异常毕赤酵母分离鉴定及其对断奶仔猪生长与健康的影响研究
发布时间：2021-10-15 23:44
本文旨在从湖南省安仁县固态酒药中筛选异常毕赤酵母（Pichia anonmala）,对其生化特性、最适培养条件及安全性评价进行研究,并探究日粮添加异常毕赤酵母对断奶仔猪生长与健康的影响及其机制。本研究内容分为以下三个试验。试验一:通过传统分类学和分子生物学方法从固态酒药中筛选异常毕赤酵母,并测定其粗蛋白质、氨基酸含量、嗜杀活性,优化其培养条件。结果表明:（1）分离得到1株高蛋白菌株,经26S rDNA基因序列测定被鉴定为异常毕赤酵母（Pichia anomala）,命名为AR2016。（2）菌株AR2016粗蛋白质含量为59.56%,含有17种氨基酸,其最佳培养条件为:初始pH 5.0,生长温度28oC,转速180 r/min。试验二:通过测定异常毕赤酵母耐热、耐胆盐、耐胃肠液能力评价其有效性。为了评价异常毕赤酵母安全性,先选择20只昆明小鼠,随机分为2组（每组10只）,雌雄各占1/2。按最大灌胃容量20 mL/kg进行7 d经口毒性试验,对照组灌喂生理盐水,试验组灌喂2×109 cfu/mL异常毕赤酵母菌液;再选择40...
【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：93 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略词表
第一部分 文献综述
1.断奶应激对仔猪生长与健康的影响
1.1 断奶对仔猪消化道的影响
1.2 断奶对仔猪肠道结构及免疫功能的影响
1.3 断奶对仔猪微生物区系的影响
2.酵母资源及其鉴定方法
2.1 酵母资源
2.2 酵母的鉴定方法
2.2.1 传统鉴定方法
2.2.2 分子生物学鉴定方法
3.酵母的有效性性及安全性
4.酵母相关的主要产品
4.1 活性酵母
4.2 酵母提取物
4.3 酵母培养物
4.4 酵母发酵饲料
5.酵母对仔猪上的益生作用
5.1 促进仔猪消化道健康
5.2 增强仔猪肠道免疫功能
5.3 保护仔猪肠道屏障完整性
5.4 维持仔猪肠道微生物区系平衡
6.产朊假丝酵母及其应用
7.异常毕赤酵母及其应用
8.研究目的和意义
第二部分 引言
第三部分 试验研究
第一章 异常毕赤酵母AR_(2016) 菌株分离鉴定及其优化培养
1.材料与方法
1.1 试验材料与仪器
1.2 培养基
1.3 样品采集与菌株分离鉴定
1.3.1 样品采集
1.3.2 菌株分离
1.3.3 26S rDNA鉴定
1.4 菌株AR_(2016) 生物量及粗蛋白和氨基酸的测定
1.5 菌株AR_(2016) 嗜杀活性的检测方法
1.6 菌株AR_(2016) 培养条件的优化
1.6.1 菌株AR_(2016) 种子液的制备
1.6.2 初始pH值对菌株AR_(2016) 生长的影响
1.6.3 培养温度对菌株AR_(2016) 生长的影响
1.6.4 培养转速对菌株AR_(2016) 生长的影响
1.7 数据处理
2.结果与分析
2.1 菌株的特征
2.1.1 菌株的菌落特征
2.1.2 菌株的细胞形态
2.1.3 菌株AR_(2016) 生理生化特点
2.2 菌株AR_(2016) 分子生物学鉴定
2.2.1 BLAST分析
2.2.2 构建系统发育树
2.3 菌株AR_(2016) 生物量、粗蛋白质和氨基酸的含量
2.4 菌株AR_(2016) 的嗜杀活性
2.5 菌株AR_(2016) 培养条件的优化
2.5.1 初始pH值对菌株AR_(2016) 生长的影响
2.5.2 温度对菌株AR_(2016) 生长的影响
2.5.3 转速对菌株AR_(2016) 生长的影响
3.讨论
4.小结
第二章 异常毕赤酵母AR_(2016) 菌株有效性与安全性评价
1.材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 供试菌株
1.1.2 培养基
1.1.3 试剂与仪器
1.2 试验动物及其饲养管理
1.3 试验方法
1.3.1 菌株AR_(2016) 的热耐受能力
