猪MOF克隆及其敲低对孤雌胚胎着床前发育的影响
发布时间：2021-10-08 08:54
猪在遗传学、生理学、解剖学上和人比较接近,被认为是创制人类疾病动物模型和异种器官移植供体、揭示生殖与发育机制等理想的模式动物,在医学和生物学基础研究方面具有广阔的应用前景。猪胚胎生产操作是推动上述技术造福人类的核心环节。目前,猪胚胎体外生产效率仍不理想,根本原因是对猪胚胎早期发育机制认识不够。MOF （males absent on the first）基因首先发现于果蝇,是果蝇性染色体剂量补偿系统必不可少的成分,在多种真核生物中存在其同源基因。MOF蛋白主要负责特异性催化组蛋白H4第16位赖氨酸残基发生乙酰化（H4K16ac）,属于组蛋白乙酰化酶MYST家族,在哺乳动物发育中具有重要作用,然而至今未见猪MOF （pMOF）的相关报道。因此,本研究以猪为研究对象,克隆pMOF并探讨其组织表达谱,然后试图揭示猪胚胎着床前pMOF表达模式及H4K16ac修饰水平的动态变化规律,再通过RNAi技术研究MOF基因对猪胚胎发育的影响及其机制。具体试验及结果如下：试验一：pMOF亚克隆及其编码序列分析。成功克隆出包含完整开放阅读框的（open reading frame, ORF）,长度为1471...
【文章来源】：安徽农业大学安徽省
【文章页数】：82 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－２?ＭＹＳＴ家族乙酷化酶的作用（引自Ｖａ組ｅｉａ等［６０Ｐ??Ｆｉｇｕｒｅ?１－２?Ｔｈｅ?ａｃｅｔｊｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ?ｆｕｃｔｉｏｎｓ?ｏｆ?ＭＹＳＴ?ｆａｍｉｌｙ??
ＨＭＳＬ２、ＫＭＳＬ３等亚基，且发挥的功能与果蜡中一致［７４］。??基因具有组蛋白己醜基转移酶区域、克罗莫结构域和非典型锋指结构??Ｈ个保守结构域（图１－３）。克罗莫结构域也称为染色质结构域，它连接核酸与染??色质结合使ＭＯＦ基因发挥酶的活性，促进全基因组发生Ｈ４Ｋ１６ａｃ［７５］。Ｃ２ＨＣ??的巧指结构的作用主要是促进核小体和组蛋白Ｈ４Ｎ端尾部的底物结合，使ＭＯＦ??发挥组蛋白乙醜化酶的作用。??Ｍ０?举眶．ｉｍ?＇心品■ｎ—??科…闊！——ｉｍ?■?■—……ｉｌｌ—??Ｍｏｆ／１＾１?Ｉ?Ｉｎ?ｕｎｉ?Ｉ??刷?ｒ———１??ＨｆａｏｌＷ?側?■?Ｉ?■■Ｉ?Ｉ??图１－３?ＭＹＳＴ狙蛋白乙酷化酶家族的结构巧２］??Ｆｉｇｕｒｅ?１－３?Ｔｈｅ?ｈｉｓｔｏｎｅ?ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅｓ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ＭＹＳＴ?ｆａｍｉｌｙ??ＭＯＦ?（又称ＭＹＳＴｌ、ＫＡＴ８）是ＭＹＳＴ家族成员之一。人类ＭＯＦ?（ｈＭＯＦ）??是果蜗ＭＯＦ蛋白的直系同源物，在体内普遍存在和表达。近年来的研究已经证??实ｈＭＯＦ作为催化亚基，在体内可Ｗ和Ｍ化类蛋白形成多蛋白复合物（ｈｕｍａｎ??ＭＳＬ，ｈＭＳＬ），并特异性的石醜化组蛋白Ｈ４Ｋ１６位点。ｈＭＯＦ的催化活性不能单??独完成，它必须与特异的复合体结合才能发挥生物学作用（图１－４）。在人体内??ＭＯＦ作为催化亚基能够在体内与其他蛋白质形成至少两种含ＭＯＦ的组蛋白乙??醜化酶复合物。除了上述的ＭＳＬ复合物Ｗ外，还可Ｗ与另一组蛋白质形成非特??异致死复合物（ｎｏｎ－ｓｐｅｃ近Ｃ?ｌｅｔｈａｌ
