基于Mrp的猪链球菌病间接ELISA检测方法的建立

发布时间：2021-10-14 20:59

　　猪链球菌（Streptococcus suis,SS）是一种在自然界中分布广泛的革兰氏阳性菌,猪、马、牛、羊、鸡、小鼠等多种动物均可感染SS继而发病。其中猪的易感性最高,感染后的发病猪会出现脑膜炎、关节炎、以及败血症等临床症状。同时,人也可以感染SS继而出现脑膜炎、败血症等临床症状。由于SS引起的猪链球菌病的死亡率较高且该病的传播速度较快,给养猪行业造成了巨大的经济损失,同时也严重危害着人类健康。因此,及时的检测与诊断是预防猪链球菌病的关键。由于传统的病原分离培养和生化鉴定方法很难对该病做出及时且准确的诊断,并且也不太适合大量样品的检测。所以,建立一种能够快速、准确并且高效的检测方法对该病的预防以及流行病学研究具有重要的意义。溶菌酶释放蛋白（Muramidase-released protein,Mrp）是SS的一种重要的毒力标志因子,具有良好的免疫原性。本研究对mrp基因2617³710 bp区段进行扩增,并进一步原核表达和纯化。对纯化的Mrp蛋白进行Western blot分析,结果表明该蛋白的反应原性良好。用纯化的Mrp蛋白作为包被抗原,建立了检测SS血清抗... 

【文章来源】：中国农业科学院北京市

【文章页数】：51 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

mrp基因的扩增Fig.2-1PCRamplificationofmrpgene

中国农业科学院硕士学位论文第二章重组Mrp蛋白的原核表达及纯化132.3.4重组Mrp蛋白反应原性分析图2-4显示，在诱导前后的阳性重组菌以及纯化的目的蛋白泳道大小约为68ku处均有目的条带出现，说明重组Mrp蛋白能够与SS2阳性血清发生反应，具有良好的反应原性。170kuM1M170ku130ku100ku70ku55ku40ku30ku25ku123456130ku100ku70ku55ku40ku30ku25ku15ku图2-2重组Mrp蛋白的原核表达Fig.2-2ProkaryoticexpressionofrecombinantMrpproteinM：Marker；1：空载体pET-28a转化BL21（DE3）诱导前；2：空载体pET-28a转化BL21（DE3）诱导后；3：pET28a-mrp阳性重组菌诱导前；4：pET28a-mrp阳性重组菌诱导后；5：诱导阳性重组菌超声处理后的上清；6：诱导阳性重组菌超声处理后的沉淀M:marker;1:BL21(pET-28a)withoutinduction;2:BL21(pET-28a)inductionwithIPTG;3:BL21(pET28a-mrp)withoutinduction;4:BL21(pET28a-mrp)inductionwithIPTG;5:SupernatantofBL21(pET28a-mrp)positiverecombinantafterinductionandsonication;6:PrecipitationofBL21(pET28a-mrp)positiverecombinantsafterinductionandsonication图2-3重组Mrp蛋白的纯化Fig.2-3PurificationofrecombinantMrpproteinM：Marker；1：纯化的重组Mrp蛋白M:Marker;1:PurifiedrecombinantMrpprotein

中国农业科学院硕士学位论文第二章重组Mrp蛋白的原核表达及纯化132.3.4重组Mrp蛋白反应原性分析图2-4显示，在诱导前后的阳性重组菌以及纯化的目的蛋白泳道大小约为68ku处均有目的条带出现，说明重组Mrp蛋白能够与SS2阳性血清发生反应，具有良好的反应原性。170kuM1M170ku130ku100ku70ku55ku40ku30ku25ku123456130ku100ku70ku55ku40ku30ku25ku15ku图2-2重组Mrp蛋白的原核表达Fig.2-2ProkaryoticexpressionofrecombinantMrpproteinM：Marker；1：空载体pET-28a转化BL21（DE3）诱导前；2：空载体pET-28a转化BL21（DE3）诱导后；3：pET28a-mrp阳性重组菌诱导前；4：pET28a-mrp阳性重组菌诱导后；5：诱导阳性重组菌超声处理后的上清；6：诱导阳性重组菌超声处理后的沉淀M:marker;1:BL21(pET-28a)withoutinduction;2:BL21(pET-28a)inductionwithIPTG;3:BL21(pET28a-mrp)withoutinduction;4:BL21(pET28a-mrp)inductionwithIPTG;5:SupernatantofBL21(pET28a-mrp)positiverecombinantafterinductionandsonication;6:PrecipitationofBL21(pET28a-mrp)positiverecombinantsafterinductionandsonication图2-3重组Mrp蛋白的纯化Fig.2-3PurificationofrecombinantMrpproteinM：Marker；1：纯化的重组Mrp蛋白M:Marker;1:PurifiedrecombinantMrpprotein


本文编号：3436821