黔北麻羊TLR4基因结构分析及转染细胞对LPS的应答
发布时间：2021-10-13 07:58
TLR4（Toll-like receptor 4）作为一种重要的模式识别受体（pattern recognition receptors,PRRs）,在介导脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）跨膜信号转导途径中发挥主导作用,并参与介导由LPS诱导的一系列前炎性细胞因子的合成与释放,进而引发过度炎症反应（Goldammer et al.,2004）,在G-致病机理中有至关重要的作用。现已证实,在人和鼠体内TLR4都是LPS最重要的模式识别受体,作为一种跨膜信号受体,TLR4可将LPS刺激信号直接传入细胞内,在介导革兰氏阴性细菌及LPS的宿主反应中发挥关键作用（Hashimoto et al.,2004）。研究在LPS介导下TLR4基因与胞内炎症因子的变化情况是阐明TLR4基因在抗革兰氏阴性细菌感染的基本途径。本研究选择贵州黔北麻羊为试验对象,根据Gene Bank中山羊TLR4基因序列对其三个外显子分别设计引物,采用PCR结合直接测序法对TLR4三个外显子SNPs进行筛选;通过克隆TLR4基因CDS全长,构建重组真核表达载体pEGFP-N1-TL...
【文章来源】：贵州大学贵州省 211工程院校
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
基因组DNA提取结果
图 2.2 黔北麻羊 TLR4 基因各外显子 PCR 扩增结果Fig. 2.2 Amplification results of various primer of TLR4 gene in Qian bei Ma Go图可知，各扩增片段与预期片段大小相符，条带明亮单一，无拖异性条带，可用于下一步试验。黔北麻羊 DNA 池筛选 TLR4 基因多态性照上述方法，将所提取 DNA 样本进行混池后，以 DNA 混合池为性扩增，取条带明亮无杂带的 PCR 产物送至上海生工生物有限公运用 DNAstar 软件中 SeqMan 程序将测序结果与 NCBI 上所提交的分析，初步确定其变异位点，经对比分析，TLR4 基因 3 个外显子 SNP 位点（见图 2.3），其中 2 个 SNP 位于 TLR4 基因 Intron1，1Exon3，以TLR4基因第一外显子第一位碱基为+1，则其SNPs分布为C、Intron1 G+219A、Exon3 C+8209G，其中 Exon3 C+8209G（leu变。
Fig. 2.2 Amplification results of various primer of TLR4 gene in Qian bei Ma Goat由图可知，各扩增片段与预期片段大小相符，条带明亮单一，无拖尾现象，无非特异性条带，可用于下一步试验。2.4.3 黔北麻羊 DNA 池筛选 TLR4 基因多态性按照上述方法，将所提取 DNA 样本进行混池后，以 DNA 混合池为模版进行特异性扩增，取条带明亮无杂带的 PCR 产物送至上海生工生物有限公司进行测序。运用 DNAstar 软件中 SeqMan 程序将测序结果与 NCBI 上所提交的序列进行对比分析，初步确定其变异位点，经对比分析，TLR4 基因 3 个外显子中共发现 3 个 SNP 位点（见图 2.3），其中 2 个 SNP 位于 TLR4 基因 Intron1，1 个位于TLR4 Exon3，以TLR4基因第一外显子第一位碱基为+1，则其SNPs分布为Intron1A+212C、Intron1 G+219A、Exon3 C+8209G，其中 Exon3 C+8209G（leu-val）为错义突变。
【参考文献】：
期刊论文
[1]奶山羊、绒山羊的饲养管理[J]. 何桂玲. 饲料博览. 2017(12)
[2]LPS诱导牦牛成纤维细胞TLR4及其信号通路基因表达变化分析[J]. 段荟芹,王利,李键,钟金城,字向东,江明锋,熊显荣. 中国兽医学报. 2017(09)
[3]基于肿瘤微环境中TLR4/NF-κB通路的变化探讨乳癌术后方对乳腺癌小鼠肺转移的影响[J]. 盛佳钰,张馨月,李琼,薛晓红. 中华中医药学刊. 2016(12)
[4]TLR4基因在小尾寒羊乳房炎乳腺组织中的表达[J]. 陈富强,张小丽,李发弟,杨勃,唐然,张晨,张欣,宋晓育,马小军. 农业生物技术学报. 2016(03)
[5]LPS诱导条件下猪小肠上皮细胞TLR4及其信号通路基因表达变化分析[J]. 孙丽,夏日炜,殷学梅,喻礼怀,朱国强,吴圣龙,包文斌. 畜牧兽医学报. 2015(07)
