围产期冷热应激对新生羔羊糖稳态调控的影响

发布时间：2021-10-16 12:08

　　研究背景:长期的寒冷和炎热的养殖环境可导致家畜生产力下降。围产期间环境温度应激可使新生羊出生体重降低,甚至导致死亡率的升高。我们前期在重庆地区的研究表明,季节性环境冷热因素能造成山羊新生儿体重显著降低,死亡率增高等负面影响。低出生体重的家畜在幼年和成年都呈现出难以恢复的代谢紊乱,其结果是饲料利用率和肉质品质的降低等,严重危害畜牧生产。虽然环境热应激的研究在羊上已较为深入,但针对冷应激在山羊生产上的研究却并不多见;围产期环境冷应激造成的低出生体重羔羊在其后天生长过程中代谢内分泌的影响还有待系统性研究。研究目标:阐释围产期冷热应激对低出生体重新生羊糖稳态的影响,并分析外周组织糖代谢调控机制的变化。研究方法:本研究采用围产期持续处于冬季、夏季、温和季节的重庆大足黑山羊新生羔羊,将其分成“冷应激组”、“热应激组”和“温和组”,检测羔羊出生后生长势能变化。通过对其葡萄糖耐量和胰岛素耐量的检测,探究羔羊活体水平葡萄糖及胰岛素代谢调控功能。再从分子层面探索肝脏和肌肉糖代谢相关调控通路,分析其糖稳态紊乱的机制。研究结果和结论:冷应激组和热应激组的羔羊体重较温和组羔羊出生体重下调了26.8%和29.8%... 

【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：78 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
ABSTRACT
英文缩写词
第1章 文献综述
    1.1 环境温度应激对畜牧业的影响
    1.2 低出生体重对胰岛素分泌的影响
        1.2.1 胰岛素分泌调控机制
        1.2.2 低出生体重损害胰岛素分泌功能
    1.3 低出生体重对外周组织糖脂稳态的影响
        1.3.1 胰岛素在外周组织的功能及调控机制
        1.3.2 低出生体重对肝脏糖稳态的影响
        1.3.3 低出生体重对山羊肌肉糖脂稳态的影响
    1.4 稳态失调的危害及其研究意义
    1.5 小结
第2章 前言
第3章 羔羊生长势能、糖耐量和胰岛素耐量的测定
    3.1 实验材料
        3.1.1 实验动物
        3.1.2 主要仪器设备
        3.1.3 溶液配制
    3.2 实验方法
        3.2.1 羔羊血瘘管手术
        3.2.2 葡萄糖耐量实验(GTT)
        3.2.3 胰岛素耐量实验(ITT)
        3.2.4 脂肪酸检测
        3.2.5 羔羊的解剖和组织保存
    3.3 实验结果
    3.4 数据处理
        3.4.1 羔羊0~28日龄内体重变化
        3.4.2 葡萄糖耐受实验(GTT)中羔羊血糖浓度和血浆胰岛素浓度的变化
        3.4.3 胰岛素耐受实验(ITT)中羔羊血糖浓度的变化
        3.4.4 三组羔羊的HOMA-IR
        3.4.5 羔羊血浆中游离脂肪酸的浓度
        3.4.6 羔羊解剖后的脏体比
    3.5 讨论
    3.6 小结
第4章 肝脏组织糖稳态检测
    4.1 实验材料
        4.1.1 实验动物
        4.1.2 主要试剂
        4.1.3 主要仪器设备
        4.1.4 溶液配制
    4.2 实验方法
        4.2.1 用Trizol法提取组织内的RNA
        4.2.2 琼脂糖凝胶电泳确定RNA质量
        4.2.3 引物序列合成
        4.2.4 反转录合成cDNA
        4.2.5 实时荧光定量PCR反应
        4.2.6 组织切片的制作和切片的HE染色
        4.2.7 蛋白免疫印迹
    4.3 数据处理
    4.4 实验结果
        4.4.1 肝脏的脂肪异位沉积情况
        4.4.2 琼脂糖凝胶电泳确定RNA质量
        4.4.3 胰岛素近端信号和葡萄糖转运信号的表达
        4.4.4 糖异生通路相关调控因子表达情况
        4.4.5 脂肪生成通路相关调控因子表达情况
        4.4.6 胰岛素信号相关的蛋白表达情况
    4.5 讨论
        4.5.1 围产期冷应激组羔羊IRS2表达量下调
        4.5.2 围产期冷应激组羔羊PPARγ表达量上调
        4.5.3 结论
    4.6 小结
第5章 肌肉组织糖脂稳态检测
    5.1 实验材料
        5.1.1 实验动物
        5.1.2 主要试剂
        5.1.3 溶液配制
    5.2 实验方法
        5.2.1 转录组测序
        5.2.2 用Trizol法提取组织内的RNA
        5.2.3 琼脂糖凝胶电泳确定RNA质量
        5.2.4 引物序列合成
        5.2.5 反转录合成cDNA
        5.2.6 实时荧光定量PCR反应
    5.3 数据处理
        5.3.1 转录组数据处理分析:
        5.3.2 荧光定量PCR实验数据处理分析
    5.4 实验结果
        5.4.1 肌肉组织RNA质量测定
        5.4.2 冷应激组与温和组差异基因数量
        5.4.3 较大Fold Change的差异基因
        5.4.4 qPCR对转录组结果的验证
        5.4.5 差异表达基因涉及的信号途径类别:
        5.4.6 胰岛素信号和脂肪转运调控信号的表达
    5.5 讨论
        5.5.1 低出生体重未直接影响肌肉胰岛素信号
        5.5.2 冷应激低出生体重羔羊血浆中游离脂肪酸含量上升
        5.5.3 围产期冷应激诱导肌肉内的氧化应激和胰岛素功能紊乱
        5.5.4 结论
    5.6 小结
第6章 结论
第7章 参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]山羊围产期的饲养管理技术要点[J]. 丛培强.  山东畜牧兽医. 2017(03)
[2]热应激影响家畜繁殖机能的机理及其调控研究进展[J]. 郭亮,张敏红.  中国畜牧兽医. 2008(09)
[3]宫内生长受限大鼠肝脏糖异生酶的表达增加与胰岛素抵抗[J]. 刘晓梅,卢岩,潘莉莉,李书琴.  中国当代儿科杂志. 2008(02)



本文编号：3439782