RNAi靶向PRRSV N基因及GP5基因ADE表达缺失重组腺病毒免疫原性研究
发布时间：2021-10-13 16:54
猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是一种以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病为特征的传染病。中国自1996年爆发PRRS以来，已遍及全国各地，成为对养猪业危害最为严重的疫病之一。PRRS的病原体为猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV），是一种有囊膜的单股正链RNA病毒，其基因组大小约为15.5kb，包含10个开放阅读框，属于套式病毒目、动脉炎病毒科、动脉炎病毒属成员。PRRSV具有抗原变异性、嗜巨噬细胞性、持续感染性以及抗体依赖性增加作用等特征。临床上常与其它病原混合感染。现在用于预防PRRS的灭活疫苗效果不稳定，常导致免疫失败；而弱毒疫苗有毒力返强的危险，可能会导致疫苗毒的传播。PRRSV N蛋白是由ORF7编码的核衣壳蛋白，占整个病毒粒子蛋白总量的20-40%，是病毒装配和拆分的主要结构蛋白，在PRRSV感染细胞中，表达量最高，抗原性最强，直接参与病毒基因组的复制。同时，N基因在PRRSV RNA的识别、亚细胞定位、与其他病毒和细胞蛋白的互作中起到重要作用。一旦N基因发生变异或受到抑制，往往会导致整个病毒基因组功能的丧失。GP5蛋白是由ORF5编码的糖基化囊膜蛋白，具有较好的免疫原性，能够诱导...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：141 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
猪繁殖与呼吸综合征病毒粒子结构模式图
图 1.1 猪繁殖与呼吸综合征病毒粒子结构模式图Fig 1.1 Schematic representation of PRRSV virion2.3 PRRSV 的蛋白表达模式PRRSV 的蛋白表达模式与冠状病毒存在许多相似之处，因为 PRRSV 的基结构与冠状病毒有许多相同的结构。PRRSV 的病毒蛋白表达机制是位于基 3′端的结构基因通过负链不连续转录机制进行亚基因的转录，产生 6 个亚基mRNA表达蛋白。亚基因组结构mRNA的转录产物的5′UTR、3′UTR和pol巴与病毒基因组 RNA 相同，病毒复制酶复合体将基因组 RNA 复制为负链体，其为复制子代基因组 RNA 的模板；同时也产生编码结构蛋白正链 sgR模板[23]。
图 2.1 RNAi 的发生机制模式图（From：Nature）Fig 2.1 A model for the molecular steps in RNA interference2.1.2 miRNA 介导的 RNA 干扰过去人们一直认为哺乳动物细胞内不存在 RNAi 机制。哺乳动物细胞抗病毒感染依靠 dsRNA 启动的一种由干扰素激活，主要由蛋白激酶 R（PKR）和 RNA酶 L（RNase L）介导的天然抗病毒反应。Gitlin 等[69]通过实验证明哺乳动物细胞内存在 RNAi，经典的 PKR-RNase L 途径与 RNAi 过程共同抵抗病毒感染细胞。经过相关研究证实 RNAi 过程与 PKR-RNase L 途径作用相互独立，并且 RNAi过程抵抗病毒感染细胞的效率显著高于干扰素途径[70]。但是，哺乳动物细胞与植物和无脊椎动物细胞不同，并未发现内源性的 siRNA，取而代之的是另一种相关物质-miRNA（micro RNA），它是一种长度为 19-25nt 的单链 RNA（ssRNA）。哺乳动物细胞中的 RNAi 过程与内源性的 miRNA 有关，miRNA 起源于细胞内具有发夹结构的基因转录产物[71]。在介导 RNAi 过程中，miRNA 与 siRNA 功能类似，诱导靶 mRNA 的剪切或
【参考文献】：
期刊论文