1.3.2 菌株AR_(2016) 的酸耐受能力
1.3.3 菌株AR_(2016) 的猪胆盐耐受能力
1.3.4 配制人工胃液和人工肠液
1.3.5 模拟人工胃肠液
1.3.6 7d经口急性毒性试验
1.3.7 28d经口急性毒性试验
1.3.8 样品采集
1.3.9 生化指标及血常规测定
1.4 数据处理
2.结果与分析
2.1 菌株AR_(2016) 的热耐受能力
2.2 菌株AR_(2016) 的酸耐受能力
2.3 菌株AR_(2016) 的猪胆盐耐受能力
2.4 模拟人工胃肠液耐受能力
2.5 异常毕赤酵母AR_(2016) 菌株的毒性和易位性
2.6 口服异常毕赤酵母AR_(2016) 菌株后小鼠血清生化指标检测结果
2.7 口服异常毕赤酵母AR_(2016) 菌株后小鼠血常规测定结果
2.8 口服异常毕赤酵母AR_(2016) 菌株后小鼠血清细胞因子测定结果
3.讨论
3.1 异常毕赤酵母AR_(2016) 菌株的有效性
3.2 异常毕赤酵母AR_(2016) 菌株的安全性
3.2.1 异常毕赤酵母AR_(2016) 菌株的毒性和易位性
3.2.2 异常毕赤酵母AR_(2016)菌株对昆明小鼠生理生化指标和血常规的影响
3.2.3 异常毕赤酵母AR_(2016) 菌株对昆明小鼠免疫功能的影响
4.小结
第三章 异常毕赤酵母AR_(2016) 对断奶仔猪生长与健康的影响研究
1.材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 试验菌株
1.1.2 主要试剂与仪器
1.2 试验设计与日粮组成
1.3 试验方法
1.3.1 样品采集
1.3.2 计算腹泻率
1.3.3 生长性能的测定
1.3.4 血浆生化指标的测定
1.3.5 回肠黏膜组织形态结构的测定
1.3.6 空肠和回肠黏膜屏障相关蛋白的相对表达量
1.3.7 空肠和回肠黏膜基因mRNA水平的相对表达量
1.3.8 盲肠微生物区系测序
1.3.9 空肠和回肠微生物脱羧酶的测定
1.4 数据分析
2.试验结果
2.1 异常毕赤酵母AR_(2016) 菌株对断奶仔猪生长性能和腹泻率的影响
2.2 异常毕赤酵母AR_(2016) 菌株对断奶仔猪血浆生化指标的影响
2.3 异常毕赤酵母AR_(2016) 菌株对断奶仔猪消化酶活性的影响
2.4 异常毕赤酵母AR_(2016) 菌株对断奶仔猪回肠黏膜组织形态的影响
2.5 异常毕赤酵母AR_(2016) 菌株对断奶仔猪肠道黏膜蛋白水平表达的影响
2.6 异常毕赤酵母AR_(2016) 菌株对断奶仔猪肠道黏膜mRNA水平表达的影响
2.7 异常毕赤酵母AR_(2016) 对断奶仔猪盲肠微生物区系的影响
2.8 异常毕赤酵母AR_(2016) 对断奶仔猪肠道微生物脱羧酶活性的影响
3.讨论
3.1 异常毕赤酵母AR_(2016) 对断奶仔猪生长性能和腹泻率的影响
3.2 异常毕赤酵母AR_(2016) 对断奶仔猪血清生化指标的影响
3.3 异常毕赤酵母AR_(2016) 对断奶仔猪消化酶活性的影响
3.4 异常毕赤酵母AR_(2016) 对断奶仔猪回肠黏膜组织形态的影响
3.5 异常毕赤酵母AR_(2016) 对断奶仔猪肠道黏膜相关蛋白蛋相对表达量的影响
3.6 异常毕赤酵母AR_(2016) 对断奶仔猪肠道黏膜相关基因mRNA相对表达量的影响
3.7 异常毕赤酵母AR_(2016) 对断奶仔猪盲肠微生物区系的影响
3.8 异常毕赤酵母AR_(2016) 对断奶仔猪微生物脱羧酶的影响
4.小结
第四部分 结论与创新点及展望
1.结论
2.创新点
3.有待进一步解决的问题
参考文献
附录
致谢
个人简历
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪肠上皮紧密连接蛋白研究进展[J]. 宗秋芳,钦伟云,霍永久,吴圣龙,包文斌. 浙江农业学报. 2018(08)
[2]猪源益生菌对胃肠道环境、高温的耐受性以及体外抑菌效果研究[J]. 宋献艺,张凯,周胜花. 黑龙江畜牧兽医. 2018(13)
