检测小鼠肝炎病毒和泰泽病原体方法的建立及初步应用
发布时间：2021-10-07 19:01
在生命科学研究中，实验动物是最基本的四要素之一，但其是四要素中的制约性要素，会影响整个实验研究的质量和水平。实验动物的质量是动物实验科学研究准确性和可重复性的重要保障。自1994年起，我国发布了许多的实验动物相关标准，以保障我国实验动物业实现法制化的管理和标准化的应用。而在实验动物微生物学检测标准中，小鼠肝炎病毒和泰泽病原体是常见的检测项目之一。目前，用于小鼠肝炎病毒和泰泽病原体的检测方法主要是免疫荧光试验和酶联免疫吸附试验。此类方法检出率低，对感染初期的检测无效，也无法用于免疫缺陷的检测对象。本研究分别将PCR扩增技术与SNaPshot技术和反向斑点杂交技术相结合，根据小鼠肝炎病毒和泰泽病原体基因组序列设计特异性的引物和探针，经过一系列条件优化实验，建立小鼠肝炎病毒和泰泽病原体的反向斑点杂交方法，并初步探讨了其应用；建立一种分别检测MHV1、MHV3、JHM、A59四种常见毒株的快速灵敏特异的SNaPshot新方法。本研究由两部分组成：第一部分反向斑点杂交检测小鼠肝炎病毒和泰泽病原体方法的建立及初步应用第一节小鼠肝炎病毒反向斑点杂交检测方法的建立及初步应用目的建立一种反向斑点杂交方法...
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
MHVcDNAPCR扩增产物琼脂糖凝胶电泳结果
重庆医科大学硕士研究生学位论文交 1h、1.5h、2h，在 45oC、50oC 洗膜 20min，在 37oC 与 1:2000、1:5000、度的 SA-AP 孵育 0.5h、1h、1.5h，显色 10min、20min、30min。结果当为：探针Ⅰ和探针Ⅱ均修饰 20C，浓度为 50μmol/L；杂交温度为 45oC，为 1h；洗膜温度为 45oC；抗体浓度为 1:2000，孵育时间为 1h；显色时间n 时，各斑点信号强度较好，无非特异性染色（图 1.2）。1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18
MHV 特异性和灵敏性、金黄色葡萄球菌和乙型肝炎病毒 种毒株混合物。 检测结果：沙门阳性，特异性为 100%（图 1.4）。R 产物浓度最低为 5ng/μL 时，可检V-A59反向斑点杂交试剂条稳定性实验ility test of RDB examination of MHV-As of different storage times at 37oC 1. 1d; d1 2 3 4 5 6 7 8
【参考文献】：
期刊论文
[1]定性测定羊奶中黄曲霉毒素M1残留的高灵敏度检测卡的研制[J]. 武玉香,沈志强,唐士云. 畜牧与兽医. 2013(08)
[2]反向线性探针杂交在检测实验动物沙门菌中的研究[J]. 魏立雯,韦莉,张文露,潘永全,谭毅,赖国旗,徐永柱. 四川动物. 2013(02)
[3]SNaPshot技术检测Y-SNP位点O3-M122单倍群的应用[J]. 孙亚男,李安,史斌,董庆旭,李貌,何玮,翟滇,程宝文. 中国法医学杂志. 2013(01)
[4]金黄色葡萄球菌反向线性杂交探针检测方法的建立[J]. 韦莉,魏立雯,赖国旗,谭毅,张文露,潘永全. 中国实验动物学报. 2012(06)
[5]小鼠慢性病毒性肝炎诱发肝脂肪变性模型的构建[J]. 甘露,张哲,郭进强,谢茜,蒙子君,万为人,罗炳德. 南方医科大学学报. 2012(12)
[6]TGF-β1在MHV-3诱导的小鼠暴发型肝炎模型中的表达研究[J]. 吴迪,王洪武,宁琴. 中国医药科学. 2012(07)
[7]TNF-α在MHV-3诱导的小鼠病毒性肝炎模型肾脏中的表达及意义[J]. 陆玉蕾,林有智,王晓晶,严伟明,宁琴. 中国医药科学. 2012(06)
[8]反向线性探针杂交技术检测慢性乙型肝炎病毒拉米夫定耐药研究[J]. 赖国旗,张文露,胡源,唐红,张磊,谢素兰,潘玥,魏立雯,黄爱龙. 西南师范大学学报(自然科学版). 2012(03)
