PCV2诱导体外培养PAMs分泌IL-1β、IL-6和IL-10信号途径的研究

发布时间：2021-10-04 21:45

　　猪圆环病毒病（PCVD）正严重危害世界养猪业,其主要病原是猪圆环病毒2型（PCV2）。PCV2引起仔猪免疫抑制是众多细胞因子分泌紊乱的结果。猪肺泡巨噬细胞（PAMs）是重要的免疫细胞,也是PCV2的主要靶细胞。了解PCV2引起PAMs分泌细胞因子的变化及其调控途径可为阐明PCV2致病机制奠定基础。试验选取了20头PCV2和猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）抗原抗体均为阴性的30日龄断奶仔猪,无菌分离肺泡巨噬细胞（PAMs）,分为四组进行体外培养：对照组,MyD88干扰组（干扰组）,PCV2感染组（PCV2组）,MyD88干扰-PCV2感染组（干扰-PCV2组）。用小干扰RNA（siRNA）方法干扰MyD88基因的表达,并分别于PCV2作用后0 h、6 h、12 h、24 h和48 h收集细胞及培养上清液。荧光定量PCR法检测干扰效率；ELISA方法检测培养上清液中IL-1β、IL-6和IL-10的动态变化;间接免疫荧光（IFA）的方法检测NF-κB/P65蛋白核易位的情况；western blot和法检测胞核中NF-κB蛋白以及细胞浆内MyD88、p-IκB和NF-κB/P65蛋白的... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
部分缩写的中英文对照
第一篇 文献综述
    引言
    第一章 PCV2与MYD88-NF-KB信号通路
        1 PCV2研究进展
            1.1 PCV2的发现
            1.2 PCV2的病原特点
            1.3 PMWS
            1.4 PCV2对巨噬细胞的影响
        2 MYD88-NF-KB信号通路
            2.1 MyD88研究进展
            2.2 MyD88和TLRs信号途径
            2.3 NF-κB研究进展
            2.4 巨噬细胞相关细胞因子
        3 研究目的与意义
第二篇 试验研究
    第二章 PCV2诱导体外培养PAMS分泌IL-1B、IL-6和IL-10信号途径的研究
        1 材料与方法
            1.1 病毒
            1.2 主要仪器和试剂
            1.3 试验动物
            1.4 试验设计
            1.5 小干扰RNA方法沉默MYD88基因
            1.6 间接免疫荧光法检测P65蛋白入核情况
            1.7 Western-blot法检测胞浆中NF-κB/p65、p-IκBα、MyD88和胞核中NF-κB/p65蛋白的表达
            1.8 EMSA检测NF-κB与DNA的结合率
            1.9 ELSA检测IL-1β、IL-6和IL-10
            1.10 数据处理和分析
        2 结果
            2.1 PCV2诱导体外培养PAMs生成IL-1β
            2.2 PCV2引起体外培养PAMs分泌IL-6增加
            2.3 PCV2促进体外培养PAMs分泌IL-10
            2.4 NF-κB/P65蛋白入核情况
            2.5 siRNA使MyD88基因沉默
            2.6 PCV2感染PAMs后引起MyD88蛋白表达量升高
            2.7 PCV2感染PAMs后引起胞浆中NF-κB/P65蛋白表达量降低
            2.8 PCV2感染PAMs后引起胞核中NF-κB/P65蛋白表达量升高
            2.9 PCV2感染PAMs后引起胞浆中p-IκB蛋白表达量升高
            2.10 PCV2对感染PAMs细胞核中NF-κB与DNA结合活性的影响
        3 讨论
参考文献
全文总结
硕士期间发表论文
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]猪圆环病毒2型对体外培养仔猪淋巴细胞NF-κB信号的动态影响[J]. 吕春子,代蕾,郭华,张书霞.  畜牧兽医学报. 2013(05)
[2]PCV2感染对仔猪肝脏MyD88-NF-κB信号途径的影响[J]. 张秀娟,孙运,郭华,张书霞.  南京农业大学学报. 2013(01)
[3]猪圆环病毒2型、猪巨细胞病毒和TTV-2混合感染的流行病学调查[J]. 刘捷,陆琪,王先炜,李玉峰,王晓晔,姜平.  中国兽医学报. 2011(08)
[4]MyD88siRNA诱导猪调节性树突状细胞的实验研究[J]. 周谦君,范慧敏,刘中民.  中国细胞生物学学报. 2010(03)
[5]巨噬细胞介导PCV2诱导体外培养仔猪淋巴细胞凋亡的研究[J]. 华利忠,陈耿,张书霞.  南京农业大学学报. 2010(03)
[6]PCV-2感染仔猪淋巴结中的病毒定位与细胞凋亡[J]. 施旅娟,韩惠利,张书霞.  中国农业科学. 2008(01)
[7]PRRSV与PCV2体外共感染对猪肺泡巨噬细胞免疫学功能的影响[J]. 冯志新,姜平,王先炜,李玉峰.  中国预防兽医学报. 2007(12)
[8]断奶仔猪多系统衰竭综合症的病理组织学观察[J]. 韦英益,黄伟坚,尹业师,黄广顺,覃继顺.  广西农业生物科学. 2007(S1)
[9]NF-kB与细胞凋亡[J]. 苏剑东,吴灵飞.  世界华人消化杂志. 2007(12)
[10]转录因子NF-κB的研究现状及其应用前景[J]. 史艳晖,卢圣栋.  中国生物工程杂志. 2007(04)



本文编号：3418387