鸡源鲍氏志贺菌O-抗原基因进化分析和O-抗原的提纯及毒性研究
发布时间：2021-09-30 11:29
鸡志贺菌病例于2004年由许兰菊、王川庆等人首次报道，志贺菌感染雏鸡主要表现为脓血痢，能够引起雏鸡死亡。研究显示志贺菌具有人禽互传的可能。O-抗原作为细菌的主要表面抗原，在细菌进化成病原菌的过程中起重要作用，又由于O-抗原具有丰富的多样性导致其O-抗原基因簇的保守性很低，因此在DNA水平上研究分子进化关系，尤其在大肠杆菌和志贺菌遗传进化关系方面，O-抗原基因簇成为最好的研究材料。本研究对鸡鲍氏志贺菌O-抗原基因簇进行破译，旨在从DNA水平上对鸡源志贺菌的起源和进化地位进行分析。获得提纯O-抗原多糖的方法及初步研究其毒性作用，旨在为从细菌内毒素方面研究鸡鲍氏志贺菌的致病作用奠定基础。具体研究如下：测定鸡源鲍氏志贺菌O-抗原基因簇序列，进行遗传进化分析，并对其基因功能预测。采用长程PCR方法扩增O-抗原基因簇，设计6对相互嵌合引物，克隆测序，拼接后获得全基因序列，用生物信息学方法完成基因注释并预测其功能，对galF和gnd基因进行遗传演化分析。结果显示鸡源鲍氏志贺菌O-抗原基因簇序列全长为12742bp，其与人源鲍氏3型志贺菌和大肠杆菌O167的同源性最高，其核苷酸同源性分别为99.9%和...
【文章来源】：河南农业大学河南省
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
细菌脂多糖的化学结构示意图
原基因簇的全基因序列测定原基因簇 DNA 用 Sal Ⅰ、Hind Ⅲ 、Pst Ⅰ、EcoR Ⅰ等限制性内切酶消化，经 0.8%凝胶电泳显示如图 3。根据酶切结果选用 EcoR Ⅰ这组酶切产物，连接到 pUC19 载到一个目的片段为 1728 bp 的重组质粒，测序后与 GenBank 已公布的志贺菌 O-抗全基因序列进行比对发现，鸡源志贺菌 O-抗原基因簇的部分序列与人源鲍氏 3 型源最高，达到 99%。因而根据 GenBank 公布的人源 3 型鲍氏志贺菌 O-抗原基因簇序列设计了 6 对相互嵌合引物，分别克隆入 T 载体中测序，最后相互拼接得到鸡贺菌 O-抗原基因簇全基因序列，序列全长 12742 bp，已公布到 GenBank 上，登录927149。用 Primer Premier 5 分析发现其 EcoR Ⅰ酶切位点有 4 个，分别位于 3172 bp、8436 bp 及 10150 bp，EcoRⅠ酶切共产生 5 段酶切片段，为别为 5094 bp、3172 bp、1714 bp 及 170 bp，与酶切电泳结果显示一致。原基因簇全基因序列分析图 2 O-抗原基因簇的 PCR 产物Fig.2 The result of PCR product for O-antigeNote: M: DL15000, 1: PCR product, 2: Negativ图 1 细菌基因组产物Fig.1 The result of bacterial genomeL15000, 1: Bacterial genome, 2: Negative control
原基因簇的全基因序列测定原基因簇 DNA 用 Sal Ⅰ、Hind Ⅲ 、Pst Ⅰ、EcoR Ⅰ等限制性内切酶消化，经 0.8%凝胶电泳显示如图 3。根据酶切结果选用 EcoR Ⅰ这组酶切产物，连接到 pUC19 载到一个目的片段为 1728 bp 的重组质粒，测序后与 GenBank 已公布的志贺菌 O-抗全基因序列进行比对发现，鸡源志贺菌 O-抗原基因簇的部分序列与人源鲍氏 3 型源最高，达到 99%。因而根据 GenBank 公布的人源 3 型鲍氏志贺菌 O-抗原基因簇序列设计了 6 对相互嵌合引物，分别克隆入 T 载体中测序，最后相互拼接得到鸡贺菌 O-抗原基因簇全基因序列，序列全长 12742 bp，已公布到 GenBank 上，登录927149。用 Primer Premier 5 分析发现其 EcoR Ⅰ酶切位点有 4 个，分别位于 3172 bp、8436 bp 及 10150 bp，EcoRⅠ酶切共产生 5 段酶切片段，为别为 5094 bp、3172 bp、1714 bp 及 170 bp，与酶切电泳结果显示一致。原基因簇全基因序列分析图 2 O-抗原基因簇的 PCR 产物Fig.2 The result of PCR product for O-antigeNote: M: DL15000, 1: PCR product, 2: Negativ图 1 细菌基因组产物Fig.1 The result of bacterial genomeL15000, 1: Bacterial genome, 2: Negative control
