山羊RanBP9和CD320基因克

发布时间：2021-10-21 05:13

　　精子介导转基因方法（sperm-mediated gene transfer,SMGT）是生产转基因动物的有效途径,具有简便、高效等特点,但机制至今不明确,成了限制这种方法发展运用的瓶颈和世界性难题,造成SMGT存在着极大的随机性和不确定性。目前国际上对此研究较少,且主要集中在CD4分子上。众多蛋白质之间在许多重要的生命活动中都是彼此协调和控制的,基因组中的编码蛋白质的基因之间存在着功能上的联系。我们前期研究证明CD4分子在山羊精子结合内化外源DNA过程中起到主要作用,并以其为诱饵蛋白,利用酵母双杂交系统,筛选与CD4相互作用的8个候选分子。本研究对其中两个主要的候选分子：RanBP9和CD320,进行基因克隆、序列分析、组织表达与基因多态性分析,为进一步揭示这些候选分子在山羊精子转运外源DNA的作用,深入研究精子介导基因转移的机制奠定基础。RanBP9（Ran binding protein9,Ran结合蛋白9）在胚胎干细胞中可以白行发育,且在精子和卵子发生过程中具有重要调节作用。CD320参与体内免疫反应,扮演受体重要角色,能够介导物质和信号的转移与转运。由于在山羊上这两个基因的研... 

【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：84 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
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第一章 文献综述
    1.1 CD4及相关分子的结构和功能研究新进展
        1.1.1 CD4分子研究新进展
        1.1.2 RanBP9研究新进展
        1.1.3 CD320研究新进展
    1.2 山羊品种(遗传资源)
        1.2.1 大足黑山羊
        1.2.2 南江黄羊
    1.3 基因多态性研究方法与分析
        1.3.1 聚合酶链式反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)
        1.3.2 基因多态性分析方法
第二章 引言
    2.1 研究背景与意义
    2.2 技术路线
第三章 山羊RanBP9基因克隆与组织表达分析
    3.1 材料
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 主要实验仪器
        3.1.3 主要试剂和溶液配制
        3.1.4 其他常用试剂
    3.2 试验方法
        3.2.1 组织总RNA的提取和检测
        3.2.2 反转录cDNA
        3.2.3 山羊RanBP9基因PCR扩增
        3.2.4 PCR产物回收纯化
        3.2.5 山羊RanBP9基因的克隆
        3.2.6 山羊RanBP9基因的生物信息学分析
        3.2.7 荧光定量PCR
    3.3 结果与分析
        3.3.1 RNA提取
        3.3.2 山羊RanBP9基因cDNA的扩增
        3.3.3 菌液PCR结果
        3.3.4 山羊RanBP9 cDNA序列测序拼接结果
        3.3.5 RanBP9生物信息学分析结果
        3.3.6 RanBP9荧光定量PCR溶解曲线和扩增曲线
        3.3.7 山羊不同组织中RanBP9基因的相对含量
    3.4 讨论
        3.4.1 山羊组织中总RNA提取
        3.4.2 引物设计与菌液鉴定
        3.4.3 RanBP9相关结构与功能信息
        3.4.4 半荧光定量PCR
        3.4.5 RanBP9基因的组织表达
第四章 山羊CD320基因克隆与组织表达分析
    4.1 试验材料
    4.2 试验方法
        4.2.1 引物设计
        4.2.2 PCR反应程序
        4.2.3 荧光定量PCR引物设计
        4.2.4 荧光定量PCR反应条件
    4.3 结果与分析
        4.3.1 RNA提取
        4.3.2 山羊CD320基因cDNA的扩增
        4.3.3 菌液PCR结果
        4.3.4 山羊CD320 cDNA序列测序拼接结果
        4.3.5 CD320 cDNA序列生物信息学分析结果
        4.3.6 CD320荧光定量PCR溶解曲线和扩增曲线
        4.3.7 山羊不同组织中CD320基因的相对含量
    4.4 讨论
        4.4.1 引物设计与菌液鉴定
        4.4.2 CD320相关结构与功能信息
        4.4.3 CD320基因的组织表达
第五章 山羊CD320基因多态性分析
    5.1 实验材料
        5.1.1 实验动物
        5.1.2 实验仪器：实验用仪器如表5-1所示
        5.1.3 试剂与药品
    5.2 实验方法
        5.2.1 全血DNA的提取
        5.2.2 山羊CD320基因的扩增
        5.2.3 PCR产物的回收与纯化
        5.2.4 纯化产物测序
        5.2.5 山羊CD320基因的聚丙烯酰胺凝胶电泳
    5.3 SSCP带型区分
    5.4 山羊CD320基因的克隆
        5.4.1 连接反应和转化
        5.4.2 转化子的筛选及PCR扩增鉴定
    5.5 统计分析方法
        5.5.1 等位基因频率和基因型频率的计算
        5.5.2 Hardy-Weinberg平衡检验
        5.5.3 遗传多态性分析
    5.6 结果与分析
        5.6.1 山羊全血基因组DNA提取结果
        5.6.2 山羊CD320基因片段的扩增结果
        5.6.3 山羊CD320基因的PCR-SSCP结果
        5.6.4 PCR产物的克隆
        5.6.5 CD320基因SNPs位点分析
        5.6.6 CD320基因遗传多态性分析
    5.7 讨论
        5.7.1 DNA提取的结果分析
        5.7.2 PCR扩增条件的优化
        5.7.3 普通PCR扩增结果的分析
        5.7.4 PCR-SSCP条件的优化
        5.7.5 山羊CD320基因的SNPs位点分析
        5.7.6 关于山羊CD320基因的遗传多样性分析
第六章 结论
参考文献
附录
致谢
在读期间参与的课题和发表的文章


【参考文献】：
期刊论文
[1]山羊FGFR-1基因的多态性分析[J]. 宋桃伟,蔡惠芬,罗卫星,刘若余,张依裕,陈志.  中国畜牧杂志. 2013(15)
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博士论文
[1]山羊繁殖性状的影响因素和遗传规律及分子调控机制研究[D]. 张春艳.华中农业大学 2010

硕士论文
[1]山羊PRLR基因多态性及其与产羔数相关性分析[D]. 张珂.四川农业大学 2009



本文编号：3448316