[6]TLR2 and TLR4 polymorphisms influence m RNA and protein expression in colorectal cancer[J]. Marcela Alcantara Proen?a,Juliana Garcia de Oliveira,Aline Cristina Targa Cadamuro,Maysa Succi,Jo?o Gomes Netinho,Eny Maria Goloni-Bertolo,érika Cristina Pavarino,Ana Elizabete Silva. World Journal of Gastroenterology. 2015(25)
[7]牦牛TLR2和TLR4基因mRNA在不同组织中的表达分布研究[J]. 林宝山,兰道亮,黄偲,陈亚冰,黄勇,李键. 中国预防兽医学报. 2014(11)
[8]鸡外周血白细胞中Toll样受体的克隆[J]. 贾鹏鹏. 国外畜牧学(猪与禽). 2013(10)
[9]妊娠期关中奶山羊子宫中TLR4的定位和表达[J]. 代盈盈,王文丽,赵慧英,刘红改,王薇. 畜牧兽医学报. 2013(04)
[10]TLR4基因多态性与疾病易感性的研究进展[J]. 刘晓聪,沈关心,朱慧芬,陈琰琰,姜素华. 农垦医学. 2012(03)
博士论文
[1]过表达oTLR4转基因绵羊抗布鲁氏菌病能力的评估及其机制研究[D]. 王志贤.中国农业大学 2017
[2]A族链球菌感染小鼠巨噬细胞初期通过TLR4/MyD88直接途径诱导SOCS-1高表达的机制研究[D]. 吴景华.河北医科大学 2014
[3]小鼠巨噬细胞TLR2、TLR4及RP105在金黄色葡萄球菌感染中的天然免疫应答机制[D]. 刘博.吉林大学 2013
[4]奶牛TLR4及其信号转导基因的克隆、SNPs检测与乳房炎的关联分析[D]. 王兴平.西北农林科技大学 2007
硕士论文
[1]中国美利奴羊TLR4、TLR2基因多态性及其与布鲁氏菌病的相关性分析[D]. 王会敏.石河子大学 2017
[2]TLR4基因多态性与大动脉粥样硬化型脑梗死的相关性研究[D]. 钟晓.青岛大学 2017
[3]酪氨酸激酶BMX在内毒素/脂多糖诱导小鼠单核巨噬细胞株RAW264.7促炎性细胞因子产生中的作用[D]. 方旭.安徽医科大学 2017
[4]LPS刺激对雏鸡气管和肺TLR4的表达影响研究[D]. 葛晓红.华中农业大学 2014
[5]甘肃地区小尾寒羊TLR4、TLR9基因多态性与呼吸系统疾病的相关性分析[D]. 吕伟丽.甘肃农业大学 2014
[6]云南白药对P.g-LPS诱导人牙髓细胞分泌TNF-α、IL-6、IL-1β影响的实验研究[D]. 黄松靖.昆明医科大学 2014
[7]苏钟猪TLR4基因多态性及编码区C1027A功能分析[D]. 刘筱.南京农业大学 2011
[8]猪TLR4基因的突变与功能分析[D]. 翟春媛.东北农业大学 2010
[9]牙周优势菌内毒素对人牙周膜细胞的生物学效应及mCD14表达的研究[D]. 张风秋.第四军医大学 2001
本文编号：3434263
【文章来源】：贵州大学贵州省 211工程院校
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
基因组DNA提取结果
图 2.2 黔北麻羊 TLR4 基因各外显子 PCR 扩增结果Fig. 2.2 Amplification results of various primer of TLR4 gene in Qian bei Ma Go图可知，各扩增片段与预期片段大小相符，条带明亮单一，无拖异性条带，可用于下一步试验。黔北麻羊 DNA 池筛选 TLR4 基因多态性照上述方法，将所提取 DNA 样本进行混池后，以 DNA 混合池为性扩增，取条带明亮无杂带的 PCR 产物送至上海生工生物有限公运用 DNAstar 软件中 SeqMan 程序将测序结果与 NCBI 上所提交的分析，初步确定其变异位点，经对比分析，TLR4 基因 3 个外显子 SNP 位点（见图 2.3），其中 2 个 SNP 位于 TLR4 基因 Intron1，1Exon3，以TLR4基因第一外显子第一位碱基为+1，则其SNPs分布为C、Intron1 G+219A、Exon3 C+8209G，其中 Exon3 C+8209G（leu变。