[3]4株乳酸菌对模拟胃肠环境的耐受性及生长特性研究[J]. 云月英,徐娟,张小利. 中国酿造. 2018(03)
[4]仔猪断奶应激对肠道功能和组织结构影响的研究[J]. 于光辉,姜建阳,王西彤,张华杰,耿梅,宋春阳. 中国兽医杂志. 2018(02)
[5]微生态制剂调节便秘、腹泻人群肠道菌群结构与产短链脂肪酸关键菌属的相关性[J]. 臧凯丽,江岩,孙勇,陈庆森,赵林森,赵培,崔文静,马新颖,闫亚丽. 食品科学. 2018(05)
[6]传统发酵食品中耐胃肠道环境乳酸菌的筛选及其在酸乳发酵中的应用[J]. 孙敏,袁凤霞,曹晓虹,刘建利,王军节,张琇,李靖宇,覃璐琪,邓鹏程,王晓丹. 食品与发酵工业. 2018(03)
[7]谷氨酸和天冬氨酸对断奶仔猪生长性能和肠道功能的影响[J]. 黎育颖,尹杰,王利剑,何流琴,王倩,吴飞,姚继明,范文君,李铁军. 动物营养学报. 2017(11)
[8]益生菌安全性和有效性评价方法的研究进展[J]. 冯媛媛,乔琳,姚宏明,刘蕊,介琳霞,高长斌. 中国畜牧兽医. 2017(07)
[9]日粮中添加酿酒酵母对断奶仔猪小肠黏膜消化酶及免疫功能基因mRNA表达水平的影响[J]. 王斌星,何欢,郭春华,张斌,高彦华,杨加豹,陈瑾. 黑龙江畜牧兽医. 2017(13)
[10]微生态制剂在畜禽饲料中的合理使用[J]. 王洪亮. 畜牧兽医科技信息. 2017(05)
博士论文
[1]富锌益生素对蛋鸡生产性能及免疫功能的影响[D]. 王金和.吉林大学 2017
[2]社群环境下的短尾猴肠道微生物群落结构及适应进化[D]. 孙丙华.安徽大学 2016
硕士论文
[1]益生菌制剂对断奶仔猪肠道黏膜屏障功能的影响及其机理的研究[D]. 庞敏.中国农业科学院 2016
[2]益生菌复合微生态制剂的制备工艺及免疫功能研究[D]. 田木.吉林大学 2015
[3]复合微生态制剂在养猪生产上的应用研究[D]. 宋良敏.中国农业科学院 2012
[4]异常毕赤酵母（Pichia anomala）HN1-2菌株产单细胞蛋白和嗜杀因子的研究[D]. 孙怀永.中国海洋大学 2012
[5]酵母培养物对夏季生长育肥猪生产性能、抗氧化及内分泌相关指标和胴体品质的影响[D]. 田文生.南京农业大学 2011
[6]新疆维吾尔族、哈萨克族2型糖尿病人群肠道菌群结构特征研究[D]. 刘晶.新疆医科大学 2011
[7]产嗜杀因子海洋酵母多样性的初步研究[D]. 孙清荣.中国海洋大学 2010
[8]产生GABA酵母菌资源多样性和分子系统学研究[D]. 徐晓波.浙江师范大学 2010
本文编号：3438822
【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：93 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略词表
第一部分 文献综述
1.断奶应激对仔猪生长与健康的影响
1.1 断奶对仔猪消化道的影响
1.2 断奶对仔猪肠道结构及免疫功能的影响
1.3 断奶对仔猪微生物区系的影响
2.酵母资源及其鉴定方法
2.1 酵母资源
2.2 酵母的鉴定方法
2.2.1 传统鉴定方法
2.2.2 分子生物学鉴定方法
3.酵母的有效性性及安全性
4.酵母相关的主要产品
4.1 活性酵母
4.2 酵母提取物
4.3 酵母培养物
4.4 酵母发酵饲料
5.酵母对仔猪上的益生作用
5.1 促进仔猪消化道健康
5.2 增强仔猪肠道免疫功能
5.3 保护仔猪肠道屏障完整性
5.4 维持仔猪肠道微生物区系平衡
6.产朊假丝酵母及其应用
7.异常毕赤酵母及其应用
8.研究目的和意义
第二部分 引言
第三部分 试验研究
第一章 异常毕赤酵母AR_(2016) 菌株分离鉴定及其优化培养
1.材料与方法
1.1 试验材料与仪器
1.2 培养基
1.3 样品采集与菌株分离鉴定
1.3.1 样品采集
1.3.2 菌株分离
1.3.3 26S rDNA鉴定
1.4 菌株AR_(2016) 生物量及粗蛋白和氨基酸的测定
1.5 菌株AR_(2016) 嗜杀活性的检测方法
