刚地弓形虫尿苷磷酸化酶基因的克
发布时间：2021-09-30 03:12
实验目的用生物信息学方法分析刚地弓形虫尿苷磷酸化酶（TgUPase）基因编码蛋白。对TgUPase基因进行克隆、表达，纯化重组TgUPase蛋白（rTgUPase）并分析其抗原性。观察不同剂量rTgUPase滴鼻免疫小鼠诱导的免疫应答，探讨rTgUPase免疫的适宜剂量。探讨rTgUPase作为刚地弓形虫疫苗候选抗原的可能性。实验方法第一部分：综述了不同生物来源的UPase蛋白的理化性质及研究进展。第二部分：对TgUPase基因编码蛋白进行生物信息的分析，预测其理化性质，二级结构以及潜在的抗原表位。第三部分：收集、纯化RH株刚地弓形虫速殖子，提取总RNA。根据TgUPase基因开放阅读框（GenBank: DQ385446.1）设计引物，引入EcoRI和XhoI酶切位点，RT-PCR扩增编码TgUPase的基因片段，扩增产物经双酶切后连接入原核质粒pET30a（+）中，重组质粒转化入大肠埃希菌（E.coli）DH5α，阳性菌落经PCR、双酶切和测序鉴定；将重组质粒pET30a（+）-TgUPase转化至E.coli BL21（DE3）加入IPTG诱导表达，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶...
【文章来源】：山西医科大学山西省
【文章页数】：101 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
TgUPase的二级结构、亲水性、柔韧性及表面可及性Fig.1Thesecondarystructure,hydrophilicity,flexibilityandsurfaceaccessibilityofTgUPase
图1. pET30a(+)图谱及插入位点示意图Fig 1. Map of pET30 and cloning site RT-PCR 引物的设计与合成根据刚地弓形虫 Uridine phosphorylase（TgUPase）基因全长编码序列的 阅 读 框 （ GenBank: DQ385446.1 ） 设 计 引 物 。 上 游 引 物G’GAATTC’ATGTCGGAACTCAAAGGAAG 共 29 个碱基，其中 GAA EcoRI 酶 切 位 点 ， CCG 为 该 酶 的 保 护 碱 基 ； 下 游 引 物GG’CTCGAG’TTACGCCGCAGGCTTGATG 共 29 碱基，其中 CTCGAGoI 酶切位点，CCGG 为该酶的保护碱基。
DL2000；1：阴性对照；2：基因 TgUPase 的图 1.TgUPase 基因的 RT-PCR 结果 amplification of UPase gene from Toxoplasma gR（图 2A）和 EcoRI、XhoI 双酶切见 1000 bp 左右有一条清晰条带，质粒测序后结果与已发表的基因→T，但 AAT 和 AAC 编码的均为2345M
【参考文献】：
期刊论文
[1]重组弓形虫热休克蛋白70不同途径免疫小鼠诱导的小肠黏膜IgA抗体分泌细胞及sIgA抗体的动态变化[J]. 殷丽天,申金雁,孟晓丽,王海龙,刘红丽,殷国荣. 中国生物制品学杂志. 2013(02)
[2]乳腺癌相关基因环氧化酶2（COX-2）编码蛋白的主要特性与抗原表位生物信息学分析[J]. 葛晓丽,王芬,殷国荣. 现代肿瘤医学. 2012(09)
[3]抗原表位鉴定方法的研究进展[J]. 文雪霞,陈化兰,熊永忠,王秀荣. 中国畜牧兽医. 2012(07)
[4]刚地弓形虫磷酸甘油酸变位酶2基因片段克隆、表达及抗原性分析[J]. 殷丽天,王芬,孟晓丽,王海龙,刘红丽,申金雁,殷国荣. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2012(02)
[5]刚地弓形虫棒状体蛋白17基因的克隆、表达及抗原性分析（英文）[J]. 王海龙,殷丽天,孟晓丽,申金雁,刘红丽,殷国荣. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2012(01)
[6]苹果过敏原Mal d 4蛋白抗原表位预测及交叉反应分析[J]. 夏宏林,何颖,邹泽红,陶爱林. 中国免疫学杂志. 2012(01)
[7]弓形虫复合疫苗滴鼻免疫小鼠诱导肠淋巴细胞变化[J]. 刘成芳,殷国荣,赵瑞君,孔丽. 中国公共卫生. 2012(01)
[8]刚地弓形虫热休克70基因编码蛋白结构与功能的生物信息学分析[J]. 殷丽天,曹蕾,孟晓丽,王海龙,刘红丽,殷国荣. 中国病原生物学杂志. 2011(07)
[9]重组弓形虫热休克蛋白70鼻内及皮下免疫小鼠诱导的免疫应答比较[J]. 殷丽天,曹蕾,王海龙,孟晓丽,张建红,殷国荣. 中国生物制品学杂志. 2011(06)
