猪轮状病毒、猪札幌病毒和猪星状病毒三重PCR检测方法的建立及应用
发布时间：2021-10-19 00:12
为建立一种同时检测猪轮状病毒（PRoV）、猪札幌病毒（PoSaV）和猪星状病毒（PAstV）的三重PCR方法,本研究参考PRoV的VP6基因、PoSaV的RdRp基因以及PAstV的ORF1基因序列分别设计特异性引物,通过特异性、敏感性、重复性试验优化反应条件,建立了快速鉴别PRoV、PoSaV和PAstV的三重PCR方法。试验表明,该方法能特异性扩增PRoV、PoSaV、PAstV的目的片段,对猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪瘟病毒（CSFV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、伪狂犬病病毒（PRV）、猪圆环病毒2型（PCV2）等常见猪病病毒的检测结果均为阴性,特异性良好;PRoV、PoSaV和PAstV的检测限量分别为1.38×102、8.33×102和4.40×103拷贝数/μL,具有较好的敏感性。利用三重PCR和单重PCR方法同时对80份规模化猪场的临床腹泻样品进行检测,结果表明,3种病毒的样品阳性率均为5.00%,2种方法的检测结果相一致。本研究成功建立了同时PRoV、PoS...
【文章来源】：畜牧与兽医. 2020,52(11)北大核心
【文章页数】：6 页
【文章目录】：
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 毒株与临床病料样品
1.1.2 主要试剂
1.2 方法
1.2.1 引物设计与合成
1.2.2 RNA的提取与反转录
1.2.3 单重PCR扩增
1.2.4 三重PCR反应条件的优化
1.2.5 特异性试验
1.2.6 敏感性试验
1.2.7 重复性试验
1.2.8 临床样品检测
2 结果
2.1 单重PCR扩增
2.1 三重PCR反应条件的优化
2.2 特异性试验
2.3 敏感性试验
2.4 重复性试验
2.5 三重PCR检测方法的临床应用
3 讨论
【参考文献】：
期刊论文
[1]2015—2017年东北地区猪星状病毒ORF1b基因分子流行病学调查[J]. 杨丹,张备,朱金海,翟军军,孔凡志,孙东波. 黑龙江畜牧兽医. 2019(13)
[2]猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒和猪轮状病毒A多重荧光定量RT-PCR检测方法的建立[J]. 李军,蔡良语,陈兵,刘建利,孙洁,陈书琨,林庆燕,陶虹,吴绍强,卢体康,陈金顶,秦智锋. 中国预防兽医学报. 2018(09)
[3]国内猪群中札幌病毒的感染状况汇总（2007～2016年）[J]. 徐国栋,王磊. 中兽医学杂志. 2018(05)
[4]猪流行性腹泻病毒猪传染性胃肠炎病毒猪Delta冠状病毒和猪轮状病毒多重RT-PCR检测方法的建立[J]. 王睿敏,施开创,黎宗强,尹彦文,谢守玉,莫胜兰,陆文俊,屈素洁. 中国兽医科学. 2019(02)
[5]猪札幌病毒的研究进展[J]. 李晶娇,沈权,李饴,华修国. 微生物与感染. 2016(02)
[6]猪核转录因子C-Rel亚基的克隆及PRV体外感染PK-15细胞对C-Rel转录时相的影响[J]. 付梦瑾,朱玲,周远成,杨文宇,李新琼,徐志文. 中国兽医学报. 2014(12)
[7]猪A群轮状病毒和C群轮状病毒以及猪星状病毒多重RT-PCR同时检测方法的建立及应用[J]. 杨文宇,周远成,韩燕,陈蕾,廖春燕,付梦瑾,季洪伟,蔡雨涵,朱玲,徐志文,郭万柱. 中国兽医科学. 2014(04)
[8]猪流行性腹泻病毒、传染性胃肠炎病毒、A群轮状病毒和嵴病毒多重RT-PCR检测方法的建立及临床应用[J]. 霍金耀,郑逢梅,陈陆,余秋颖,常洪涛,陈文定,明星,郑关民,赵军,王川庆. 中国兽医学报. 2013(12)
[9]广西猪星状病毒分子流行病学调查[J]. 兰家暖,刘磊,郭旋,张民秀,卢冰霞,黄福标,覃熊慧,张宁,黄伟坚. 中国预防兽医学报. 2012(08)
[10]札幌病毒研究进展[J]. 吴琼,张艳,郑海学,殷宏. 畜牧兽医学报. 2011(06)
博士论文
[1]杯状病毒分子流行病学及病原与宿主互作机制研究[D]. 沈权.上海交通大学 2011
硕士论文
[1]2015～2016年中国部分地区猪轮状病毒感染检测及病毒分离与鉴定[D]. 乔成鹏.黑龙江八一农垦大学 2019
[2]猪病毒性腹泻六重RT-PCR检测方法的建立应用及猪流行性腹泻病毒的分离鉴定[D]. 丁光明.兰州大学 2019