1.6 菌株AR_(2016) 培养条件的优化
1.6.1 菌株AR_(2016) 种子液的制备
1.6.2 初始pH值对菌株AR_(2016) 生长的影响
1.6.3 培养温度对菌株AR_(2016) 生长的影响
1.6.4 培养转速对菌株AR_(2016) 生长的影响
1.7 数据处理
2.结果与分析
2.1 菌株的特征
2.1.1 菌株的菌落特征
2.1.2 菌株的细胞形态
2.1.3 菌株AR_(2016) 生理生化特点
2.2 菌株AR_(2016) 分子生物学鉴定
2.2.1 BLAST分析
2.2.2 构建系统发育树
2.3 菌株AR_(2016) 生物量、粗蛋白质和氨基酸的含量
2.4 菌株AR_(2016) 的嗜杀活性
2.5 菌株AR_(2016) 培养条件的优化
2.5.1 初始pH值对菌株AR_(2016) 生长的影响
2.5.2 温度对菌株AR_(2016) 生长的影响
2.5.3 转速对菌株AR_(2016) 生长的影响
3.讨论
4.小结
第二章 异常毕赤酵母AR_(2016) 菌株有效性与安全性评价
1.材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 供试菌株
1.1.2 培养基
1.1.3 试剂与仪器
1.2 试验动物及其饲养管理
1.3 试验方法
1.3.1 菌株AR_(2016) 的热耐受能力
1.3.2 菌株AR_(2016) 的酸耐受能力
1.3.3 菌株AR_(2016) 的猪胆盐耐受能力
1.3.4 配制人工胃液和人工肠液
1.3.5 模拟人工胃肠液
1.3.6 7d经口急性毒性试验
1.3.7 28d经口急性毒性试验
1.3.8 样品采集
1.3.9 生化指标及血常规测定
1.4 数据处理
2.结果与分析
2.1 菌株AR_(2016) 的热耐受能力
2.2 菌株AR_(2016) 的酸耐受能力
2.3 菌株AR_(2016) 的猪胆盐耐受能力
2.4 模拟人工胃肠液耐受能力
2.5 异常毕赤酵母AR_(2016) 菌株的毒性和易位性
2.6 口服异常毕赤酵母AR_(2016) 菌株后小鼠血清生化指标检测结果
2.7 口服异常毕赤酵母AR_(2016) 菌株后小鼠血常规测定结果
2.8 口服异常毕赤酵母AR_(2016) 菌株后小鼠血清细胞因子测定结果
3.讨论
3.1 异常毕赤酵母AR_(2016) 菌株的有效性
3.2 异常毕赤酵母AR_(2016) 菌株的安全性
3.2.1 异常毕赤酵母AR_(2016) 菌株的毒性和易位性
3.2.2 异常毕赤酵母AR_(2016)菌株对昆明小鼠生理生化指标和血常规的影响
3.2.3 异常毕赤酵母AR_(2016) 菌株对昆明小鼠免疫功能的影响
4.小结
第三章 异常毕赤酵母AR_(2016) 对断奶仔猪生长与健康的影响研究
1.材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 试验菌株
1.1.2 主要试剂与仪器
1.2 试验设计与日粮组成
1.3 试验方法
1.3.1 样品采集
1.3.2 计算腹泻率
1.3.3 生长性能的测定
1.3.4 血浆生化指标的测定
1.3.5 回肠黏膜组织形态结构的测定
1.3.6 空肠和回肠黏膜屏障相关蛋白的相对表达量
1.3.7 空肠和回肠黏膜基因mRNA水平的相对表达量
1.3.8 盲肠微生物区系测序
1.3.9 空肠和回肠微生物脱羧酶的测定
1.4 数据分析
2.试验结果
2.1 异常毕赤酵母AR_(2016) 菌株对断奶仔猪生长性能和腹泻率的影响
2.2 异常毕赤酵母AR_(2016) 菌株对断奶仔猪血浆生化指标的影响
2.3 异常毕赤酵母AR_(2016) 菌株对断奶仔猪消化酶活性的影响
2.4 异常毕赤酵母AR_(2016) 菌株对断奶仔猪回肠黏膜组织形态的影响
2.5 异常毕赤酵母AR_(2016) 菌株对断奶仔猪肠道黏膜蛋白水平表达的影响
2.6 异常毕赤酵母AR_(2016) 菌株对断奶仔猪肠道黏膜mRNA水平表达的影响
2.7 异常毕赤酵母AR_(2016) 对断奶仔猪盲肠微生物区系的影响