[10]弓形虫STAg联合IFN-γ佐剂滴鼻免疫小鼠诱导不同黏膜部位抗体水平动态观察[J]. 刘阳,殷丽天,孟晓丽,王海龙,刘红丽,殷国荣. 中国病原生物学杂志. 2011(02)
硕士论文
[1]刚地弓形虫肌动蛋白基因的克隆、表达及重组蛋白的保护性免疫[D]. 郝海霞.山西医科大学 2012
[2]刚地弓形虫磷酸甘油酸变位酶2基因的生物信息学分析、克隆表达及免疫保护性研究[D]. 王芬.山西医科大学 2011
[3]刚地弓形虫peroxiredoxin基因的克隆、表达、纯化及免疫保护性研究[D]. 刘转转.山西医科大学 2009
本文编号：3415010
【文章来源】：山西医科大学山西省
【文章页数】：101 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
TgUPase的二级结构、亲水性、柔韧性及表面可及性Fig.1Thesecondarystructure,hydrophilicity,flexibilityandsurfaceaccessibilityofTgUPase
图1. pET30a(+)图谱及插入位点示意图Fig 1. Map of pET30 and cloning site RT-PCR 引物的设计与合成根据刚地弓形虫 Uridine phosphorylase（TgUPase）基因全长编码序列的 阅 读 框 （ GenBank: DQ385446.1 ） 设 计 引 物 。 上 游 引 物G’GAATTC’ATGTCGGAACTCAAAGGAAG 共 29 个碱基，其中 GAA EcoRI 酶 切 位 点 ， CCG 为 该 酶 的 保 护 碱 基 ； 下 游 引 物GG’CTCGAG’TTACGCCGCAGGCTTGATG 共 29 碱基，其中 CTCGAGoI 酶切位点，CCGG 为该酶的保护碱基。
DL2000；1：阴性对照；2：基因 TgUPase 的图 1.TgUPase 基因的 RT-PCR 结果 amplification of UPase gene from Toxoplasma gR（图 2A）和 EcoRI、XhoI 双酶切见 1000 bp 左右有一条清晰条带，质粒测序后结果与已发表的基因→T，但 AAT 和 AAC 编码的均为2345M
【参考文献】：
期刊论文
[1]重组弓形虫热休克蛋白70不同途径免疫小鼠诱导的小肠黏膜IgA抗体分泌细胞及sIgA抗体的动态变化[J]. 殷丽天,申金雁,孟晓丽,王海龙,刘红丽,殷国荣. 中国生物制品学杂志. 2013(02)
[2]乳腺癌相关基因环氧化酶2（COX-2）编码蛋白的主要特性与抗原表位生物信息学分析[J]. 葛晓丽,王芬,殷国荣. 现代肿瘤医学. 2012(09)
[3]抗原表位鉴定方法的研究进展[J]. 文雪霞,陈化兰,熊永忠,王秀荣. 中国畜牧兽医. 2012(07)
[4]刚地弓形虫磷酸甘油酸变位酶2基因片段克隆、表达及抗原性分析[J]. 殷丽天,王芬,孟晓丽,王海龙,刘红丽,申金雁,殷国荣. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2012(02)
[5]刚地弓形虫棒状体蛋白17基因的克隆、表达及抗原性分析（英文）[J]. 王海龙,殷丽天,孟晓丽,申金雁,刘红丽,殷国荣. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2012(01)
[6]苹果过敏原Mal d 4蛋白抗原表位预测及交叉反应分析[J]. 夏宏林,何颖,邹泽红,陶爱林. 中国免疫学杂志. 2012(01)
[7]弓形虫复合疫苗滴鼻免疫小鼠诱导肠淋巴细胞变化[J]. 刘成芳,殷国荣,赵瑞君,孔丽. 中国公共卫生. 2012(01)
[8]刚地弓形虫热休克70基因编码蛋白结构与功能的生物信息学分析[J]. 殷丽天,曹蕾,孟晓丽,王海龙,刘红丽,殷国荣. 中国病原生物学杂志. 2011(07)
[9]重组弓形虫热休克蛋白70鼻内及皮下免疫小鼠诱导的免疫应答比较[J]. 殷丽天,曹蕾,王海龙,孟晓丽,张建红,殷国荣. 中国生物制品学杂志. 2011(06)
[10]弓形虫STAg联合IFN-γ佐剂滴鼻免疫小鼠诱导不同黏膜部位抗体水平动态观察[J]. 刘阳,殷丽天,孟晓丽,王海龙,刘红丽,殷国荣. 中国病原生物学杂志. 2011(02)
硕士论文
[1]刚地弓形虫肌动蛋白基因的克隆、表达及重组蛋白的保护性免疫[D]. 郝海霞.山西医科大学 2012
[2]刚地弓形虫磷酸甘油酸变位酶2基因的生物信息学分析、克隆表达及免疫保护性研究[D]. 王芬.山西医科大学 2011
[3]刚地弓形虫peroxiredoxin基因的克隆、表达、纯化及免疫保护性研究[D]. 刘转转.山西医科大学 2009
本文编号：3415010
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