金黄色葡萄球菌噬菌体的分离鉴定、生物学特性和比较基因组分析

发布时间：2021-10-16 09:10

　　奶牛乳房炎是造成当今国内外奶牛业经济损失的主要疾病之一。金黄色葡萄球菌可导致各种化脓性疾病、乳腺炎、败血症等,引起的奶牛乳房炎在临床上最难治愈并造成经济损失最大。临床上对奶牛乳房炎的治疗主要采用抗生素疗法,但抗生素对乳房炎的治愈率较低。噬菌体是一种感染细菌的病毒,仅能够裂解特定的细菌,而不会损伤机体细胞和正常菌群,可作为抗菌物质,用于治疗人畜的细菌感染性疾病。本文从患奶牛乳房炎的牛奶中分离了 2株葡萄球菌噬菌体分别命名为JS01和WH01,并从形态和生物学特性方面进行了鉴定。透射电镜表明JS01和WH01分别属于长尾噬菌体科（Siphoviridae）和肌尾噬菌体科（Myoviridae）,头部直径分别为50nm和200nm,尾部长度分别为200nm和40nm。WH01宿主谱广泛,不仅能裂解不同来源的金黄色葡萄球菌,也能裂解腐生葡萄球菌、产色葡萄球菌等。而JS01宿主谱较WH01窄,仅能裂解部分牛源的金黄色葡萄球菌。两株噬菌体均在MOI=1时,噬菌体滴度最大。JS01和WH01的潜伏期分别为10min和60min;生长期分别为30min和20min;平均裂解量为78PFU/cell和9... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：85 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一篇 文献综述
    第一章 奶牛金黄色葡萄球菌乳房炎研究进展
        1 奶牛乳房炎概况
        2 金黄色葡萄球菌的主要特性
        3 金黄色葡萄球菌的主要危害
        4 金黄色葡萄球菌的毒力因子
            4.1 非分泌型的金黄色葡萄球菌表面因子
            4.2 分泌型金黄色葡萄球菌毒力因子(毒素和酶)
        5 小结
        参考文献
    第二章 葡萄球菌噬菌体的研究进展
        1 金黄色葡萄球菌噬菌体的分类
            1.1 噬菌体的形态分类
            1.2 噬菌体的生活周期分类
        2 溶原噬菌体与细菌毒力的关系
            2.1 细菌溶原现象的发生
            2.2 前噬菌体在细菌感染致病方面的作用
            2.3 噬菌体进化和溶原转换
            2.4 前噬菌体影响毒素的产生和释放
        3 烈性噬菌体在治疗细菌性疾病的作用
            3.1 噬菌体治疗的历史
            3.2 噬菌体治疗的特点
            3.3 应用葡萄球菌噬菌体治疗的现状
        4 葡萄球菌噬菌体基因组的研究
            4.1 金黄色葡萄球菌噬菌体基因组分类
            4.2 金黄色葡萄球菌噬菌体基因组的特点
        5 结论
        参考文献
第二篇 试验研究
    第三章 金黄色葡萄球菌噬菌体分离及生物特性研究
        1 材料和方法
            1.1 试剂和仪器
            1.2 奶样的采集和保存
            1.3 金黄色葡萄球菌的分离鉴定
            1.4 金黄色葡萄球菌噬菌体的分离、诱导和纯化
            1.5 噬菌体形态的电镜观察
            1.6 宿主谱的测定
            1.7 最适感染复数测定
            1.8 一步生长曲线测定
            1.9 噬菌体稳定性测定
            1.10 噬菌体基因组的酶切图谱分析
            1.11 噬菌体颗粒的SDS-PAGE分析
        2 结果
            2.1 金黄色葡萄球菌的分离鉴定
            2.2 噬菌体的分离与纯化
            2.3 噬菌体形态
            2.4 宿主谱
            2.5 最适MOI的测定
            2.6 噬菌体一步生长曲线
            2.7 噬菌体的稳定性
            2.8 噬菌体核酸的酶切图谱
            2.9 噬菌体颗粒的SDS-PAGE
        3 讨论
        参考文献
    第四章 金黄色葡萄球菌噬菌体JSOI基因组测序和比较基因组学分析
        1 材料与方法
            1.1 噬菌体DNA的提取
            1.2 噬菌体全基因组序列测序,序列拼接
            1.3 基因组ORF的预测和序列的比对
        2 结果与讨论
            2.1 JS01基因组的一般特征
            2.2 JS01比较基因组分析
            2.3 比较基因组分析JS01与金黄色葡萄球菌和前噬菌体
        3 结论
        参考文献
    第五章 噬菌体JS01功能基因的表达纯化及活性分析
        1 材料和方法
            1.1 菌株和试剂
            1.2 模板DNA的提取
            1.3 引物设计和PCR扩增
            1.4 表达载体构建
            1.5 重组蛋白的表达
            1.6 纯化蛋白
            1.7 蛋白活性检测
        2 结果
            2.1 lys和sak的克隆
            2.2 lys和sak表达
            2.3 蛋白的活性检测
        3 讨论
        参考文献
全文总结
致谢
硕士期间发表论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]奶牛乳腺炎防治的免疫学和药理学机制[J]. 伍义行,黄利权.  乳业科学与技术. 2001(04)



本文编号：3439531