2.8 异常毕赤酵母AR_(2016) 对断奶仔猪肠道微生物脱羧酶活性的影响
3.讨论
3.1 异常毕赤酵母AR_(2016) 对断奶仔猪生长性能和腹泻率的影响
3.2 异常毕赤酵母AR_(2016) 对断奶仔猪血清生化指标的影响
3.3 异常毕赤酵母AR_(2016) 对断奶仔猪消化酶活性的影响
3.4 异常毕赤酵母AR_(2016) 对断奶仔猪回肠黏膜组织形态的影响
3.5 异常毕赤酵母AR_(2016) 对断奶仔猪肠道黏膜相关蛋白蛋相对表达量的影响
3.6 异常毕赤酵母AR_(2016) 对断奶仔猪肠道黏膜相关基因mRNA相对表达量的影响
3.7 异常毕赤酵母AR_(2016) 对断奶仔猪盲肠微生物区系的影响
3.8 异常毕赤酵母AR_(2016) 对断奶仔猪微生物脱羧酶的影响
4.小结
第四部分 结论与创新点及展望
1.结论
2.创新点
3.有待进一步解决的问题
参考文献
附录
致谢
个人简历
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪肠上皮紧密连接蛋白研究进展[J]. 宗秋芳,钦伟云,霍永久,吴圣龙,包文斌. 浙江农业学报. 2018(08)
[2]猪源益生菌对胃肠道环境、高温的耐受性以及体外抑菌效果研究[J]. 宋献艺,张凯,周胜花. 黑龙江畜牧兽医. 2018(13)
[3]4株乳酸菌对模拟胃肠环境的耐受性及生长特性研究[J]. 云月英,徐娟,张小利. 中国酿造. 2018(03)
[4]仔猪断奶应激对肠道功能和组织结构影响的研究[J]. 于光辉,姜建阳,王西彤,张华杰,耿梅,宋春阳. 中国兽医杂志. 2018(02)
[5]微生态制剂调节便秘、腹泻人群肠道菌群结构与产短链脂肪酸关键菌属的相关性[J]. 臧凯丽,江岩,孙勇,陈庆森,赵林森,赵培,崔文静,马新颖,闫亚丽. 食品科学. 2018(05)
[6]传统发酵食品中耐胃肠道环境乳酸菌的筛选及其在酸乳发酵中的应用[J]. 孙敏,袁凤霞,曹晓虹,刘建利,王军节,张琇,李靖宇,覃璐琪,邓鹏程,王晓丹. 食品与发酵工业. 2018(03)
[7]谷氨酸和天冬氨酸对断奶仔猪生长性能和肠道功能的影响[J]. 黎育颖,尹杰,王利剑,何流琴,王倩,吴飞,姚继明,范文君,李铁军. 动物营养学报. 2017(11)
[8]益生菌安全性和有效性评价方法的研究进展[J]. 冯媛媛,乔琳,姚宏明,刘蕊,介琳霞,高长斌. 中国畜牧兽医. 2017(07)
[9]日粮中添加酿酒酵母对断奶仔猪小肠黏膜消化酶及免疫功能基因mRNA表达水平的影响[J]. 王斌星,何欢,郭春华,张斌,高彦华,杨加豹,陈瑾. 黑龙江畜牧兽医. 2017(13)
[10]微生态制剂在畜禽饲料中的合理使用[J]. 王洪亮. 畜牧兽医科技信息. 2017(05)
博士论文
[1]富锌益生素对蛋鸡生产性能及免疫功能的影响[D]. 王金和.吉林大学 2017
[2]社群环境下的短尾猴肠道微生物群落结构及适应进化[D]. 孙丙华.安徽大学 2016
硕士论文
[1]益生菌制剂对断奶仔猪肠道黏膜屏障功能的影响及其机理的研究[D]. 庞敏.中国农业科学院 2016
[2]益生菌复合微生态制剂的制备工艺及免疫功能研究[D]. 田木.吉林大学 2015
[3]复合微生态制剂在养猪生产上的应用研究[D]. 宋良敏.中国农业科学院 2012
[4]异常毕赤酵母（Pichia anomala）HN1-2菌株产单细胞蛋白和嗜杀因子的研究[D]. 孙怀永.中国海洋大学 2012
[5]酵母培养物对夏季生长育肥猪生产性能、抗氧化及内分泌相关指标和胴体品质的影响[D]. 田文生.南京农业大学 2011
[6]新疆维吾尔族、哈萨克族2型糖尿病人群肠道菌群结构特征研究[D]. 刘晶.新疆医科大学 2011
[7]产嗜杀因子海洋酵母多样性的初步研究[D]. 孙清荣.中国海洋大学 2010
[8]产生GABA酵母菌资源多样性和分子系统学研究[D]. 徐晓波.浙江师范大学 2010
本文编号：3438822
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