Fig. 2.2 Amplification results of various primer of TLR4 gene in Qian bei Ma Goat由图可知，各扩增片段与预期片段大小相符，条带明亮单一，无拖尾现象，无非特异性条带，可用于下一步试验。2.4.3 黔北麻羊 DNA 池筛选 TLR4 基因多态性按照上述方法，将所提取 DNA 样本进行混池后，以 DNA 混合池为模版进行特异性扩增，取条带明亮无杂带的 PCR 产物送至上海生工生物有限公司进行测序。运用 DNAstar 软件中 SeqMan 程序将测序结果与 NCBI 上所提交的序列进行对比分析，初步确定其变异位点，经对比分析，TLR4 基因 3 个外显子中共发现 3 个 SNP 位点（见图 2.3），其中 2 个 SNP 位于 TLR4 基因 Intron1，1 个位于TLR4 Exon3，以TLR4基因第一外显子第一位碱基为+1，则其SNPs分布为Intron1A+212C、Intron1 G+219A、Exon3 C+8209G，其中 Exon3 C+8209G（leu-val）为错义突变。
【参考文献】：
期刊论文
[1]奶山羊、绒山羊的饲养管理[J]. 何桂玲. 饲料博览. 2017(12)
[2]LPS诱导牦牛成纤维细胞TLR4及其信号通路基因表达变化分析[J]. 段荟芹,王利,李键,钟金城,字向东,江明锋,熊显荣. 中国兽医学报. 2017(09)
[3]基于肿瘤微环境中TLR4/NF-κB通路的变化探讨乳癌术后方对乳腺癌小鼠肺转移的影响[J]. 盛佳钰,张馨月,李琼,薛晓红. 中华中医药学刊. 2016(12)
[4]TLR4基因在小尾寒羊乳房炎乳腺组织中的表达[J]. 陈富强,张小丽,李发弟,杨勃,唐然,张晨,张欣,宋晓育,马小军. 农业生物技术学报. 2016(03)
[5]LPS诱导条件下猪小肠上皮细胞TLR4及其信号通路基因表达变化分析[J]. 孙丽,夏日炜,殷学梅,喻礼怀,朱国强,吴圣龙,包文斌. 畜牧兽医学报. 2015(07)
[6]TLR2 and TLR4 polymorphisms influence m RNA and protein expression in colorectal cancer[J]. Marcela Alcantara Proen?a,Juliana Garcia de Oliveira,Aline Cristina Targa Cadamuro,Maysa Succi,Jo?o Gomes Netinho,Eny Maria Goloni-Bertolo,érika Cristina Pavarino,Ana Elizabete Silva. World Journal of Gastroenterology. 2015(25)
[7]牦牛TLR2和TLR4基因mRNA在不同组织中的表达分布研究[J]. 林宝山,兰道亮,黄偲,陈亚冰,黄勇,李键. 中国预防兽医学报. 2014(11)
[8]鸡外周血白细胞中Toll样受体的克隆[J]. 贾鹏鹏. 国外畜牧学(猪与禽). 2013(10)
[9]妊娠期关中奶山羊子宫中TLR4的定位和表达[J]. 代盈盈,王文丽,赵慧英,刘红改,王薇. 畜牧兽医学报. 2013(04)
[10]TLR4基因多态性与疾病易感性的研究进展[J]. 刘晓聪,沈关心,朱慧芬,陈琰琰,姜素华. 农垦医学. 2012(03)
博士论文
[1]过表达oTLR4转基因绵羊抗布鲁氏菌病能力的评估及其机制研究[D]. 王志贤.中国农业大学 2017
[2]A族链球菌感染小鼠巨噬细胞初期通过TLR4/MyD88直接途径诱导SOCS-1高表达的机制研究[D]. 吴景华.河北医科大学 2014
[3]小鼠巨噬细胞TLR2、TLR4及RP105在金黄色葡萄球菌感染中的天然免疫应答机制[D]. 刘博.吉林大学 2013
[4]奶牛TLR4及其信号转导基因的克隆、SNPs检测与乳房炎的关联分析[D]. 王兴平.西北农林科技大学 2007
硕士论文
[1]中国美利奴羊TLR4、TLR2基因多态性及其与布鲁氏菌病的相关性分析[D]. 王会敏.石河子大学 2017
[2]TLR4基因多态性与大动脉粥样硬化型脑梗死的相关性研究[D]. 钟晓.青岛大学 2017
[3]酪氨酸激酶BMX在内毒素/脂多糖诱导小鼠单核巨噬细胞株RAW264.7促炎性细胞因子产生中的作用[D]. 方旭.安徽医科大学 2017
[4]LPS刺激对雏鸡气管和肺TLR4的表达影响研究[D]. 葛晓红.华中农业大学 2014
[5]甘肃地区小尾寒羊TLR4、TLR9基因多态性与呼吸系统疾病的相关性分析[D]. 吕伟丽.甘肃农业大学 2014
[6]云南白药对P.g-LPS诱导人牙髓细胞分泌TNF-α、IL-6、IL-1β影响的实验研究[D]. 黄松靖.昆明医科大学 2014
[7]苏钟猪TLR4基因多态性及编码区C1027A功能分析[D]. 刘筱.南京农业大学 2011
[8]猪TLR4基因的突变与功能分析[D]. 翟春媛.东北农业大学 2010
[9]牙周优势菌内毒素对人牙周膜细胞的生物学效应及mCD14表达的研究[D]. 张风秋.第四军医大学 2001
本文编号：3434263
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3434263.html
