[J]. 蔡泉. 中国草食动物. 2008(06)
[9]不同时期小鼠血浆中孕激素的变化[J]. 朱河水,都军霞,刘涛,林茂旺. 安徽农业科学. 2008(14)
[10]实时荧光定量PCR技术的类型、特点与应用[J]. 袁亚男,刘文忠. 中国畜牧兽医. 2008(03)
硕士论文
[1]雌激素受体亚型在子宫内膜异位症在位内膜及小白鼠模型中的表达及意义[D]. 张翼海.中国医科大学 2009
本文编号：3414219
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
1 引言
1.1 下丘脑一垂体一卵巢轴对动物生殖的影响
1.2 子宫的形态结构与功能
1.3 雌、孕激素对子宫发育的调控
1.3.1 雌激素对子宫发育的调控
1.3.2 孕激素对子宫发育的调控
1.4 雌、孕激素受体的结构和功能及对子宫发育的调控
1.4.1 雌激素受体的结构和功能及对子宫发育的调控
1.4.2 孕激素受体的结构和功能及对子宫发育的调控
1.5 荧光定量 qRT-PCR 技术
1.6 济宁青山羊的生物学特性
1.7 本研究的目的和意义
2 材料与方法
2.1 试验材料
2.1.1 试验动物
2.1.2 试验地点
2.1.3 主要试剂和试验用品
2.2 放射免疫分析法测定血清中 E2和 P
2.2.1 血清样品的采集与保存
2.2.2 激素水平的测定
2.2.3 数据处理
2.3 SABC 免疫组织化学方法检测子宫 ERα、ERβ和 PR 阳性分布
2.3.1 切片标本制备
2.3.2 HE 法染色
2.3.3 SABC 免疫组织化学方法
2.3.4 对照试验
2.3.5 Image pro-plus 4.5 图像分析
2.4 qRT-PCR 检测子宫 ERαmRNA、ERβmRNA 和 PR mRNA 相对表达量
2.4.1 总 RNA 的提取
2.4.2 RNA 质量的鉴定
2.4.3 引物设计及 qRT-PCR 扩增
3 结果及分析
3.1 生后发育过程中血清中 E2和 P 的分泌变化
3.2 生后发育过程中子宫的形态学变化
3.3 生后发育过程中 ERα、ERβ和 PR 阳性细胞在子宫的分布规律
3.3.1 ERα阳性细胞在生后发育不同阶段子宫内的分布特点
3.3.2 ERβ阳性细胞在生后发育不同阶段子宫内的分布特点
3.3.3 PR 阳性细胞在生后发育不同阶段子宫内的分布特点
3.4 qRT-PCR 试验结果
3.4.1 溶解曲线分析结果
3.4.2 总 RNA 及 PCR 产物的检测结果
3.4.3 重组质粒的 PCR 检测结果
3.4.4 阳性克隆的测序
3.4.5 扩增曲线的分析结果
3.4.6 标准曲线产物的检测结果
3.4.7 标准曲线及其目的基因的的扩增效率
3.4.8 生后发育过程中子宫内 ERα mRNA 变化规律
3.4.9 生后发育过程中子宫内 ERβ mRNA 变化规律
3.4.10 生后发育过程中子宫内 PR mRNA 变化规律
4 讨论
4.1 生后发育过程中血清中 E2和 P 的分泌规律
4.2 生后发育时期济宁青山羊子宫内 ERα、ERβ和 PR 的分布特点及表达
4.2.1 生后发育时期济宁青山羊子宫内 ERα的分布特点及表达
4.2.2 生后发育时期济宁青山羊子宫内 ERβ的分布特点及表达
4.2.3 生后发育时期济宁青山羊子宫内 PR 的分布特点及表达
5 结论
6 参考文献
7 附图
致谢
攻读学位期间发表论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]雌激素受体α和孕激素受体在不同发情周期牦牛子宫中的表达变化[J]. 阿依木古丽,蔡勇,曹忻,龙玲,陈士恩,余四九,崔燕. 中国农业科学. 2011(11)
[2]人胎盘间充质干细胞雌、孕激素受体的表达[J]. 沙文琼,王自能,苏放明. 中国组织工程研究与临床康复. 2010(45)
[3]牦牛发情周期子宫组织结构的观察[J]. 段永霞,崔燕,余四九,杨波. 畜牧兽医学报. 2010(09)
[4]雌激素的非基因组途径在哺乳动物雌性生殖过程中的作用机制[J]. 梁晓欢,杨增明. 生物化学与生物物理进展. 2010(06)
[5]自然发情与诱导发情小鼠子宫内膜中雌激素受体α表达的比较[J]. 高雅,林自力,张鸿波,梁鸿斌,刘云海,郭勇,倪和民. 中国实验动物学报. 2010(02)
[6]神经肽Y-Y1受体基因（NPY-Y1R）多态性及其与山羊繁殖性能关系[J]. 储明星,冯涛,赵有璋,张英杰,方丽,狄冉. 农业生物技术学报. 2009(06)
[7]八点黑獭兔不同发育时期子宫组织结构变化的研究[J]. 位兰,卢佳佳,薛帮群,罗来强. 中国养兔. 2009(09)
[8]济宁青山羊品种资源调查[J]. 蔡泉. 中国草食动物. 2008(06)
[9]不同时期小鼠血浆中孕激素的变化[J]. 朱河水,都军霞,刘涛,林茂旺. 安徽农业科学. 2008(14)
[10]实时荧光定量PCR技术的类型、特点与应用[J]. 袁亚男,刘文忠. 中国畜牧兽医. 2008(03)
硕士论文
[1]雌激素受体亚型在子宫内膜异位症在位内膜及小白鼠模型中的表达及意义[D]. 张翼海.中国医科大学 2009
本文编号：3414219
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