【参考文献】：
期刊论文
[1]阴外动脉注射脂多糖对奶牛临床症状及白细胞的影响[J]. 胡涛,王加启,张养东,卜登攀,赵国琦,孙鹏. 中国畜牧兽医. 2011(06)
[2]鸡鲍氏志贺氏菌脂多糖的提取方法研究[J]. 潘国民,许兰菊,蒋媛媛,李炜,邓九虎,白毅洁,李欣. 河南农业科学. 2010(06)
[3]细菌脂多糖的生物活性及作用机制[J]. 刘中原,李延平. 医学综述. 2010(02)
[4]细菌类脂A结构与功能研究进展[J]. 李颜颜,史锋,李烨,王小元. 微生物学报. 2008(06)
[5]幼犬志贺氏菌感染的微生物学诊断[J]. 高凤山,胡桂学. 安徽农学通报. 2007(03)
[6]改良热酚水法制备大肠杆菌O157:H7脂多糖抗原的研究[J]. 宋宏新,刘晓阳,李宏. 食品科学. 2006(10)
[7]实验猴志贺氏菌检出、血清分型及药物敏感性试验[J]. 盘宝进,汪文龙,谢永平,韦梅良,罗兆飞,陈立标. 广西农业科学. 2006(03)
[8]黑猩猩志贺氏杆菌肠炎的诊治[J]. 叶永孟,郭建华,胡泽民,黄泽波. 中国兽医杂志. 2006(05)
[9]鸡志贺氏菌感染的血清流行病学调查[J]. 许兰菊,王川庆,马水锋,薛双,赵原亮. 中国兽医学报. 2005(06)
[10]肠侵袭性大肠埃希菌O抗原多糖的致病作用[J]. 钟启平,陈恩临,徐建设,董亚利. 中华传染病杂志. 2005(02)
博士论文
[1]细菌多糖和糖蛋白生物合成途径及相关酶类研究[D]. 李磊.山东大学 2010
[2]利用分子遗传标记技术对鸡鲍氏志贺菌的鉴定和菌株起源研究[D]. 杨霞.河南农业大学 2007
[3]志贺氏菌和大肠杆菌O抗原基因簇的遗传进化及重要O抗原结构的研究[D]. 杨静华.南开大学 2004
硕士论文
[1]人源福氏志贺菌对鸡肠上皮细胞侵袭特性及其机制研究[D]. 师润.河南农业大学 2013
[2]人志贺菌对雏鸡的致病性及人、鸡志贺菌某些重要基因的比较研究[D]. 刘红英.河南农业大学 2008
本文编号：3415771
【文章来源】：河南农业大学河南省
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
细菌脂多糖的化学结构示意图
原基因簇的全基因序列测定原基因簇 DNA 用 Sal Ⅰ、Hind Ⅲ 、Pst Ⅰ、EcoR Ⅰ等限制性内切酶消化，经 0.8%凝胶电泳显示如图 3。根据酶切结果选用 EcoR Ⅰ这组酶切产物，连接到 pUC19 载到一个目的片段为 1728 bp 的重组质粒，测序后与 GenBank 已公布的志贺菌 O-抗全基因序列进行比对发现，鸡源志贺菌 O-抗原基因簇的部分序列与人源鲍氏 3 型源最高，达到 99%。因而根据 GenBank 公布的人源 3 型鲍氏志贺菌 O-抗原基因簇序列设计了 6 对相互嵌合引物，分别克隆入 T 载体中测序，最后相互拼接得到鸡贺菌 O-抗原基因簇全基因序列，序列全长 12742 bp，已公布到 GenBank 上，登录927149。用 Primer Premier 5 分析发现其 EcoR Ⅰ酶切位点有 4 个，分别位于 3172 bp、8436 bp 及 10150 bp，EcoRⅠ酶切共产生 5 段酶切片段，为别为 5094 bp、3172 bp、1714 bp 及 170 bp，与酶切电泳结果显示一致。原基因簇全基因序列分析图 2 O-抗原基因簇的 PCR 产物Fig.2 The result of PCR product for O-antigeNote: M: DL15000, 1: PCR product, 2: Negativ图 1 细菌基因组产物Fig.1 The result of bacterial genomeL15000, 1: Bacterial genome, 2: Negative control
