tPA和PAI-1在牛卵丘卵母细胞复合体体外成熟进程中的作用初探

发布时间：2021-10-07 09:43

　　为了解组织型纤溶酶原激活剂（tissue plasminogen activator, tPA）和纤溶酶原激活剂抑制剂1（plasminogen activator inhibitor, PAI-1）在牛卵丘-卵母细胞复合体（COCs）体外成熟进程中的可能作用；本研究首先运用了实时定量RT-PCR和ELISA技术检测了体外不同成熟时间（0h、8h、16h和24h）卵丘细胞中纤溶酶原（plasminogen）基因相对表达变化和tPA活性变化,然后通过添加不同浓度的tPA（0ng/ml.0.1ng/ml、1ng/ml、10ng/ml）、PAI-1（0ng/ml、0.1ng/ml、1ng/ml、10ng/ml）观察透明质酸合成酶2（Hyaluronan synthase2,HAS2）基因在体外成熟培养16h牛卵丘细胞中相对表达变化。最后以1ng/ml tPA与10ng/ml PAI做添加组合,在体外成熟培养16h后,统计牛卵丘细胞中HAS2基因相对表达,牛卵母细胞中GDF-9、BMP-15基因相对表达,以及牛COCS的扩散程度。结果如下,1.在COCs体外成熟过程中,牛卵丘细胞Plasmin... 

【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区

【文章页数】：35 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
目录
插图和附表清单
缩略语表
1 前言
    1.1 卵母细胞成熟概述
    1.2 卵丘细胞与卵母细胞
    1.3 卵丘细胞扩散
    1.4 HA与HAS2
    1.5 PA-系统概述
2 材料与方法
    2.1 仪器与试剂
    2.2 方法
        2.2.1 COCs的采集及体外成熟培养
        2.2.2 tPA活性检测
        2.2.3 RNA提取和反转录
        2.2.4 实时定量PCR
        2.2.5 卵丘扩散程度检测
        2.2.6 数据统计
3 结果与分析
    3.1 PCR产物特异性确定
    3.2 成熟过程中牛卵丘细胞Plasminogen基因表达及tPA活性
        3.2.1 成熟过程中卵丘细胞Plasminogen基因表达
        3.2.2 成熟过程中卵丘细胞tPA活性
    3.3 添加不同浓度tPA成熟培养16h卵丘细胞HAS2基因表达的影响
    3.4 添加不同浓度PAI-1成熟培养16h卵丘细胞HAS2基因表达的影响
    3.5 添加tPA与PAI-1组合成熟培养16h卵丘细胞HAS2基因表达的影响
    3.6 添加tPA与PAI-1组合成熟培养16h对卵丘细胞扩散的影响
    3.7 组合(tPA+PAI-1)对卵母细胞GDF-9和BMP-15基因表达的影响
4 讨论
    4.1 tPA和Plasminogen在不同体外成熟时间卵丘细胞中的表达
    4.2 tPA和PAI-1在COCs成熟过程中对卵丘细胞的作用
    4.3 tPA和PAI-1对卵丘扩散的影响
    4.4 tPA和PAI-1对卵母细胞表达GDF-9和BMP-15的影响
5 结论
致谢
参考文献
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]组织型纤溶酶原激活剂基因在牛卵丘-卵母复合体体外成熟进程中的表达[J]. 关洪敏,米焱,张伶俐,李海军,曹贵方.  中国畜牧兽医. 2012(08)
[2]BFF、rbGH对牛卵泡卵母细胞体外受精后发育的影响[J]. 徐照学,钱菊汾,兰亚莉,张趁心,辛晓玲,贺文杰.  中国兽医学报. 1996(06)
[3]大鼠颗粒细胞tPA和PAI-1表达的激素调控[J]. 刘以训,彭晓蓉,刘奎,T.Ny.  中国科学（B辑 化学 生命科学 地学）. 1993(07)
[4]颗粒细胞分泌一种刺激卵母细胞组织型纤蛋白溶酶原激活因子的物质[J]. 刘以训.  中国科学（B辑 化学 生命科学 地学）. 1989(10)
[5]屠宰绵羊卵巢卵母细胞的体外培养[J]. 旭日干,薛晓先,(?)洪武.  畜牧兽医学报. 1989(01)

硕士论文
[1]卵丘细胞对猪卵母细胞成熟及其发育能力的影响[D]. 郝元斌.南京农业大学 2010



本文编号：3421809