[9]藏茵陈对MHV-A59病毒感染湿热证小鼠肝脏损伤的干预作用[J]. 苏丽贤,汤朝晖,万为人,郭进强,罗炳徳,林培政. 时珍国医国药. 2011(08)
[10]小鼠肝炎病毒金标快速检测方法的建立[J]. 胡晓燕,佟巍,刘先菊,张丽芳,刘云波. 中国畜牧兽医. 2011(07)
硕士论文
[1]小鼠肝炎病毒N基因的表达与间接ELISA检测方法的建立和应用[D]. 周艳.扬州大学 2008
本文编号：3422600
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
MHVcDNAPCR扩增产物琼脂糖凝胶电泳结果
重庆医科大学硕士研究生学位论文交 1h、1.5h、2h，在 45oC、50oC 洗膜 20min，在 37oC 与 1:2000、1:5000、度的 SA-AP 孵育 0.5h、1h、1.5h，显色 10min、20min、30min。结果当为：探针Ⅰ和探针Ⅱ均修饰 20C，浓度为 50μmol/L；杂交温度为 45oC，为 1h；洗膜温度为 45oC；抗体浓度为 1:2000，孵育时间为 1h；显色时间n 时，各斑点信号强度较好，无非特异性染色（图 1.2）。1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18
MHV 特异性和灵敏性、金黄色葡萄球菌和乙型肝炎病毒 种毒株混合物。 检测结果：沙门阳性，特异性为 100%（图 1.4）。R 产物浓度最低为 5ng/μL 时，可检V-A59反向斑点杂交试剂条稳定性实验ility test of RDB examination of MHV-As of different storage times at 37oC 1. 1d; d1 2 3 4 5 6 7 8
【参考文献】：
期刊论文
[1]定性测定羊奶中黄曲霉毒素M1残留的高灵敏度检测卡的研制[J]. 武玉香,沈志强,唐士云. 畜牧与兽医. 2013(08)
[2]反向线性探针杂交在检测实验动物沙门菌中的研究[J]. 魏立雯,韦莉,张文露,潘永全,谭毅,赖国旗,徐永柱. 四川动物. 2013(02)
[3]SNaPshot技术检测Y-SNP位点O3-M122单倍群的应用[J]. 孙亚男,李安,史斌,董庆旭,李貌,何玮,翟滇,程宝文. 中国法医学杂志. 2013(01)
[4]金黄色葡萄球菌反向线性杂交探针检测方法的建立[J]. 韦莉,魏立雯,赖国旗,谭毅,张文露,潘永全. 中国实验动物学报. 2012(06)
[5]小鼠慢性病毒性肝炎诱发肝脂肪变性模型的构建[J]. 甘露,张哲,郭进强,谢茜,蒙子君,万为人,罗炳德. 南方医科大学学报. 2012(12)
[6]TGF-β1在MHV-3诱导的小鼠暴发型肝炎模型中的表达研究[J]. 吴迪,王洪武,宁琴. 中国医药科学. 2012(07)
[7]TNF-α在MHV-3诱导的小鼠病毒性肝炎模型肾脏中的表达及意义[J]. 陆玉蕾,林有智,王晓晶,严伟明,宁琴. 中国医药科学. 2012(06)
[8]反向线性探针杂交技术检测慢性乙型肝炎病毒拉米夫定耐药研究[J]. 赖国旗,张文露,胡源,唐红,张磊,谢素兰,潘玥,魏立雯,黄爱龙. 西南师范大学学报(自然科学版). 2012(03)
[9]藏茵陈对MHV-A59病毒感染湿热证小鼠肝脏损伤的干预作用[J]. 苏丽贤,汤朝晖,万为人,郭进强,罗炳徳,林培政. 时珍国医国药. 2011(08)
[10]小鼠肝炎病毒金标快速检测方法的建立[J]. 胡晓燕,佟巍,刘先菊,张丽芳,刘云波. 中国畜牧兽医. 2011(07)
硕士论文
[1]小鼠肝炎病毒N基因的表达与间接ELISA检测方法的建立和应用[D]. 周艳.扬州大学 2008
本文编号：3422600
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