绒山羊次级毛囊周期性变化相关microRNA的鉴定及miR-125b在毛乳头细胞中的功能研究

发布时间：2021-10-12 01:47

　　毛囊是皮肤的附属器官，由20多种细胞组成，主要分为上皮细胞和真皮细胞两类，上皮细胞和真皮细胞的相互作用是诱导毛囊形成和周期性变化的主要原因。绒山羊的毛囊分为初级毛囊和次级毛囊，其产物分别是粗毛和细绒。粗毛和细绒纤维直径差异极大，且用途及经济价值显著不同。初级毛囊的周期性变化不明显，而次级毛囊在一年中经历生长期、退行期和休止期三个阶段，具有显著的周期性、时序性。miRNA是一种大小为19-25nt的非编码核苷酸单链小分子RNA，通过与靶基因结合位点的特异性结合，抑制靶基因翻译或降解靶mRNA来发挥重要的调节作用。研究表明miRNA参与机体的各种调节途径，包括胚胎发育、器官形成、细胞分化增殖和凋亡、细胞周期的转换、肌肉和脂肪代谢等。本研究利用高通量测序、细胞培养、细胞转染、基因克隆及基因表达分析等实验技术结合生物信息学分析，对陕北白绒山羊次级毛囊周期性变化相关的miRNA进行鉴定和差异性分析，继而对表达差异性显著的miR-125b进行了初步的功能研究，取得以下主要结果：1.构建了绒山羊次级毛囊生长期、退行期和休止期皮肤组织的小RNA文库，经Solexa测序后得到纯净读数分别为15,997,... 

【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：117 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
文献综述
    第一章 毛囊周期性变化及其在绒山羊上的研究进展
        1.1 毛囊周期性变化
        1.2 毛囊周期性变化的分子调控
        1.3 绒山羊毛囊周期性变化的研究
    第二章 miRNA 的特征及在绒山羊上的研究进展
        2.1 miRNA 生物合成
        2.2 家畜中 miRNA 的研究
        2.3 miRNA 在皮肤和毛囊发育中的研究
        2.4 本研究的目的意义
试验研究
    第三章 绒山羊次级毛囊周期性变化时期皮肤小 RNA 文库构建及序列分析
        3.1 材料与方法
            3.1.1 所用试剂与仪器
            3.1.2 试验动物及皮肤组织的采集
            3.1.3 总 RNA 的提取
            3.1.4 小 RNA 文库的构建
            3.1.5 高通量测序
            3.1.6 小 RNA 序列分析
        3.2 结果与分析
            3.2.1 总 RNA 样品质量检测
            3.2.2 小 RNA 的生物信息学分析
        3.3 讨论
            3.3.1 miRNA 的鉴定方法
            3.3.2 小 RNA 测序分析
        3.4 小结
    第四章 绒山羊次级毛囊周期性变化相关 miRNA 的差异表达及其靶基因功能分析
        4.1 材料与方法
            4.1.1 所用试剂与仪器
            4.1.2 皮肤组织的采集
            4.1.3 总 RNA 的提取
            4.1.4 保守 miRNA 的差异分析
            4.1.5 新 miRNA 的预测
            4.1.6 miRNA 的碱基编辑
            4.1.7 miRNA 靶基因的预测及功能分析
            4.1.8 实时定量 PCR
        4.2 结果与分析
            4.2.1 保守 miRNA 的差异分析
            4.2.2 新 miRNA 的预测
            4.2.3 miRNA 的碱基编辑
            4.2.4 miRNA 靶基因的预测及功能分析
            4.2.5 miRNA 实时定量 PCR 分析
        4.3 讨论
            4.3.1 山羊 miRNA 的鉴定
            4.3.2 miRNA 差异表达分析
            4.3.3 miRNA 预测靶基因的功能分析
        4.4 小结
    第五章 miR-125b 靶基因预测与鉴定
        5.1 材料与方法
            5.1.1 所用试剂与仪器
            5.1.2 miR-125b 靶基因预测
            5.1.3 miR-125b 靶位点的扩增
            5.1.4 序列比对
            5.1.5 双荧光素酶载体的构建
            5.1.6 293T 细胞的培养
            5.1.7 双荧光素酶报告基因系统
        5.2 结果与分析
            5.2.1 miR-125b 靶基因预测
            5.2.2 miR-125b 靶位点的扩增
            5.2.3 双荧光素酶载体构建
            5.2.4 细胞转染
            5.2.5 双荧光素酶报告基因检测
        5.3 讨论
            5.3.1 miR-125b 靶基因的预测
            5.3.2 miR-125b 靶基因的验证
        5.4 小结
    第六章 miR-125b 在绒山羊毛乳头细胞中的功能研究
        6.1 材料与方法
            6.1.1 所用试剂与仪器
            6.1.2 绒山羊毛乳头细胞的培养
            6.1.3 绒山羊次级毛囊毛乳头细胞的鉴定
            6.1.4 miR-125b 组织表达谱的构建
            6.1.5 腺病毒载体构建及包装
            6.1.6 腺病毒滴度测定
            6.1.7 重组腺病毒的转染与表达检测
        6.2 结果与分析
            6.2.1 绒山羊毛乳头细胞体外培养
            6.2.2 绒山羊次级毛囊毛乳头细胞的鉴定
            6.2.3 miR-125b 组织表达谱
            6.2.4 miR-125b 腺病毒载体的构建
            6.2.5 腺病毒包装及病毒滴度测定
            6.2.6 腺病毒感染毛乳头细胞最佳感染浓度的测定
            6.2.7 腺病毒感染毛乳头细胞中 miR-125b 表达量的检测
            6.2.8 病毒感染毛乳头细胞后毛囊周期性变化相关基因的检测
        6.3 讨论
            6.3.1 绒山羊次级毛囊毛乳头细胞的培养与鉴定
            6.3.2 病毒感染毛乳头细胞后毛囊周期性变化相关基因的检测
        6.4 小结
结论
创新点
还需进一步深入研究的问题
参考文献
附录
缩略词表
致谢
作者简介及博士期间所发表的论文



本文编号：3431651