犬细小病毒VP2蛋白的原核表达及其形成病毒样颗粒的免疫原性研究
发布时间：2021-10-20 13:25
犬细小病毒（Canine parvovirus,CPV）自1978年发现以来,在全世界迅速传播并严重威胁着养犬业的发展。可导致犬急性出血性肠炎和心肌炎,是发病率最高的犬病原体之一。目前许多血清学和分子试验都可用于此疾病的准确诊断,适当的临床治疗也可使患犬迅速痊愈,而接种疫苗始终是控制此病的最佳策略。尽管普遍用于免疫的犬细小弱毒疫苗在预防感染上是非常有效的,但其安全问题始终令人担忧,然而尚未有新型疫苗批准上市,因此急需开发一种安全有效的替代疫苗。病毒样颗粒（virus-like particles,VLPs）是由病毒衣壳蛋白自行装配的蛋白颗粒,因其缺少病毒DNA所以不具备宿主体内复制的能力。本实验利用大肠杆菌以低廉的成本获得了大量具有活性的重组VP2蛋白,此蛋白可自行装配成免疫原性良好的VLPs,主要分为以下三个部分:1.人工合成CPV VP2蛋白全长基因,构建表达载体pET30a-VP2后与伴侣蛋白质粒pTf16共转入BL21进行诱导表达,琼脂糖凝胶电泳结果表明已成功构建了VP2重组表达载体,对表达产物进行SDS-PAGE分析,可见大小约为70 kDa的VP2蛋白,与未转入pTf16的...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：49 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
菌液PCR鉴定和双酶切鉴定(a)菌液PCR鉴定.M：DL2000；1-2：JM109-pET30a-VP2；3-4：BL21-pET30a-VP2；5：阴性对照.(b)双酶切鉴定.M：DL5000；1：空载体对照；2：阴性对照；3-4：BamHI/XhoI双酶切JM109-pET30a-VP2
图 2-2 VP2 蛋白的 SDS-PAGE 分析er；1：pET30a 空载体对照；2：IPTG 诱导前的 BL21-pET30a-VPP2 全菌；4：诱导后的 BL21-pET30a-VP2 上清；5:诱导后的 BL21阿拉伯糖和 IPTG 诱导前的 BL21-pET30a-VP2-Tf16；7：L 阿拉伯P2-Tf16 全菌；8：L 阿拉伯糖诱导后的 BL21-pET30a-VP2-Tf16 上糖诱导后的 BL21-pET30a-VP2-Tf16 包涵体Figure 2-2 SDS-PAGE analysis of the VP2 protein expression protein molecular weight (MW) markers; Lane 1, pET30a vector contr-VP2 cells before induction of IPTG; Lane 3, induced BL21-pET30a-VET30a-VP2 cell lysate; Lane 5, inclusion body of induced BL21-pET3ET30a-VP2-Tf16 cells before induction of IPTG and L-Arabinose; LanVP2-Tf16 cells; Lane 8, induced BL21-pET30a-VP2-Tf16 cell lysate; body of induced BL21-pET30a-VP2-Tf16 cells
3-1 Ni-NTA 纯化后 VP2 蛋白的 SDS-PAGE 检测和反应原性后 VP2 蛋白的 SDS-PAGE 检测. M：蛋白 Marker；1：诱导前流穿液；4：洗液；5：洗脱液.（b）VP2 蛋白的反应原性分析诱导前的全菌样品；2：诱导后菌体上清；3：纯化后 VP2 蛋e 3-1 SDS-PAGE analysis and reactivity analysis of purified VP2alysis of purification of VP2 protein co-expressed with chaperoneane 2, induced cells lysate; Lane 3, flow buffer; Lane 4, wash bustern-blot analysis of purified VP2 protein with an anti-CPV polytion; Lane 2, induced cell lysate; Lane3, purified VP2 protein. This approximately 70 kDa. The Tf16 is approximately 56 kDa.样颗粒的体外组装条件摸索集状态可能受多种因素的影响，为了了解 pH 和 NaCl 检测不同溶液透析后的 VP2 蛋白。首先在相同的 NaCLPs 形成的影响。如图 3-2a 所示，在酸性条件下大部大于天然犬细小病毒的直径（25 nm），而相比之下，，在此条件下大部分 VLPs 的直径为 28.35 nm。所以
【参考文献】：
期刊论文
[1]犬细小病毒VP2蛋白在家蚕/昆虫细胞中表达[J]. 胡桂秋,郭鹤,梁红茹,冯昊,王化磊,郑学星,赵永坤,赵丽丽,杨松涛,夏咸柱. 中国病原生物学杂志. 2013(07)
[2]蛋白质分离纯化方法研究进展[J]. 吴少辉,刘光明. 中国药业. 2012(01)
[3]犬细小病毒:从起源到进化[J]. 赵建军,闫喜军,吴威. 微生物学报. 2011(07)
