牛瑟氏泰勒虫荧光定量PCR方法的建立及应用

发布时间：2021-10-15 20:56

　　牛瑟氏泰勒虫（Theileria sergenti）是经过蜱传播的泰勒科（Theileriidae）、泰勒属（Theileria）的血液原虫。临床上感染瑟氏泰勒虫的牛会出现慢性贫血和高热、黄疸,甚至死亡。当前,牛瑟氏泰勒虫病在全世界的各个地区分布较为广泛。随着全球经济贸易往来的日趋密集和养牛产业的不断扩大,各国之间牛类产品的交易量剧增,不同大洲或地区的国家相继报道了牛瑟氏泰勒虫病。在这种严峻的情况下,对牛瑟氏泰勒虫病的监控和防治提出了更新、更高的要求。实时荧光定量PCR （Real-time Fluorescent Quantitive Polymerase Chain Reaction,FQ-PCR） PCR反应体系中加荧光集团,通过受体发色团偶极-偶极的作用使能量由供体转移至受体,受体发射的荧光信号强度与DNA的产量成正比,因此通过检测荧光信号强度从而去测定产物的量,进而推出靶序列的初始量。该技术自1996年产生以来,经过不断地发展和完善,现在已经非常成熟并得到了广泛的应用。实时荧光定量PCR中的SYBR Green PCR方法可结合双链DNA结合而发出荧光,而TaqManPCR方... 

【文章来源】：延边大学吉林省 211工程院校

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
目录
前言
    1 牛瑟氏泰勒虫形态学与生活史
    2 牛瑟氏泰勒虫流行病学的概述
    3 牛瑟氏泰勒虫的功能基因
    4 牛瑟氏泰勒虫病诊断方法
        4.1 病原学诊断
        4.2 免疫学诊断
        4.3 分子生物学诊断
    5 荧光实时定量PCR技术的概述
        5.1 荧光定量PCR的原理
        5.2 荧光定量PCR的反应方法
        5.3 荧光定量PCR的定量方法
        5.4 荧光定量PCR在预防兽医学领域的应用
    6 本试验目的与意义
试验研究
    1 试验材料
        1.1 血液样本
        1.2 菌种和载体
        1.3 主要试剂
        1.4 主要试剂的配制
        1.5 引物设计与合成
        1.6 主要仪器
    2 试验方法
        2.1 标准品的制备和鉴定
        2.2 荧光定量PCR反应条件的优化
        2.3 荧光定量PCR敏感性试验
        2.4 荧光定量PCR特异性试验
        2.5 荧光定量PCR标准曲线制作
        2.6 荧光定量PCR重复性试验
        2.7 临床样本的检测
试验结果
    3.1 重组质粒pMD18T-TsP1的制备和鉴定
    3.2 荧光定量PCR反应条件的优化
    3.3 TsP1-SYBR Green PCR检测结果
    3.4 TsP1-TaqMan PCR检测结果
    3.5 三种检测方法之间的比较
    3.6 临床样本检测
讨论
结论
参考文献
致谢
作者简介
在研期间发表的论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]牛瑟氏泰勒虫二温式PCR快速检测技术的建立及初步应用[J]. 丁晓双,夏晓辉,张晓轩,海旭楠,许应天.  畜牧与兽医. 2013(07)
[2]牛瑟氏泰勒虫ITS基因PCR诊断方法的建立[J]. 王轶男,贾立军,薛书江,张影,钱年超,张守发.  中国畜牧兽医. 2012(08)
[3]延边地区牛瑟氏泰勒虫病的分子流行病学调查[J]. 胡诗悦,钱年超,王轶男,贾立军,张守发.  中国兽医科学. 2012(06)
[4]牛瑟氏泰勒虫套式PCR检测方法的建立及初步应用[J]. 杨兴,许应天,白雪梅,沈岩,孙平杰.  畜牧与兽医. 2010(06)
[5]荧光PCR技术应用的研究进展[J]. 陈贤革.  畜牧与饲料科学. 2010(02)
[6]实时荧光定量PCR的发展和数据分析[J]. 纪冬,辛绍杰.  生物技术通讯. 2009(04)
[7]牛瑟氏泰勒虫表面蛋白p33基因的真核表达[J]. 常巧呈,李太元,许应天,李艳茹,谷长维,陈媛媛.  中国兽医寄生虫病. 2008(05)
[8]荧光定量PCR数据处理方法的探讨[J]. 唐永凯,贾永义.  生物技术. 2008(03)
[9]牛瑟氏泰勒虫病PCR诊断方法的建立[J]. 金春梅,许应天,张守发,王笑玉,于龙政.  畜牧与兽医. 2007(05)
[10]牛瑟氏泰勒虫病致病机理的研究进展[J]. 王旭有,李春花,许应天.  中国兽医寄生虫病. 2007(03)

硕士论文
[1]牛瑟氏泰勒虫P32主要表面蛋白基因的克隆及PCR诊断方法的建立[D]. 杨艳玲.吉林大学 2006
[2]以p33融合蛋白为抗原建立牛瑟氏泰勒虫病间接ELISA诊断方法[D]. 高旭.延边大学 2006



本文编号：3438610