鸡TRAF3、TRAF6基因的克

发布时间：2021-10-16 09:52

　　先天免疫作为机体的第一道防线,在抵抗病原入侵和诱导后天免疫的过程中发挥着重要的作用。TRAF-3和TRAF-6作为TRAF家族的两个重要成员,其在哺乳动物的先天抗病毒免疫过程中发挥着重要的作用,但是其是否也参与了鸡的先天抗病毒免疫通路呢?本试验首先通过设计特异的引物对鸡的TRAF3.TRAF6基因的CDS区进行克隆；然后通过定量PCR技术,分析了TRAF-3和TRAF-6基因在鸡心、肝、脾等共11个组织中表达分布；接着我们分别转染双链的DNA-Poly（dA:dT）和双链的RNA-Poly（I:C）进入鸡的胚胎成纤维细胞,通过Real-time PCR检测TRAF3、TRAF6基因及其下游基因在鸡胚成纤维细胞抵抗外源的DNA和RNA免疫过程中的表达量的变化；同时我们采用细胞攻毒试验,分析了TRAF3、TRAF6基因及其下游基因在鸡胚成纤维细胞感染新城疫病毒后的表达变化,进一步确定其在鸡抗病毒免疫过程中的作用。最后我们选用将80只10日龄SPF白来航雏鸡,分别通过腹腔注射注射接种0.1m1中等毒力和标准强毒病毒稀释液病毒。在感染新城疫病毒后24h、48h、96h进行采样。其中攻毒组每次采... 

【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
常用词语缩写
1. 文献综述
    1.1 抗病育种与先天免疫
        1.1.1 抗病育种
        1.1.2 开展抗病育种的现实困难和目标
        1.1.3 抗病育种的主要手段
    1.2 先天免疫
        1.2.1 肿瘤坏死因子受体相关因子TRAFs(TRAF的家族)
        1.2.2 肿瘤坏死因子受体相关因子3/6的发现
        1.2.3 肿瘤坏死因子受体相关因子3/6分子结构,分子作用机制
        1.2.4 TRAF3的功能
        1.2.5 TRAF6的功能
    1.3 研究目的和意义
2. 材料和方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 试验样品
        2.1.2 试剂与耗材料
        2.1.3 主要仪器设备
        2.1.4 所用试剂的配制
    2.2 试验方法
        2.2.1 引物设计与合成
        2.2.2 总RNA提取
        2.2.3 cDNA模板的制备
        2.2.4 目的基因普通PCR的扩增
        2.2.5 DNA片段的克隆测序
        2.2.6 鸡胚成纤维细胞的制备
        2.2.7 转染鸡胚成纤维肌细胞
        2.2.8 鸡胚成纤维肌细胞RNA的提取及反转录
        2.2.9 实时荧光定量PCR
        2.2.10 统计分析
3. 结果与分析
    3.1 TRAF3和TRAF6的克隆、测序
        3.1.1 RNA抽提结果
        3.1.2 PCR扩增结果
        3.1.3 鸡TRAF3基因的克隆、氨基酸序列比对
        3.1.4 鸡TRAF6基因的克隆、序列
    3.2 TRAF3和T-AF6在鸡的肝、脾、肾等组织中的表达分布
    3.3 鸡胚成纤维细胞抗病毒免疫过程中的作用
        3.3.1 不同浓度的Ploy(dA：dT)转染CEF后TRAF3/6及其下游基因的表达情况
        3.3.2 不同浓度的Ploy(I：C)转染CEF后TRAF3/6及其下游基因不同时间点的表达情况
        3.3.3 Ploy(dA：dT)转染CEF后TRAF3/6及其下游基因不同时间点的表达情况
        3.3.4 Ploy(I：C)转染CEF后TRAF3/6及其下游基因不同时间点的表达情况
        3.3.5 NDV不同滴度M毒株转染CEF后TRAF3/6及其下游基因的表达情况
        3.3.6 不同毒力毒株感染转染CEF后TRAF3/6及其下游基因不同时间点的表达情况
        3.3.7 标准强毒NDV与中等毒力NDV感染机体后胸腺中TRAF3/6及其下游基因不同时间点的表达情况
        3.3.8 标准强毒NDV与中等毒力NDV感染机体后脾脏中TRAF3/6及其下游基因不同时间点的表达情况
        3.3.9 标准强毒NDV与中等毒力NDV感染机体后法氏囊中TRAF3/6及其下游基因不同时间点的表达情况
4 讨论
    4.1 TRAF3和TRAF6的克隆
    4.2 TRAF3和TRAF6在未感染机体中各个组织器官中的表达
    4.3 Poly(dA：dT)转染对TRAF3、TRAF6及其下游基因相对表达量的影响
    4.4 Poly(I：C)转染对TRAF3、TRAF6及其下游基因相对表达量的影响
    4.5 NDV不同滴度和强弱毒株NDV转染CEF后TRAF3、TRAF6及其下游基因相对表达量的影响
    4.6 新城疫病毒对不同时期免疫组织中TRAF3、TRAF6及其下游基因相对表达量的影响
5 结论
参考文献
致谢
攻读硕士期间发表论文情况


【参考文献】：
期刊论文
[1]新城疫病毒及其应用研究进展[J]. 尹俭俭,李秀景,陈娜娜,郑丛龙.  广东医学. 2011(18)
[2]鸡抗病育种研究策略[J]. 单艳菊,胡艳,陈雯雯,李慧芳,陈宽维.  动物医学进展. 2011(04)
[3]信号分子TRAF6的研究进展[J]. 许国莹,周红.  细胞与分子免疫学杂志. 2010(12)
[4]TRAF6在机体炎症和免疫应答中作用的研究进展[J]. 袁平,周翔宇.  现代免疫学. 2010(03)
[5]优质鸡的抗病育种研究[J]. 李海华,胡刚安.  上海畜牧兽医通讯. 2010(02)
[6]抗病毒天然免疫通路中IRF-3调控新机制[J]. 刘殿波,钱远宇,张七斤,陈忠斌.  中国生物化学与分子生物学报. 2009(12)
[7]胞内接头蛋白TRAFs家族[J]. 张万巧,王建.  生命科学. 2008(04)
[8]TRAF3和TRAF6在天然免疫中的作用[J]. 王桂芹,邓国华,李书华.  畜牧兽医科技信息. 2006(04)
[9]转基因技术在鸡的抗病育种中的研究应用进展[J]. 徐海平,张细权.  养禽与禽病防治. 2005(09)
[10]分子标记在动物抗病育种中的研究进展[J]. 晏光荣,马海明.  国外畜牧科技. 2001(06)



本文编号：3439593