２．２ＰＭＯＦ的序列分析??对；７如０护组结构进行分析，发现其包含１１个外显子，定位于第３号染色??体上，横跨长度１０．９卧（图２－３）。??１Ｋｂ??４?１?１?－ｈｆ?－ｔｉｆ?Ｔ＼?３－??Ｉ?巧?４?５?６?７８９?ｌＯｌｌ??图２－３ｐＭＷ的基因组结构，竖线标号的代表外症子，横线的代表代表内含子。??ＲｇｕｒｅＳ－Ｓ?Ｇｅｎｏｍｉｃ?ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆｐＡ／ＯＦ－?Ｔｈｅ?ｅｘｏｎｓ?ａｎｄ?ｉｎｔｒｏｎｓ?ａｒｅ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｅｄ?ｂｙ?ｓｏｌｉｄ?ｂｏｘｅｓ?ａｎｄ??ｉｎｔｅｒｖｅｎｉｎｇ?ｈｏｒｉｚｏｎｔａｌ?ｌｉｎｅｓ，?ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ－?Ｔｈｅ?ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ?ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ?化?ｐＭＯＦ?ｃｏｎｓｉｓｔｓ?１１?ｅｘｏｎｓ－??２．３?ＭＯＦ在猪、人、小鼠中的序列比对??比对猪、人和小鼠ＭＯＦ基因序列（附录Ｂ、Ｃ），结果显示，核巧酸水平上，??猪与人、小鼠编码区同源性分别为化．８８％与８８．９６％；氨基酸水平上，猪与人、??小鼠的同源性分别为９９．３４％与％．２５％?（表２－１）。??３６??
【参考文献】：
期刊论文
[1]组蛋白乙酰化酶hMOF在肾透明细胞癌组织中的表达及其临床意义[J]. 迟长亮,芦志华,管旌旌,王勇,唐宇哲,蔡勇,金景姬,王春喜. 吉林大学学报(医学版). 2012(02)
[2]hMOF蛋白在子宫内膜癌组织中的表达及临床意义[J]. 文爱平,汪海娇,罗乐,赵磊,蔡勇,金景姬,岳瑛. 中国实验诊断学. 2011(10)
[3]宫颈病变组织中hMOF、P53蛋白的表达及临床意义[J]. 刘宝,魏大鹏,胡丽娜,崔玲. 西部医学. 2011(05)
[4]Human parthenogenetic embryonic stem cells:one potential resource for cell therapy[J]. HAO Jie1,2,ZHU WanWan1,SHENG Chao1,YU Yang1,ZHOU Qi1 1 State Key Laboratory of Reproductive Biology,Institute of Zoology,Beijing 100101,China;2 Graduate School,Chinese Academy of Sciences,Beijing 100049,China. Science in China（Series C:Life Sciences）. 2009(07)
本文编号：3423837
【文章来源】：安徽农业大学安徽省
【文章页数】：82 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－２?ＭＹＳＴ家族乙酷化酶的作用（引自Ｖａ組ｅｉａ等［６０Ｐ??Ｆｉｇｕｒｅ?１－２?Ｔｈｅ?ａｃｅｔｊｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ?ｆｕｃｔｉｏｎｓ?ｏｆ?ＭＹＳＴ?ｆａｍｉｌｙ??