原基因簇的全基因序列测定原基因簇 DNA 用 Sal Ⅰ、Hind Ⅲ 、Pst Ⅰ、EcoR Ⅰ等限制性内切酶消化，经 0.8%凝胶电泳显示如图 3。根据酶切结果选用 EcoR Ⅰ这组酶切产物，连接到 pUC19 载到一个目的片段为 1728 bp 的重组质粒，测序后与 GenBank 已公布的志贺菌 O-抗全基因序列进行比对发现，鸡源志贺菌 O-抗原基因簇的部分序列与人源鲍氏 3 型源最高，达到 99%。因而根据 GenBank 公布的人源 3 型鲍氏志贺菌 O-抗原基因簇序列设计了 6 对相互嵌合引物，分别克隆入 T 载体中测序，最后相互拼接得到鸡贺菌 O-抗原基因簇全基因序列，序列全长 12742 bp，已公布到 GenBank 上，登录927149。用 Primer Premier 5 分析发现其 EcoR Ⅰ酶切位点有 4 个，分别位于 3172 bp、8436 bp 及 10150 bp，EcoRⅠ酶切共产生 5 段酶切片段，为别为 5094 bp、3172 bp、1714 bp 及 170 bp，与酶切电泳结果显示一致。原基因簇全基因序列分析图 2 O-抗原基因簇的 PCR 产物Fig.2 The result of PCR product for O-antigeNote: M: DL15000, 1: PCR product, 2: Negativ图 1 细菌基因组产物Fig.1 The result of bacterial genomeL15000, 1: Bacterial genome, 2: Negative control
【参考文献】：
期刊论文
[1]阴外动脉注射脂多糖对奶牛临床症状及白细胞的影响[J]. 胡涛,王加启,张养东,卜登攀,赵国琦,孙鹏. 中国畜牧兽医. 2011(06)
[2]鸡鲍氏志贺氏菌脂多糖的提取方法研究[J]. 潘国民,许兰菊,蒋媛媛,李炜,邓九虎,白毅洁,李欣. 河南农业科学. 2010(06)
[3]细菌脂多糖的生物活性及作用机制[J]. 刘中原,李延平. 医学综述. 2010(02)
[4]细菌类脂A结构与功能研究进展[J]. 李颜颜,史锋,李烨,王小元. 微生物学报. 2008(06)
[5]幼犬志贺氏菌感染的微生物学诊断[J]. 高凤山,胡桂学. 安徽农学通报. 2007(03)
[6]改良热酚水法制备大肠杆菌O157:H7脂多糖抗原的研究[J]. 宋宏新,刘晓阳,李宏. 食品科学. 2006(10)
[7]实验猴志贺氏菌检出、血清分型及药物敏感性试验[J]. 盘宝进,汪文龙,谢永平,韦梅良,罗兆飞,陈立标. 广西农业科学. 2006(03)
[8]黑猩猩志贺氏杆菌肠炎的诊治[J]. 叶永孟,郭建华,胡泽民,黄泽波. 中国兽医杂志. 2006(05)
[9]鸡志贺氏菌感染的血清流行病学调查[J]. 许兰菊,王川庆,马水锋,薛双,赵原亮. 中国兽医学报. 2005(06)
[10]肠侵袭性大肠埃希菌O抗原多糖的致病作用[J]. 钟启平,陈恩临,徐建设,董亚利. 中华传染病杂志. 2005(02)
博士论文
[1]细菌多糖和糖蛋白生物合成途径及相关酶类研究[D]. 李磊.山东大学 2010
[2]利用分子遗传标记技术对鸡鲍氏志贺菌的鉴定和菌株起源研究[D]. 杨霞.河南农业大学 2007
[3]志贺氏菌和大肠杆菌O抗原基因簇的遗传进化及重要O抗原结构的研究[D]. 杨静华.南开大学 2004
硕士论文
[1]人源福氏志贺菌对鸡肠上皮细胞侵袭特性及其机制研究[D]. 师润.河南农业大学 2013
[2]人志贺菌对雏鸡的致病性及人、鸡志贺菌某些重要基因的比较研究[D]. 刘红英.河南农业大学 2008
本文编号：3415771
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