猪原始生殖细胞的生物学特性及bFGF对其克隆形成率的影响

发布时间：2021-10-16 11:43

　　原始生殖细胞（Primordial germ cells,PGCs）经体外培养后可形成胚胎生殖细胞（Embryonic germ cells, EGCs）。胚胎发育初期,单能性的PGCs向生殖嵴迁移的同时大量增殖,进入生殖嵴后,PGCs经历了表观遗传重编程并最终分化为配子；在体外适宜的培养条件下,PGCs向生殖细胞的特化被阻断,重编程为能够自我更新且具多向分化潜能的EGCs。目前,对于该过程机制的研究主要集中在小鼠上,猪上的报道多是关于EGC建系的尝试和PGC特化相关的表观遗传学调控的研究,而对于猪PGCs本身生物学特性、特别是其重编程过程中多能性、生殖系标志基因表达模式的研究鲜有报道。然而,该方面的探索不仅有利于猪EGCs的最终建系,还对猪生殖细胞体内发育机制的阐述具有重要意义。鉴于此,本课题以猪PGC为研究对象,探索了PGCs体外重编程为EGCs过程中的生长行为变化,多能性、生殖系标志基因及信号通路受体的表达模式,以及bFGF在该过程中的作用,从而为探索猪PGCs体外重编程的作用机理和最终获得具有多能性且稳定传代的EGCs提供理论基础。主要研究结果如下：（1）通过组织切片的HE染色... 

【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校

【文章页数】：56 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
1 引言
    1.1 胚胎干细胞研究进展
        1.1.1 胚胎干细胞(ESCs)的研究进展
        1.1.2 猪胚胎干细胞(ESCs)的研究进展
    1.2 哺乳动物原始生殖细胞的发育
        1.2.1 原始生殖细胞的特化
        1.2.2 原始生殖细胞的迁移
        1.2.3 原始生殖细胞甲基化的去除与重建
    1.3 影响原始生殖细胞重编程的细胞因子
        1.3.1 白血病抑制因子(1euckemia inhibitory factor,Lif)
        1.3.2 干细胞因子(Stem Cell Factors,SCF)
        1.3.3 骨形态发生蛋白(bone morphogenetic proteins,BMPs)
        1.3.4 腺苷酸环化酶激活剂(Forskolin)
        1.3.5 碱性成纤维生长因子(basic Fibroblast Growth Factor,bFGF)
    1.4 本研究的目的和意义
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 主要仪器设备
        2.1.3 主要试剂及试剂盒
        2.1.4 常用试剂及配制
        2.1.5 主要的生物信息学网站及分析软件
    2.2 实验方法
        2.2.1 猪生殖嵴组织学切片制作
        2.2.2 猪生殖嵴的苏木素-伊红染色
        2.2.3 猪生殖嵴的碱性磷酸酶染色
        2.2.4 猪原始生殖细胞的培养
        2.2.5 猪原始生殖细胞的碱性磷酸酶检测
        2.2.6 猪原始生殖细胞的分化能力检测
        2.2.7 免疫荧光检测
        2.2.8 基因表达检测
3 结果
    3.1 猪胚胎生殖嵴的发育
    3.2 猪原始生殖细胞的生物学特性
        3.2.1 猪原始生殖细胞的获得
        3.2.2 猪原始生殖细胞的生长行为
        3.2.3 猪类胚胎生殖细胞的体外分化
        3.2.4 猪类胚胎生殖细胞的多能性及生殖系基因的表达
    3.3 bFGF对原始生殖细胞克隆形成的影响
        3.3.1 猪类胚胎生殖细胞表面受体的表达
        3.3.2 碱性成纤维生长因子对原始生殖细胞克隆形成的影响
4 讨论
    4.1 猪原始生殖细胞的生长行为
    4.2 bFGF对猪原始生殖细胞重编程的影响
    4.3 生殖系基因在猪类胚胎生殖细胞中的表达
        4.3.1 Blimp1在类胚胎生殖细胞中的表达
        4.3.2 Stella在类胚胎生殖细胞中的表达
        4.3.3 Ifitm3在类胚胎生殖细胞中的表达
        4.3.4 Nanos1在类胚胎生殖细胞中的表达
    4.4 多能性基因在猪类胚胎生殖细胞中的表达
5 结论
致谢
参考文献
攻读硕士期间发表的论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]The culture and establishment of embryonic germ（EG）cell lines from Chinese mini swine[J]. HSIAO CHIEN TSUNG.  Cell Research. 2003(03)



本文编号：3439750