VEGF/VEGFR在洛克沙胂促内皮细胞生长中的调节作用
发布时间：2021-10-07 01:15
洛克沙胂（Rox）是在世界范围内广泛使用的一种含砷饲料添加剂,对促进养殖业的发展起了很大作用。Rox促进动物生长的机制至今并不完全清楚,可能与增强细胞生长、免疫及能量代谢相关基因的表达有关,也可能与促进血管生长、增加血管通透性有关。目前国内外对这方面的研究甚少。本实验室在体内体外对Rox促血管作用进行了相关研究,在此基础上,本文通过阻断VEGF及其受体KDR/FLT-1,经MTT法、细胞免疫荧光、Elisa法、Western blot、实时荧光定量PCR,研究Rox促内皮细胞生长作用中VEGF/VEGFR的作用,增加对Rox促血管生成作用VEGF机制的认识,为Rox作为畜禽饲料添加剂使用的安全性评价,以及为有机胂残留潜在的促（致）癌风险评估提供理论依据。大鼠内皮细胞经不同处理12、24、36、48h后,MTT法检测细胞活力；Elisa法测定细胞培养液中的VEGF水平；细胞免疫荧光、Western blot及定量PCR检测细胞中VEGF、 VEGFR （KDR/FLT-1）的表达。不同处理剂量组共11组,分别为PBS阴性对照组（阴）、10ng/mL VEGF阳性对照组（阳）、Rox0.1...
【文章来源】：扬州大学江苏省
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
VEGF基因及不同的转录体(引自httpa/www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15602010)
VEGFR-2 (KDR)EGFR-2位于染色体4ql2，全长编码1356个氨基酸，胞外区含766个氨基酸，胞内565个氨基酸，由激酶功能区、68个氨基酸组成的酷氨酸激酶插入区及C端组成。跨25个氨基酸[22]，总分子量230 kD。在VEGF诱导的促有丝分裂，血管新生和血管的作用中，VEGFR-2是最重要的受体。VEGFR-2蛋白激酶的核心区存在两裂片样结构，而蛋白激酶的活性巾心又刚好位于这两个裂片之间，由这两个裂片的残基共[23]。现在己经发现的VEGFR-2的磷酸化位点有第951、1054、1059、1175位酷氨EGFR-2在脾、肾、心、肺组织中表达水平较高，主要分布在血管和淋巴内皮细胞中。胞促有丝分裂原VEGF-A与VEGFR-2结合，将细胞外信号传入细胞内激活信号转，刺激内皮细胞增殖、增加血管通透性、促进血管新生。前巳经证实了 VEGFR-2的激活负调节与Src丨nl源的SHP1及SHP2的酪氨酸激酶脱[24二5]。通过蛋白酶体途径的快速降解以及受体的内陷与溶酶体内降解，导致受体酷酶的激活过程下调。所以VEGFR-2快速内吞及失活对VEGF梯度的精确及局部反
扬州大学硕士学位论文 ^VEGFR-2信号传递主要是通过PLCy-PKC-Raf-MEK-MAPK信号通路，Tyr 1175自身憐酸化产生VEGFR相关的结合位点与血清肌酸激酶（Sck)、PLCyl结合的位点与PLCyl结合激活蛋白激酶C，从而激活Ras。而活化的PLCy,能水解4，5- 二磷酸憐脂酰肌醇（PIP2)生成二酷甘油（DAG)和1,4,5-三憐酸肌醇（IP3)。1P3可增加细胞内Ca2+的浓度，而DAG是PKC的生理激活剂。通过诱导细胞外调节激酶Erk途径(p42/44胞外信号调节激酶MAPK)的激活。ERK能转移到细胞核，在细胞核内磷酸化和活化转录因子（包括c-Jun和三元复合因子）从而诱导c-fos基因的转录VEGFR-2还可激活憐脂酷肌醇（PI3K),导致脂质磷脂醜肌醇（3，4,5)-P3的增加，从而激活蛋白激酶B (AKT/PKB),内皮型一氧化氮合酶(eNOs),小GTP结合蛋白Rac。Akt/PKB抑制Bcl-2相关的凋亡启动子和caspase-9两种凋亡蛋白，从而保证细胞的存活[35]。内皮型一氧化氮合酶生成的一氧化氮，增加血管通透性和细胞迁移，是通过Rac进一步促进的[36_37]。VEGF诱导的细胞骨架重塑、细胞迁移是通过VEGFR-2与P38MAPK、HSP27激酶结合来实现的[38]。VEGFR2