ＨＭＳＬ２、ＫＭＳＬ３等亚基，且发挥的功能与果蜡中一致［７４］。??基因具有组蛋白己醜基转移酶区域、克罗莫结构域和非典型锋指结构??Ｈ个保守结构域（图１－３）。克罗莫结构域也称为染色质结构域，它连接核酸与染??色质结合使ＭＯＦ基因发挥酶的活性，促进全基因组发生Ｈ４Ｋ１６ａｃ［７５］。Ｃ２ＨＣ??的巧指结构的作用主要是促进核小体和组蛋白Ｈ４Ｎ端尾部的底物结合，使ＭＯＦ??发挥组蛋白乙醜化酶的作用。??Ｍ０?举眶．ｉｍ?＇心品■ｎ—??科…闊！——ｉｍ?■?■—……ｉｌｌ—??Ｍｏｆ／１＾１?Ｉ?Ｉｎ?ｕｎｉ?Ｉ??刷?ｒ———１??ＨｆａｏｌＷ?側?■?Ｉ?■■Ｉ?Ｉ??图１－３?ＭＹＳＴ狙蛋白乙酷化酶家族的结构巧２］??Ｆｉｇｕｒｅ?１－３?Ｔｈｅ?ｈｉｓｔｏｎｅ?ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅｓ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ＭＹＳＴ?ｆａｍｉｌｙ??ＭＯＦ?（又称ＭＹＳＴｌ、ＫＡＴ８）是ＭＹＳＴ家族成员之一。人类ＭＯＦ?（ｈＭＯＦ）??是果蜗ＭＯＦ蛋白的直系同源物，在体内普遍存在和表达。近年来的研究已经证??实ｈＭＯＦ作为催化亚基，在体内可Ｗ和Ｍ化类蛋白形成多蛋白复合物（ｈｕｍａｎ??ＭＳＬ，ｈＭＳＬ），并特异性的石醜化组蛋白Ｈ４Ｋ１６位点。ｈＭＯＦ的催化活性不能单??独完成，它必须与特异的复合体结合才能发挥生物学作用（图１－４）。在人体内??ＭＯＦ作为催化亚基能够在体内与其他蛋白质形成至少两种含ＭＯＦ的组蛋白乙??醜化酶复合物。除了上述的ＭＳＬ复合物Ｗ外，还可Ｗ与另一组蛋白质形成非特??异致死复合物（ｎｏｎ－ｓｐｅｃ近Ｃ?ｌｅｔｈａｌ
２．２ＰＭＯＦ的序列分析??对；７如０护组结构进行分析，发现其包含１１个外显子，定位于第３号染色??体上，横跨长度１０．９卧（图２－３）。??１Ｋｂ??４?１?１?－ｈｆ?－ｔｉｆ?Ｔ＼?３－??Ｉ?巧?４?５?６?７８９?ｌＯｌｌ??图２－３ｐＭＷ的基因组结构，竖线标号的代表外症子，横线的代表代表内含子。??ＲｇｕｒｅＳ－Ｓ?Ｇｅｎｏｍｉｃ?ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆｐＡ／ＯＦ－?Ｔｈｅ?ｅｘｏｎｓ?ａｎｄ?ｉｎｔｒｏｎｓ?ａｒｅ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｅｄ?ｂｙ?ｓｏｌｉｄ?ｂｏｘｅｓ?ａｎｄ??ｉｎｔｅｒｖｅｎｉｎｇ?ｈｏｒｉｚｏｎｔａｌ?ｌｉｎｅｓ，?ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ－?Ｔｈｅ?ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ?ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ?化?ｐＭＯＦ?ｃｏｎｓｉｓｔｓ?１１?ｅｘｏｎｓ－??２．３?ＭＯＦ在猪、人、小鼠中的序列比对??比对猪、人和小鼠ＭＯＦ基因序列（附录Ｂ、Ｃ），结果显示，核巧酸水平上，??猪与人、小鼠编码区同源性分别为化．８８％与８８．９６％；氨基酸水平上，猪与人、??小鼠的同源性分别为９９．３４％与％．２５％?（表２－１）。??３６??
【参考文献】：
期刊论文
[1]组蛋白乙酰化酶hMOF在肾透明细胞癌组织中的表达及其临床意义[J]. 迟长亮,芦志华,管旌旌,王勇,唐宇哲,蔡勇,金景姬,王春喜. 吉林大学学报(医学版). 2012(02)
[2]hMOF蛋白在子宫内膜癌组织中的表达及临床意义[J]. 文爱平,汪海娇,罗乐,赵磊,蔡勇,金景姬,岳瑛. 中国实验诊断学. 2011(10)
[3]宫颈病变组织中hMOF、P53蛋白的表达及临床意义[J]. 刘宝,魏大鹏,胡丽娜,崔玲. 西部医学. 2011(05)
[4]Human parthenogenetic embryonic stem cells:one potential resource for cell therapy[J]. HAO Jie1,2,ZHU WanWan1,SHENG Chao1,YU Yang1,ZHOU Qi1 1 State Key Laboratory of Reproductive Biology,Institute of Zoology,Beijing 100101,China;2 Graduate School,Chinese Academy of Sciences,Beijing 100049,China. Science in China（Series C:Life Sciences）. 2009(07)
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