[1]PRRSV-GP5基因的克隆及其蛋白结构和B细胞表位预测[J]. 陈军义,王开功,罗险峰,周碧君,文明,程振涛,张双翔,路宪礼,刘飞. 中国兽医学报. 2011(06)
[2]PRRSV缺失变异毒株JL/07/SW株的分离鉴定及序列分析[J]. 李志杰,丁壮,孟轲音,宣华,王贵平,高恩鹏,丛彦龙,母连志. 中国兽医学报. 2009(07)
[3]RNAi技术及其在基因组学研究中的应用[J]. 张冰,何建国. 内蒙古大学学报(自然科学版). 2007(01)
[4]靶向性腺病毒研究进展[J]. 张萍,钱关祥. 生命科学. 2004(02)
[5]从疑似PRRS流产胎儿分离PRRSV的研究[J]. 郭宝清,陈章水,刘文兴,崔益洙. 中国畜禽传染病. 1996(02)
本文编号：3435039
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：141 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
猪繁殖与呼吸综合征病毒粒子结构模式图
图 1.1 猪繁殖与呼吸综合征病毒粒子结构模式图Fig 1.1 Schematic representation of PRRSV virion2.3 PRRSV 的蛋白表达模式PRRSV 的蛋白表达模式与冠状病毒存在许多相似之处，因为 PRRSV 的基结构与冠状病毒有许多相同的结构。PRRSV 的病毒蛋白表达机制是位于基 3′端的结构基因通过负链不连续转录机制进行亚基因的转录，产生 6 个亚基mRNA表达蛋白。亚基因组结构mRNA的转录产物的5′UTR、3′UTR和pol巴与病毒基因组 RNA 相同，病毒复制酶复合体将基因组 RNA 复制为负链体，其为复制子代基因组 RNA 的模板；同时也产生编码结构蛋白正链 sgR模板[23]。
图 2.1 RNAi 的发生机制模式图（From：Nature）Fig 2.1 A model for the molecular steps in RNA interference2.1.2 miRNA 介导的 RNA 干扰过去人们一直认为哺乳动物细胞内不存在 RNAi 机制。哺乳动物细胞抗病毒感染依靠 dsRNA 启动的一种由干扰素激活，主要由蛋白激酶 R（PKR）和 RNA酶 L（RNase L）介导的天然抗病毒反应。Gitlin 等[69]通过实验证明哺乳动物细胞内存在 RNAi，经典的 PKR-RNase L 途径与 RNAi 过程共同抵抗病毒感染细胞。经过相关研究证实 RNAi 过程与 PKR-RNase L 途径作用相互独立，并且 RNAi过程抵抗病毒感染细胞的效率显著高于干扰素途径[70]。但是，哺乳动物细胞与植物和无脊椎动物细胞不同，并未发现内源性的 siRNA，取而代之的是另一种相关物质-miRNA（micro RNA），它是一种长度为 19-25nt 的单链 RNA（ssRNA）。哺乳动物细胞中的 RNAi 过程与内源性的 miRNA 有关，miRNA 起源于细胞内具有发夹结构的基因转录产物[71]。在介导 RNAi 过程中，miRNA 与 siRNA 功能类似，诱导靶 mRNA 的剪切或
【参考文献】：
期刊论文
[1]PRRSV-GP5基因的克隆及其蛋白结构和B细胞表位预测[J]. 陈军义,王开功,罗险峰,周碧君,文明,程振涛,张双翔,路宪礼,刘飞. 中国兽医学报. 2011(06)
[2]PRRSV缺失变异毒株JL/07/SW株的分离鉴定及序列分析[J]. 李志杰,丁壮,孟轲音,宣华,王贵平,高恩鹏,丛彦龙,母连志. 中国兽医学报. 2009(07)
[3]RNAi技术及其在基因组学研究中的应用[J]. 张冰,何建国. 内蒙古大学学报(自然科学版). 2007(01)
[4]靶向性腺病毒研究进展[J]. 张萍,钱关祥. 生命科学. 2004(02)
[5]从疑似PRRS流产胎儿分离PRRSV的研究[J]. 郭宝清,陈章水,刘文兴,崔益洙. 中国畜禽传染病. 1996(02)
本文编号：3435039
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