[4]中国国内首次检测到犬细小病毒CPV-2c[J]. 张仁舟,杨松涛,冯昊,崔苌盛,夏咸柱. 中国病原生物学杂志. 2010(04)
[5]犬细小病毒北京分离株VP2基因的表达与抗原性分析[J]. 曾妮,李刚,朱鸿飞,侯绍华,史利军. 中国畜牧兽医. 2010(04)
[6]犬细小病毒VP2基因的原核表达及间接ELISA方法的建立[J]. 李慕瑶,姜骞,刘家森,司昌德,韩凌霞,曲连东. 中国兽医科学. 2007(03)
硕士论文
[1]犬细小病毒VP2基因的克隆、表达及其重组蛋白的抗原性研究[D]. 陈胜男.新疆农业大学 2010
本文编号：3446982
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：49 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
菌液PCR鉴定和双酶切鉴定(a)菌液PCR鉴定.M：DL2000；1-2：JM109-pET30a-VP2；3-4：BL21-pET30a-VP2；5：阴性对照.(b)双酶切鉴定.M：DL5000；1：空载体对照；2：阴性对照；3-4：BamHI/XhoI双酶切JM109-pET30a-VP2
图 2-2 VP2 蛋白的 SDS-PAGE 分析er；1：pET30a 空载体对照；2：IPTG 诱导前的 BL21-pET30a-VPP2 全菌；4：诱导后的 BL21-pET30a-VP2 上清；5:诱导后的 BL21阿拉伯糖和 IPTG 诱导前的 BL21-pET30a-VP2-Tf16；7：L 阿拉伯P2-Tf16 全菌；8：L 阿拉伯糖诱导后的 BL21-pET30a-VP2-Tf16 上糖诱导后的 BL21-pET30a-VP2-Tf16 包涵体Figure 2-2 SDS-PAGE analysis of the VP2 protein expression protein molecular weight (MW) markers; Lane 1, pET30a vector contr-VP2 cells before induction of IPTG; Lane 3, induced BL21-pET30a-VET30a-VP2 cell lysate; Lane 5, inclusion body of induced BL21-pET3ET30a-VP2-Tf16 cells before induction of IPTG and L-Arabinose; LanVP2-Tf16 cells; Lane 8, induced BL21-pET30a-VP2-Tf16 cell lysate; body of induced BL21-pET30a-VP2-Tf16 cells
3-1 Ni-NTA 纯化后 VP2 蛋白的 SDS-PAGE 检测和反应原性后 VP2 蛋白的 SDS-PAGE 检测. M：蛋白 Marker；1：诱导前流穿液；4：洗液；5：洗脱液.（b）VP2 蛋白的反应原性分析诱导前的全菌样品；2：诱导后菌体上清；3：纯化后 VP2 蛋e 3-1 SDS-PAGE analysis and reactivity analysis of purified VP2alysis of purification of VP2 protein co-expressed with chaperoneane 2, induced cells lysate; Lane 3, flow buffer; Lane 4, wash bustern-blot analysis of purified VP2 protein with an anti-CPV polytion; Lane 2, induced cell lysate; Lane3, purified VP2 protein. This approximately 70 kDa. The Tf16 is approximately 56 kDa.样颗粒的体外组装条件摸索集状态可能受多种因素的影响，为了了解 pH 和 NaCl 检测不同溶液透析后的 VP2 蛋白。首先在相同的 NaCLPs 形成的影响。如图 3-2a 所示，在酸性条件下大部大于天然犬细小病毒的直径（25 nm），而相比之下，，在此条件下大部分 VLPs 的直径为 28.35 nm。所以
【参考文献】：
期刊论文
[1]犬细小病毒VP2蛋白在家蚕/昆虫细胞中表达[J]. 胡桂秋,郭鹤,梁红茹,冯昊,王化磊,郑学星,赵永坤,赵丽丽,杨松涛,夏咸柱. 中国病原生物学杂志. 2013(07)
[2]蛋白质分离纯化方法研究进展[J]. 吴少辉,刘光明. 中国药业. 2012(01)
[3]犬细小病毒:从起源到进化[J]. 赵建军,闫喜军,吴威. 微生物学报. 2011(07)
[4]中国国内首次检测到犬细小病毒CPV-2c[J]. 张仁舟,杨松涛,冯昊,崔苌盛,夏咸柱. 中国病原生物学杂志. 2010(04)
[5]犬细小病毒北京分离株VP2基因的表达与抗原性分析[J]. 曾妮,李刚,朱鸿飞,侯绍华,史利军. 中国畜牧兽医. 2010(04)
[6]犬细小病毒VP2基因的原核表达及间接ELISA方法的建立[J]. 李慕瑶,姜骞,刘家森,司昌德,韩凌霞,曲连东. 中国兽医科学. 2007(03)
硕士论文
[1]犬细小病毒VP2基因的克隆、表达及其重组蛋白的抗原性研究[D]. 陈胜男.新疆农业大学 2010
本文编号：3446982
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