利用ZFN技术制备牛口蹄疫病毒受体整合素β6基因敲除的核供体细胞系

发布时间：2021-10-21 00:46

　　口蹄疫（FMD）是由FMD病毒（FMDV）引起的牛、猪、羊等偶蹄动物发生的一种急性、热性、高度接触性传染病，国际兽医局将其列为“A类烈性传染病”之首，一旦爆发，必须捕杀感染及接触感染的动物，不仅造成巨大的经济损失，而且严重危害畜牧业的发展。目前，大多数流行FMD的国家以疫苗免疫为主的措施预防FMD。然而，FMDV具有7个血清型且变异快，不同血清型疫苗之间没有交叉免疫保护反应，故通过疫苗单一手段很难控制和根除FMD，因此科学家们在注重疫苗研发的同时，开始关注病毒和宿主之间的关系，尤其是病毒受体在病毒感染过程中的作用，期望通过敲除或沉默病毒的关键受体阻断病毒的感染，进而达到控制和根除FMD的目的。研究表明，整联蛋白（Integrin） αvβ6是FMDV感染并致病的最重要的病毒受体，它可与所有血清型的FMDV结合。敲除整联蛋白通用亚基αv基因的转基因小鼠死胎率高、生长发育异常且易发生肿瘤，因此，αv基因不是抗FMD研究的理想受体基因；β6是启动FMDV强毒感染的决定性受体亚基，敲除整联蛋白β6亚基基因的转基因小鼠生长发育正常。因此，敲除整联蛋白β6亚基是阻断病毒感染的关键途径，为研制控制和... 

【文章来源】：山东师范大学山东省

【文章页数】：50 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

ZFN结构及结合靶位点示意图

图 2：ZFN 介导的定点修饰2.3.1 锌指核酸酶介导的定点敲除非同源末端连接是一种DNA自发修复损伤的方式。DNA发生DSB时，通过修复，细胞将两个DNA末端连接起来，可能造成小片段DNA的添加或缺失，进

细胞铺培养皿第二天，细胞长至 50%左右，细胞呈梭形、多角形等典型的纤维细胞形态（图 1-1），第三天细胞长至 80%-90%，此时细胞几乎铺满单层细胞呈放射状、旋涡状等的走行形式（图 1-2）。传至 25 代左右，细胞生长缓慢变大，很难长满单层。共冻存 F0及 F1代原代培养细胞 89 管，以备后续实验使用


本文编号：3447914