[3]猪腹泻病原多重PCR检测方法的建立及主要病毒进化分析[D]. 孟丽.上海海洋大学 2017
[4]广西猪星状病毒分子流行病学调査及基因型分析[D]. 李勋杰.广西大学 2015
[5]检测五种腹泻相关病毒多重RT-PCR方法的建立和2013年9月～2014年10月广州地区腹泻病原谱调查[D]. 罗欣.南方医科大学 2015
[6]猪流行性腹泻的流行病学调查及免疫保护试验的研究[D]. 陈静.广西大学 2013
[7]猪札幌样病毒间接ELISA和荧光定量PCR检测方法的建立[D]. 陈琰.上海交通大学 2010
本文编号：3443776
【文章来源】：畜牧与兽医. 2020,52(11)北大核心
【文章页数】：6 页
【文章目录】：
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 毒株与临床病料样品
1.1.2 主要试剂
1.2 方法
1.2.1 引物设计与合成
1.2.2 RNA的提取与反转录
1.2.3 单重PCR扩增
1.2.4 三重PCR反应条件的优化
1.2.5 特异性试验
1.2.6 敏感性试验
1.2.7 重复性试验
1.2.8 临床样品检测
2 结果
2.1 单重PCR扩增
2.1 三重PCR反应条件的优化
2.2 特异性试验
2.3 敏感性试验
2.4 重复性试验
2.5 三重PCR检测方法的临床应用
3 讨论
【参考文献】：
期刊论文
[1]2015—2017年东北地区猪星状病毒ORF1b基因分子流行病学调查[J]. 杨丹,张备,朱金海,翟军军,孔凡志,孙东波. 黑龙江畜牧兽医. 2019(13)
[2]猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒和猪轮状病毒A多重荧光定量RT-PCR检测方法的建立[J]. 李军,蔡良语,陈兵,刘建利,孙洁,陈书琨,林庆燕,陶虹,吴绍强,卢体康,陈金顶,秦智锋. 中国预防兽医学报. 2018(09)
[3]国内猪群中札幌病毒的感染状况汇总（2007～2016年）[J]. 徐国栋,王磊. 中兽医学杂志. 2018(05)
[4]猪流行性腹泻病毒猪传染性胃肠炎病毒猪Delta冠状病毒和猪轮状病毒多重RT-PCR检测方法的建立[J]. 王睿敏,施开创,黎宗强,尹彦文,谢守玉,莫胜兰,陆文俊,屈素洁. 中国兽医科学. 2019(02)
[5]猪札幌病毒的研究进展[J]. 李晶娇,沈权,李饴,华修国. 微生物与感染. 2016(02)
[6]猪核转录因子C-Rel亚基的克隆及PRV体外感染PK-15细胞对C-Rel转录时相的影响[J]. 付梦瑾,朱玲,周远成,杨文宇,李新琼,徐志文. 中国兽医学报. 2014(12)
[7]猪A群轮状病毒和C群轮状病毒以及猪星状病毒多重RT-PCR同时检测方法的建立及应用[J]. 杨文宇,周远成,韩燕,陈蕾,廖春燕,付梦瑾,季洪伟,蔡雨涵,朱玲,徐志文,郭万柱. 中国兽医科学. 2014(04)
[8]猪流行性腹泻病毒、传染性胃肠炎病毒、A群轮状病毒和嵴病毒多重RT-PCR检测方法的建立及临床应用[J]. 霍金耀,郑逢梅,陈陆,余秋颖,常洪涛,陈文定,明星,郑关民,赵军,王川庆. 中国兽医学报. 2013(12)
[9]广西猪星状病毒分子流行病学调查[J]. 兰家暖,刘磊,郭旋,张民秀,卢冰霞,黄福标,覃熊慧,张宁,黄伟坚. 中国预防兽医学报. 2012(08)
[10]札幌病毒研究进展[J]. 吴琼,张艳,郑海学,殷宏. 畜牧兽医学报. 2011(06)
博士论文
[1]杯状病毒分子流行病学及病原与宿主互作机制研究[D]. 沈权.上海交通大学 2011
硕士论文
[1]2015～2016年中国部分地区猪轮状病毒感染检测及病毒分离与鉴定[D]. 乔成鹏.黑龙江八一农垦大学 2019
[2]猪病毒性腹泻六重RT-PCR检测方法的建立应用及猪流行性腹泻病毒的分离鉴定[D]. 丁光明.兰州大学 2019
[3]猪腹泻病原多重PCR检测方法的建立及主要病毒进化分析[D]. 孟丽.上海海洋大学 2017
[4]广西猪星状病毒分子流行病学调査及基因型分析[D]. 李勋杰.广西大学 2015
[5]检测五种腹泻相关病毒多重RT-PCR方法的建立和2013年9月～2014年10月广州地区腹泻病原谱调查[D]. 罗欣.南方医科大学 2015
[6]猪流行性腹泻的流行病学调查及免疫保护试验的研究[D]. 陈静.广西大学 2013
[7]猪札幌样病毒间接ELISA和荧光定量PCR检测方法的建立[D]. 陈琰.上海交通大学 2010
本文编号：3443776
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