【参考文献】：
硕士论文
[1]洛克沙胂促血管生成作用及VEGF的表达研究[D]. 崔卫波.扬州大学 2013
[2]内皮细胞的分离培养及洛克沙胂对内皮细胞影响的初步研究[D]. 刘学.扬州大学 2013
本文编号：3421093
【文章来源】：扬州大学江苏省
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
VEGF基因及不同的转录体(引自httpa/www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15602010)
VEGFR-2 (KDR)EGFR-2位于染色体4ql2，全长编码1356个氨基酸，胞外区含766个氨基酸，胞内565个氨基酸，由激酶功能区、68个氨基酸组成的酷氨酸激酶插入区及C端组成。跨25个氨基酸[22]，总分子量230 kD。在VEGF诱导的促有丝分裂，血管新生和血管的作用中，VEGFR-2是最重要的受体。VEGFR-2蛋白激酶的核心区存在两裂片样结构，而蛋白激酶的活性巾心又刚好位于这两个裂片之间，由这两个裂片的残基共[23]。现在己经发现的VEGFR-2的磷酸化位点有第951、1054、1059、1175位酷氨EGFR-2在脾、肾、心、肺组织中表达水平较高，主要分布在血管和淋巴内皮细胞中。胞促有丝分裂原VEGF-A与VEGFR-2结合，将细胞外信号传入细胞内激活信号转，刺激内皮细胞增殖、增加血管通透性、促进血管新生。前巳经证实了 VEGFR-2的激活负调节与Src丨nl源的SHP1及SHP2的酪氨酸激酶脱[24二5]。通过蛋白酶体途径的快速降解以及受体的内陷与溶酶体内降解，导致受体酷酶的激活过程下调。所以VEGFR-2快速内吞及失活对VEGF梯度的精确及局部反
扬州大学硕士学位论文 ^VEGFR-2信号传递主要是通过PLCy-PKC-Raf-MEK-MAPK信号通路，Tyr 1175自身憐酸化产生VEGFR相关的结合位点与血清肌酸激酶（Sck)、PLCyl结合的位点与PLCyl结合激活蛋白激酶C，从而激活Ras。而活化的PLCy,能水解4，5- 二磷酸憐脂酰肌醇（PIP2)生成二酷甘油（DAG)和1,4,5-三憐酸肌醇（IP3)。1P3可增加细胞内Ca2+的浓度，而DAG是PKC的生理激活剂。通过诱导细胞外调节激酶Erk途径(p42/44胞外信号调节激酶MAPK)的激活。ERK能转移到细胞核，在细胞核内磷酸化和活化转录因子（包括c-Jun和三元复合因子）从而诱导c-fos基因的转录VEGFR-2还可激活憐脂酷肌醇（PI3K),导致脂质磷脂醜肌醇（3，4,5)-P3的增加，从而激活蛋白激酶B (AKT/PKB),内皮型一氧化氮合酶(eNOs),小GTP结合蛋白Rac。Akt/PKB抑制Bcl-2相关的凋亡启动子和caspase-9两种凋亡蛋白，从而保证细胞的存活[35]。内皮型一氧化氮合酶生成的一氧化氮，增加血管通透性和细胞迁移，是通过Rac进一步促进的[36_37]。VEGF诱导的细胞骨架重塑、细胞迁移是通过VEGFR-2与P38MAPK、HSP27激酶结合来实现的[38]。VEGFR2
【参考文献】：
硕士论文
[1]洛克沙胂促血管生成作用及VEGF的表达研究[D]. 崔卫波.扬州大学 2013
[2]内皮细胞的分离培养及洛克沙胂对内皮细胞影响的初步研究[D]. 刘学.扬州大学 2013
本文编号：3421093
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