捻转血矛线虫蛋白酶体β5亚基编码基因的结构与功能研究

发布时间：2021-10-07 03:20

　　反刍动物消化道寄生虫病一直是限制畜牧经济动物产能的重要因素。捻转血矛线虫（Haemonchus contortus）是一种重要的反刍动物消化道寄生线虫,呈世界性分布,主要寄生于牛羊皱胃及小肠,造成宿主贫血及营养不良,严重时可导致宿主死亡。由于缺乏可用的疫苗,控制该病主要使用抗蠕虫药,但是抗蠕虫药无节制的使用已造成世界范围的广泛性的抗药性的产生。因此,急需寻找新的控制该病的方法。而在分子水平上了解H. contortus生长发育和繁殖的调节机制可以为开发新的药物和候选疫苗找到有潜力的候选靶分子。蛋白酶体是一种高度保守的多亚基酶复合物,广泛存在于真核细胞体内,能参与多种细胞的功能,包括调节细胞周期,调节细胞凋亡,增加抗原的递呈等。在寄生虫中,蛋白酶体不仅能参与胞内寄生虫的生长发育调节,同时也参与调控寄生虫入侵宿主,对宿主造成损伤,并可诱导宿主产生对其的免疫应答。对蛋白酶体的研究也不断取得新的成果,在疟原虫、阿米巴原虫、利什曼原虫、弓形虫、血吸虫等寄生虫中先后报道蛋白酶体功能机制,但有关蛋白酶体在寄生线虫中的作用依然鲜有报道。寄生线虫有效体外培养手段的缺失阻碍了对研究其基因功能的技术平台的建... 

【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略语表
1 文献综述
    1.1 血矛线虫病(Haemonchosis)
        1.1.1 捻转血矛线虫形态
        1.1.2 捻转血矛线虫生活史
        1.1.3 捻转血矛线虫病致病作用和临床症状
        1.1.4 捻转血矛线虫病的预防和治疗
    1.2 蛋白酶体(Proteasome)
        1.2.1 泛素-蛋白酶体途径
        1.2.2 蛋白酶体的结构
        1.2.3 蛋白酶体的功能
        1.2.4 寄生虫蛋白酶体的研究进展
        1.2.5 蛋白酶体β5亚基
    1.3 秀丽隐杆线虫及其应用
    1.4 RNAi和转基因技术在动物寄生线虫基因功能研究中的应用
        1.4.1 RNAi的机制
        1.4.2 RNAi在动物寄生线虫中的研究
        1.4.3 RNAi在动物寄生线虫中的应用
        1.4.4 转基因技术动物寄生线虫中的应用
2 目的意义
3 材料与方法
    3.1 主要仪器与试剂
        3.1.1 主要仪器
        3.1.2 实验生物与质粒
        3.1.3 主要试剂
        3.1.4 主要溶液的配制
    3.2 试验方法
        3.2.1 捻转血矛线虫各发育阶段虫体的收集
        3.2.2 捻转血矛线虫基因组DNA的提取
        3.2.3 捻转血矛线虫RNA的提取
        3.2.4 PCR产物的电泳检测与回收
        3.2.5 目的片段的连接
        3.2.6 连接产物的转化
        3.2.7 质粒DNA的小量制备与鉴定
        3.2.8 质粒的构建
        3.2.9 Hc-pbs-5基因cDNA的获得
        3.2.10 Hc-pbs-5基因全长gDNA的获得
        3.2.11 Hc-pbs-5 dsRNA原核表达载体的构建
        3.2.12 Hc-pbs-5种间RNAi
        3.2.13 Hc-pbs-5基因启动子序列的获得
        3.2.14 基因启动子定位质粒的构建
        3.2.15 显微注射
        3.2.16 捻转血矛线虫各发育阶段转录水平分析
        3.2.17 Hc-pbs-5基因主要生物信息学分析
4 结果与分析
    4.1 Hc-pbs-5基因cDNA核苷酸序列分析
    4.2 Hc-PBS-5氨基酸序列分析
    4.3 系统进化分析
    4.4 Hc-pbs-5基因全长gDNA序列分析
    4.5 Hc-pbs-5基因各个阶段转录水平分析
    4.6 异源RNA干扰评价Hc-pbs-5基因功能
    4.7 Hc-pbs-5基因启动子预测
    4.8 Hc-pbs-5基因启动子定位研究
5 讨论
    5.1 线虫基因的生物信息学分析
    5.2 Hc-PBS-5蛋白保守结构域
    5.3 Hc-pbs-5转录水平分析
    5.4 异源RNA干扰
    5.5 寄生线虫的反式剪接
    5.6 寄生线虫异源转基因技术
6 结论
参考文献
附录
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]羊捻转血矛线虫的免疫机理及控制其感染的营养调控措施[J]. 钟荣珍,周道玮.  动物营养学报. 2013(09)
[2]寄生虫蛋白酶体的研究进展[J]. 陈佳,吴松明,朱兴全,黄思扬.  畜牧兽医学报. 2012(01)
[3]泛素-蛋白酶体途径的组成及其生物功能[J]. 董合玲,徐晓阳.  南京体育学院学报(自然科学版). 2011(03)
[4]寄生线虫RNA干扰研究进展[J]. 贺现辉,朱兴全,徐民俊.  中国畜牧兽医. 2011(03)
[5]秀丽隐杆线虫研究综述[J]. 赵晴,蒋湉湉.  安徽农业科学. 2010(19)
[6]羊捻转血矛线虫病[J]. 孙莉,李明,卢方琦,卢玮震.  畜牧兽医科技信息. 2009(05)
[7]寄生线虫功能基因组学的研究进展[J]. 黄翠琴,陈宁,朱兴全.  寄生虫与医学昆虫学报. 2007(02)
[8]泛素-蛋白酶体途径的组成和功能[J]. 倪晓光,赵平.  生理科学进展. 2006(03)
[9]牛羊捻转血矛线虫发育史和季节动态研究[J]. 陈清泉,林秀敏.  厦门大学学报(自然科学版). 1982(04)

博士论文
[1]利用秀丽隐杆线虫表达捻转血矛线虫H11蛋白的转基因研究[D]. 周前进.浙江大学 2010

硕士论文
[1]捻转血矛线虫过氧化物酶基因的克隆和5种蛋白的抗原特性分析[D]. 牛延萍.南京农业大学 2012



本文编号：3421264